Professional Documents
Culture Documents
4 5 Методи Мікробіологічних Досліджень Поживні Середовища
4 5 Методи Мікробіологічних Досліджень Поживні Середовища
МІКРОБІОЛОГІЧНИХ
ДОСЛІДЖЕНЬ
К.Б.Н. ПОЛКОВЕНКО О.В.
МІКРОСКОПІЧНИЙ (БАКТЕРІОСКОПІЧНИЙ, ВІРУСОСКОПІЧНИЙ,
ПРОТОЗООСКОПІЧНИЙ) – ВИГОТОВЛЕННЯ Й ЗАБАРВЛЕННЯ МАЗКІВ
ІЗ ДОСЛІДЖУВАНОГО МАТЕРІАЛУ ВІД ХВОРОГО І ВИВЧЕННЯ ЙОГО
ПІД МІКРОСКОПОМ. ВІН ДАЄ ЗМОГУ ШВИДКО ВИЯВИТИ
ХАРАКТЕРНІ МОРФОЛОГІЧНІ ОСОБЛИВОСТІ ЗБУДНИКА Й МАЄ
ВАЖЛИВЕ ЗНАЧЕННЯ ПРИ ДІАГНОСТИЦІ ГОНОРЕЇ,
МЕНІГОКОКОВОГО МЕНІНГІТУ, ТУБЕРКУЛЬОЗУ, ЛЕПРИ, СИФІЛІСУ,
ПОВОРОТНОГО ТИФУ, ВІСПИ, МАЛЯРІЇ, ЛЕЙШМАНІОЗУ,
ТОКСОПЛАЗМОЗУ ТОЩО.
СТРУКТУРА СВІТЛОВОГО
МІКРОСКОПА
МЕХАНІЧНА ЧАСТИНА МІКРОСКОПА СКЛАДАЄТЬСЯ ЗІ ШТАТИВА, ТУБУСА,
РЕВОЛЬВЕРА, ПРЕДМЕТНОГО СТОЛИКА, МАКРОМЕТРИЧНОГО ГВИНТА (АБО
КРЕМАЛЬЄРИ) І МІКРОМЕТРИЧНОГО ГВИНТА. ШТАТИВ СКЛАДАЄТЬСЯ З
МАСИВНОЇ НІЖКИ – ОСНОВИ, НА ЯКУ СПИРАЄТЬСЯ ВЕСЬ МІКРОСКОП, І
ТУБУСОТРИМАЧА. ДО ТУБУСОТРИМАЧА ПРИКРІПЛЕНО ТУБУС (ЗОРОВА
ТРУБА), ЯКИЙ ПЕРЕСУВАЄТЬСЯ ВГОРУ І ВНИЗ ЗА ДОПОМОГОЮ
МАКРОМЕТРИЧНОГО І МІКРОМЕТРИЧНОГО ГВИНТІВ. ПЕРЕСУВАЮЧИ ТУБУС
ЗА ДОПОМОГОЮ ГВИНТІВ, ДОСЛІДЖУВАНИЙ ПРЕДМЕТ ПОПАДАЄ У ФОКУС
ОБ'ЄКТИВА. ЗА ДОПОМОГОЮ МАКРОГВИНТА ТУБУС ПЕРЕСУВАЄТЬСЯ НА
ВІДНОСНО ВЕЛИКУ ВІДСТАНЬ, А МІКРОГВИНТ ЗДІЙСНЮЄ НЕЗНАЧНІ
ПЕРЕМІЩЕННЯ. ДО ШТАТИВА ПРИКРІПЛЕНО ПРЕДМЕТНИЙ СТОЛИК
(КРУГЛИЙ АБО ПРЯМОКУТНИЙ). У БІЛЬШОСТІ СУЧАСНИХ МІКРОСКОПІВ
ЧАСТИНА ШТАТИВА З ПРЕДМЕТНИМ СТОЛИКОМ І ТУБУСОМ ВІДГИНАЄТЬСЯ
НАЗАД. У ЦЕНТРІ СТОЛИКА Є ОТВІР, НАД ЯКИМ КЛАДУТЬ ПРЕДМЕТНЕ
СКЕЛЬЦЕ З ОБ'ЄКТОМ, ВОНО ФІКСУЄТЬСЯ ДВОМА ЗАТИСКАЧАМИ, АБО
КЛЕМАМИ. ЗНИЗУ ДО ТУБУСА РУХОМО ПРИКРІПЛЕНО РЕВОЛЬВЕР –
ПЛАСТИНКУ З ТРЬОМА-ЧОТИРМА ОБ'ЄКТИВАМИ. ПОВЕРТАЮЧИ РЕВОЛЬВЕР,
МОЖНА ПІД НИЖНІЙ ОТВІР ТУБУСА ПОСТАВИТИ ОБ’ЄКТИВ, ПЕВНОЇ
КРАТНОСТІ ЗБІЛЬШЕННЯ.
ОСВІТЛЮВАЛЬНА ЧАСТИНА МІКРОСКОПА СКЛАДАЄТЬСЯ ІЗ
ДЗЕРКАЛА, КОНДЕНСОРА ТА ІРИС-ДІАФРАГМИ. ДЗЕРКАЛО
ЗАКРІПЛЕНЕ РУХОМО ПІД ПРЕДМЕТНИМ СТОЛИКОМ. З ОДНОГО
БОКУ ВОНО ПЛОСКЕ, А З ДРУГОГО – ВИГНУТЕ; ПЛОСКОЮ І
ВИГНУТОЮ ПОВЕРХНЕЮ КОРИСТУЮТЬСЯ ЗАЛЕЖНО ВІД
ДЖЕРЕЛА СВІТЛА І ХАРАКТЕРУ ОБ'ЄКТА. КОНДЕНСОР, ЩО
ЗНАХОДИТЬСЯ МІЖ ПРЕДМЕТНИМ СТОЛИКОМ І ДЗЕРКАЛОМ,
СКЛАДАЄТЬСЯ З КІЛЬКОХ ЛІНЗ. ІРИС-ДІАФРАГМА ЗАКРІПЛЕНА
НА НИЖНІЙ ПОВЕРХНІ КОНДЕНСОРА. ПРОМЕНІ ВІД ДЖЕРЕЛА
СВІТЛА ВІДБИВАЮТЬСЯ ДЗЕРКАЛОМ І СПРЯМОВУЮТЬСЯ В
КОНДЕНСОР. ЛІНЗИ КОНДЕНСОРА КОНЦЕНТРУЮТЬ СВІТЛОВІ
ПРОМЕНІ Й СПРЯМОВУЮТЬ ЇХ ЧЕРЕЗ ОТВІР ПРЕДМЕТНОГО
СТОЛИКА НА ДОСЛІДЖУВАНИЙ ПРЕДМЕТ ТА В ОБ'ЄКТИВ. ІРИС-
ДІАФРАГМА РЕГУЛЮЄ ШИРИНУ СВІТЛОВОГО ПУЧКА,
ЗБІЛЬШУЄ АБО ЗМЕНШУЄ ОСВІТЛЕННЯ ПРЕДМЕТА.
ОПТИЧНА ЧАСТИНА МІКРОСКОПА СКЛАДАЄТЬСЯ ІЗ СИСТЕМ ЛІНЗ
ОКУЛЯРА Й ОБ'ЄКТИВІВ. ОКУЛЯР ВСТАВЛЕНИЙ У ТУБУС ЗВЕРХУ, НА
ОПРАВІ ОКУЛЯРА Є ЦИФРИ, ЯКІ ПОКАЗУЮТЬ ЙОГО ЗБІЛЬШЕННЯ
(НАПРИКЛАД, ×7, ×10, ×15). ОБ'ЄКТИВ ЯВЛЯЄ СОБОЮ СИСТЕМУ ЛІНЗ,
ВПРАВЛЕНИХ У ТРУБКУ – ГІЛЬЗУ. ОБ'ЄКТИВИ ЗАКРІПЛЕНІ У РЕВОЛЬВЕРІ.
ВОНИ МОЖУТЬ ДАВАТИ МАЛЕ ЗБІЛЬШЕННЯ (ЦИФРИ НА ОПРАВІ ×7, ×8, ×10)
І ВЕЛИКЕ (ЦИФРИ НА ОПРАВІ ×40, ×90). ЩОБ ЗНАТИ ЗАГАЛЬНЕ
ЗБІЛЬШЕННЯ МІКРОСКОПА, СЛІД ПЕРЕМНОЖИТИ ЦИФРИ ОКУЛЯРА Й
ОБ'ЄКТИВА. ЯКЩО, НАПРИКЛАД, НА ОКУЛЯРІ ЦИФРА ×7, А НА ОБ'ЄКТИВІ
×10, ТО МІКРОСКОП ДАЄ ЗБІЛЬШЕННЯ В 70 РАЗІВ. КРІМ ОБ'ЄКТИВІВ
МАЛОГО І ВЕЛИКОГО ЗБІЛЬШЕННЯ, В РЕВОЛЬВЕРІ МІКРОСКОПА Є ЩЕ
ТАК ЗВАНИЙ ІМЕРСІЙНИЙ (ЛАТ. ІMMERSIO, ВІД IMMERGO – ЗАНУРЮЮ)
ОБ'ЄКТИВ, ЯКИЙ ПОЗНАЧАЄТЬСЯ БУКВАМИ «ОІ» (ОБ'ЄКТИВ ІМЕРСІЙНИЙ)
І ПРИЗНАЧЕНИЙ ДЛЯ РОЗГЛЯДУВАННЯ ПРЕДМЕТІВ І ОБ'ЄКТІВ ПРИ
ВЕЛИКОМУ ЗБІЛЬШЕННІ, КОЛИ ВВОДЯТЬ РІДИНУ (КЕДРОВУ ОЛІЮ,
ВАЗЕЛІН, ВОДНИЙ РОЗЧИН ГЛІЦЕРИНУ) МІЖ ПРЕДМЕТОМ І ОБ’ЄКТИВОМ
МІКРОСКОПА, ЩОБ ПІДВИЩИТИ ОСВІТЛЕНІСТЬ ЗОБРАЖЕННЯ.
• ВИСЯЧА КРАПЛЯ - МЕТОД МІКРОСКОПУВАННЯ ЖИВИХ БАКТЕРІЙ ПРИ ФІЗІОЛОГІЧНИХ УМОВАХ ЗРОСТАННЯ;
ДОЗВОЛЯЄ КІЛЬКАДЕННО СПОСТЕРІГАТИ ОБ'ЄКТ. ДЛЯ ПРИГОТУВАННЯ ВИСЯЧОЇ КРАПЛІ БЕРУТЬ ПІНЦЕТОМ
ПОКРИВНЕ СКЛО, ПРОВОДЯТЬ ЧЕРЕЗ ПОЛУМ'Я І ОСТУДЖУЮТЬ. У ЦЕНТР СКЛО НАНОСЯТЬ КРАПЛЮ
ДОСЛІДЖУВАНОГО МАТЕРІАЛУ, ЗВАЖЕНОГО В ІЗОТОНІЧНОМУ РОЗЧИНІ ХЛОРИДУ НАТРІЮ. ПОТІМ
ПОКРИВНЕ СКЛО ШВИДКО ПЕРЕВЕРТАЮТЬ КРАПЛЕЮ ВНИЗ І КЛАДУТЬ НА СТЕРИЛЬНЕ ПРЕДМЕТНЕ СКЛО З
ВЫШЛИФОВАННОЙ ЛУНКОЮ ПОСЕРЕДИНІ, КРАЇ ЯКОЇ ПОПЕРЕДНЬО ЗМАЩУЮТЬ ВАЗЕЛІНОМ. МОЖНА
НАКЛАСТИ ПРЕДМЕТНЕ СКЛО ПОКРИВНЕ І ПЕРЕВЕРНУТИ: КРАПЛЯ ВИЯВЛЯЄТЬСЯ ВИСИТЬ У ГЕРМЕТИЧНО
ІЗОЛЬОВАНОМУ ПРОСТОРІ (РИС.). ПРИ СЛАБКОМУ ЗБІЛЬШЕННЯ І ЗВУЖЕНОЇ ДІАФРАГМІ МІКРОСКОПА
ЗНАХОДЯТЬ КРАЙ КРАПЛІ, ДАЛІ ДОСЛІДЖУЮТЬ ПРЕПАРАТ ПРИ БІЛЬШ СИЛЬНОМУ ЗБІЛЬШЕННІ. ЩОБ
ОБМЕЖИТИ РУХЛИВІСТЬ МІКРООРГАНІЗМІВ, ЗАМІСТЬ ІЗОТОНІЧНОГО РОЗЧИНУ ХЛОРИДУ НАТРІЮ
ЗАСТОСОВУЮТЬ РОЗПЛАВЛЕНИЙ І ОХОЛОДЖЕНИЙ ДО T° 45° АГАР.
ПРИГОТУВАННЯ ПРЕПАРАТУ «РОЗЧАВЛЕНА КРАПЛЯ»
Neisseria
meningitidis
Бактеріоскопічний
метод
Neisseria
meningitidis
Бактеріоскопічний
метод
Neisseria
gonorrhoeae
Бактеріоскопічний
метод
БАКТЕРІОСКОПІЧНИЙ МЕТОД
Yersinia pestis
Бактеріоскопічний
метод
Bacillus anthracis
Бактеріоскопічний метод
Mycobacterium tuberculosis
Бактеріоскопічний метод
Streptococcus pneumoniae
Бактеріоскопічний метод
Clostridium pneumoniae
БАКТЕРІОЛОГІЧНИЙ МЕТОД
Neisseria meningitidis
Спиномозкова рідина
Серологічний
метод
Реакція аглютинації
Серологічний метод
Реакція аглютинації
Серологічний метод
Реакція аглютинації
Серологічний метод
РНГА
Серологічний метод
Реакція кільцепреципітації
Серологічний метод
ІФА
СЕРОЛОГІЧНИЙ МЕТОД
ІФА
Біологічний метод
Туберкульоз у гвінейських
Туберкульоз у кроликів
свинок
Алергічний метод
Проба Манту
Експрес-діагностика
РІФ
Клінічна мікробіологія – розділ медичної
мікробіології, який вивчає мікробні захворювання в
соматичних відділеннях усіх клінічних
спеціальностей.
Перед клінічною мікробіологією, яка здійснює
діагностику гнійно-септичних процесів, стоїть
широке коло завдань, які направлені на надання
допомогу клініцистам у діагностиці, лікуванні та
профілактиці інфекційних ускладнень.
Особливості гнійно-септичних захворювань у
нефінфекційній клініці – поліетіологічниість,
неспецифічність клінічних проявів – визначають провідну
роль мікробіологічних досліджень у розшифровуванні їх
етіологічної структури.
У сучасному неінфекційному стаціонарі позалікарняні та
внутрішньолікарняні гнійно-септичні процеси
зумовлюються великим набором збудників – понад 2000.
Найчастіше збудниками цієї групи є представники родів
Staphylococcus, Streptococcus, Bacteroides, родин
Enterobacteriaceae (Proteus, Klebsiella, Escherichia, Serratia,
Citrobacter, Hafnia та ін.), Pseudomonadaceae, Neisseriaceae
(роди Acinetobacter, Moraxella, Branchamella). В
урологічній і гінекологічній клініках збудниками
госпітальних інфекцій часто є представники родин
Mycoplasmataceae, Chlamydiaceae.
Належність умовно-патогенних бактерій до природної
флори організму людини створює ряд труднощів при
оцінці їх етіологічної значущості.
Умовно-патогенні мікроби можуть представляти
нормальну флору досліджуваних рідин і тканин,
контамінувати їх з оточуючого середовища. Тому для
правильної інтерпретації результатів дослідження
необхідно знати склад природної мікрофлори
досліджуваного взірця. У тих випадках, коли
досліджуваний матеріал у нормі стерильний (кров,
спиномозкова рідина, плевральна та синовіальна
рідина, ексудати), всі виділені з них мікрoорганізми
можуть вважатись збудниками захворювань.
Виділена чиста культура умовно-патогенних
мікрооррганізмів вважається збудником хвороби
при наявності таких показників:
- культура присутня в матеріалі з патологічного
вогнища у кількості 104-105 колонієутворюючих
одиниць (КУО) в 1 мл або 1 г;
- повторне виділення з аналогічного матеріалу тієї
самої культури;
- наростання у сироватці хворого антитіл до
автоштамів або культури, яку вважають вірогідним
збудником.
При збиранні матеріалу необхідно дотримуватись
певних правил:
- брати матеріал до початку антибактеріальної терапії
або через певний проміжок часу після введення
препарата, необхідний для його виведення з організму
(практично через 8-10 год після введення більшість
антибіотиків виводяться з організму);
- брати матеріал безпосередньо з вогнища інфекції або
досліджувати відповідні виділення;
- дотримуватись суворої асептики з метою запобігання
забруднення проби мікрофлорою оточуючого
середовища;
- матеріал збирають у стерильний посуд; клінічні зразки
для культивування анаеробів слід транспортувати в
лабораторію, максимально захищаючи від дії
атмосферного кисню; матеріал для мікробіологічного
дослідження транспортують у спеціальних біксах,
пеналах;
- транспортування нативного клінічного матеріалу в
лабораторію слід проводити в максимально короткі
строки. Якщо матеріал неможливо транспортувати зразу
же в лабораторії його слід зберігати в холодильнику або
використовувати транспортні середовища. При
тривалому зберіганні матеріалу відбувається загибель
найвибагливіших до живильних речовин видів мікробів,
розмноження менш вибагливих і тих, що швидко
ростуть, що призводить до порушення кількісних
співвідношень видів і деорієнтує лікаря-мікробіолога при
інтерпретації результатів;
- виділення вірусів, рикетсій, хламідій проводять у
спеціалізованих лабораторіях; У такі лабораторії
матеріал направляють у добре закритих контейнерах і
замороженому стані (сухий лід);
- до клінічного зразка, направленого в лабораторію,
додається супровідний документ, який містить
основні відомості для проведення мікробіологічного
дослідження.
Дослідження крові
Патогенез токсичного шоку
Схема бактеріологічного дослідження крові
Етіологія уретритів
Етіологія інфекцій сечовивідних шляхів
Патогенез уражень
Посів сечі за методом Голда
Оцінка результатів. Основне завдання при інтерпретації
отриманих даних полягає в доказі етіологічної ролі
мікроорганізмів, виділених з сечі. Ступінь бактеріурії дозволяє
диференціювати інфекційний процес у сечовивідних шляхах від
контамінації сечі нормальною мікрофлорою.
Оцінку проводять на підставі таких критеріїв:
1. Ступінь бактеріурії, яка не перевищує 103 КУО/мл сечі і яку
виявляють однократно, свідчить про відсутність запального
процесу і, як правило, є результатом контамінації сечі. Бактерії,
які знаходять повторно в таких самих кількостях свідчать про
персистуючу хронічну інфекцію.
2. Ступінь бактеріурії, яка дорівнює 104 КУО/мл, розцінюється як
сумнівний результат. Дослідження слід повторити.
3. Ступінь бактеріурії, яка дорівнює 105 КУО/мл сечі, вказує на
наявність запального процесу.
4. Зміна ступеня бактеріурії в процесі захворювання може бути
використано для контролю за перебігом процесу та ефективністю
терапії.
Дослідження цереброспінальної рідини
Етіологія менінгітів
Схема дослідження при інфекційних ураженнях
нервової системи
Верхні дихальні шляхи
Схема дослідженя матеріалу із дихальної системи
Розповсюдження інфекцій шкіри
Критерії кількісної оцінки мікробного росту при прямому
штриховому посіві тампоном ранового вмісту на 1/2 чашки Петрі
із щільним живильними середовищем:
І – дуже скудний ріст – піст тільки в рідких середдовищах, на
щільних живильних середовищах ріст відсутній;
ІІ – невелика кількіість - на щільному середовищі ріст до 10
колоній;
ІІІ – помірна кількість – на щільному середовищі ріст від 11 до
100 колоінй;
IV – велика кількість – ріст на щільному середовищі понад 100
колоній.
Ріст І-ІІ ступеня частіше свідчить про контамінацію, ІІІ-IV - про
етіологічну роль даного мікроба.
Рівень обсіменіння тканин у рані, який дорівнює 105 КУО/г, є
критичним.
Перевищення цього рівня вказує на велику вірогідність розвитку
гнійної інфекції і можливість генералізації інфекційного процесу.
Виділення жіночих статевих органів