ПРОТОКОЛ №1

Тема: Мікробіологічна лабораторія, устаткування та правила роботи. Будова біологічного

світлового мікроскопу та правила роботи з ним. Мікроскопія готових препаратів. Морфологія
мікроорганізмів. Приготування та забарвлення препаратів для мікроскопії. Прості та складні
методи забарвлення бактерій (забарвлення за Грамом).

Мета заняття: Ознайомитися зі структурою бактеріологічної лабораторії, її обладнанням та

правилами роботи в ній. Оволодіти технікою мікроскопіювання. Засвоїти методику виготовлення,
забарвлення та мікроскопіювання препаратів-мазків з культур мікроорганізмів.

1.Вкажіть методи діагностики, які використовуються в бактеріологічній лабораторії, і дайте їм

визначення.
Назва методу Характеристика методу Приклад
бактеріоскопічний метод, який використовується для
виявлення та ідентифікації бактерій за
допомогою мікроскопа.
бактеріологічний метод, який використовується для
(провідний метод) виявлення, ідентифікації та
характеристики бактерій.
Найпоширенішівметоди:
Посів на живильне середовище,
Мікроскопія, ПЛР
серологічний метод, який використовується для Серологічні реакції:
виявлення антитіл або антигенів у крові -реакції аглютинації
або інших біологічних рідинах. -реакції преципітації
-реакції нейтралізації
-реакції за участю
комплементу
алергічний це метод, який використовується для ставлять алергічні проби з
виявлення алергенів, що викликають певними алергенами
алергічну реакцію у пацієнта (туберкулін, антраксін, пестін,
малеін,).
біологічний полягає у зараженні досліджуваним Інфекційний матеріал вводять:
матеріалом лабораторних тварин. всередину, в дихальні шляхи,
внутрішньочеревно,
внутрішньовенно,
внутрішньом'язово,

2. Назвіть методи мікроскопії, які використовуються в бактеріологічній лабораторії.

Охарактеризуйте область їх застосування.
Світлова мікроскопія візуалізація досліджуваного об'єкта ґрунтується на вибірковому поглинанні
ним або елементами його структури світла з різною довжиною хвилі.
Фазово-контрастна мікроскопія метод отримання зображень в оптичних мікроскопах, при якому
зсув фази електромагнітної хвилі трансформується в контраст інтенсивності. Темнопольна
мікроскопія метод отримання зображення в оптичних та електронних мікроскопах, при якому на
об'єктив потрапляє тільки розсіяний пучок, а інтенсивний опорний пучок відсікається. Як наслідок,
зображення зразків виходить світлим на темному полі.
Поляризаційна мікроскопія контрастний метод в мікроскопії для підсилення контрасту, який
покращує якість зображення, отриманого за допомогою матеріалів із подвійним
променезаломленням.
Ультрафіолетова мікроскопія розділ мікроскопії з методами спостереження мікрооб'єктів, що
ґрунтується на використанні побудованих на застосуванні ультрафіолетових променів.
Електронна мікроскопія форма мікроскопії, при якій пучок електронів пропускає через
надзвичайно тонкий зразок, а потім взаємодіє зі зразком при проходженні через нього
3. Намалюйте рух променів в сухий і імерсійній системах світлового мікроскопа.

4. Назвіть морфологічні ознаки за якими розрізняються мікроорганізми.

Морфологічні ознаки за якими розрізняються мікроорганізми: форма; розмір; наявність оболонки,
джгутиків, спор; тип живлення; спосіб розмноження;
Схематичне зображення Назва морфологічної групи
морфологічної групи бактерій бактерій, коротка Приклад
характеристика
Коки (кулясті мікроорганізми)
Монококи гонорея
Диплококи збудники епідемічного
цереброспінального менінгіту,
гонореї, бленореї
Тетракоки при абсцесі спостерігаються в
мокроті
Сарцини умовно патогенні для людини
Стрептококи сепсис остеомієліт ревматизм
скарлатина
Стафілококи золотистий стафілокок спричиняє
гнійні зараження у людини (абсцес,
пневмонію, фурункульоз)
Палички (паличкоподібні мікроорганізми)
Бактерії campylobacter, helicobacter,
bifidobacterium, mycobacterium
Бацили bacillus antbracis
Клостридії clostridum tetani, clostridum
 botulinum
Звивисті мікроорганізми
Вібріони V. cbolerae, V. parabaemolyticus, V.
vulnsfucus
Спірили spirillum volutans, spirillum minus
Спірохети biorrelia, treponema, leptospira
5. Назвіть етапи приготування препарату мазка.
1. На середину чистого, знежиреного скла за допомогою бактеріальної петлі нанести каплю
фізіологічного розчину
2. Прожарити петлю в полум’я пальника
3. Стерильною петлею взяти трохи матеріалу з пробірки з культурою МКО
4. Ввести матеріал в краплю фізичного розчину на склі і круговими рухами розподілити рівномірним
шаром у вигляді кружка діаметром 10-15 мм
5. Підсушити препарат на повітрі
6. Зафіксувати препарат в полум’я пальника

6. Назвіть методи фіксації препаратів-мазків.

Фізичні – для фіксації використовується дія фізичних факторів, наприклад, температури (фіксація у полум’ї
пальника)

Хімічні – для фіксації використовується хімічна речовина або їх суміш (зневоднений метиловий спирт, 96%
этиловий спирт, суміш Нікіфорова та ін.
7. За кількістю використовуваних барвників методи забарвлення можна поділити на:
Прості – при забарвленні використовується лише один барник (наприклад, метиленовий синій, бриліантовий
зелений, фуксин та ін.)
Складні – при забарвленні використовується 2 і більше барвників (наприклад, забарвлення за Грамом, за
Цілем-Нільсеном, за Ожешко, за Нейсером, за Романовським-Гімза та ін.
8. Назвіть інгредієнти і послідовність їх нанесення при фарбуванні препарату за методом Грама.
№ Інгредієнт Експозиція
1 Геніцііаліновий фіолетовий 1-2 хв
2 Розчин Люголю 30 сек(до почорніння препарату)
3 Спирт етиловий до повного відходження
фіолетових струменів барвника
4 Вода
5 Фуксин 1-1,5 хв
6 Вода
Яка структура бактеріальної клітини диференціюється при фарбуванні за Грамом?

При фарбуванні за Грамом диференціюється клітинна стінка бактерій. Цей метод розрізняє бактерії на дві
великі групи: грампозитивні та грамнегативні, ґрунтуючись на хімічному складі та фізичних властивостях їх
клітинних стінок.
9. Порівняльна характеристика клітинної стінки грампозитивних і грамнегативних бактерій.
Грампозитивні Грамнегативні
20-80 нм 5-10 нм
Товщина
в малій кількості в більшій кількості до 20%
Ліпіди
до 90% до 5-9%
Пептидоглікан
+ -
Тейхоєві кислоти
багато мало
Магнієві солі РНК
 10. Приготувати препарати-мазки: а) з культури стафілокока; б) кишкової палички; в) суміші
стафілокока і кишкової палички, і забарвити за Грамом. Провести мікроскопію в імерсійній
системі і замалювати в протокол.

Стафілокок (Гр+) Кишкова паличка (Гр-) Суміш стафілококу та

кишкової палички

11. Тестові завдання для самоконтролю (вирішити та обґрунтувати відповідь).

Тест Пояснення
1. В бактеріологічну лабораторію доставлене Нефіксовані препарати «висяча крапля» та
блювотиння хворого з підозрою на холеру. З «роздавлена крапля» вивчаються за допомогою
патологічного матеріалу приготовлений препарат темнопольної або фазово-контрасної
"висяча крапля". Який метод мікроскопії буде мікроскопії
використаний для виявлення збудника по його
рухливості?
А. Електронна
В. Імунна електронна
С. Фазово-контрастна
D. Люмінісцентна
Е. Імерсіонна

2. У пацієнта при плановому медичному огляді

порожнини рота на слизовій оболонці щоки
виявлено безболісна виразка з щільними краями.
Який експрес-метод дозволить найбільш точно
підтвердити передбачуваний діагноз?
А. Реакція аглютинації на склі с антисироваткою
В. ПРІФ
С. Мікроскопія мазка виділень зіва, пофарбованого
за Романовським-Гімзою
D.Культивування ексудату виразки в куриному
ембріоні
Е. РЗК
3. Студент, виконуючи фарбування культури
стафілококку за Грамом, забув використати розчин
Люголя. Що було виявлено при вивченні цього
мазка у імерсійному мікроскопі?
А. Бактерії синього кольору
В. Не пофарбовані бактерії
С. Лізис бактерій
D.Відсутність фіксації бактерій
Е. Бактерії червоного кольору
4. Якою морфологічною структурою бактерій та Грампозитивні бактерії мають товсту клітинну
особливістю її будови спричинене позитивне чи стінку, яка складається з 5-6 шарів
негативне забарвлення по Граму? пептидоглікану (муреїну) та полімерів
А. цитоплазматична мембрана тейхоєвих кислот. Ці структури легко
В. клітинна стінка сприймають і міцно утримують фарбуючий
С. нуклеоїд комплекс генціанвіолет + йод і при дії спирту
D.капсула протягом 30-60 с не знебарвлюються.
Е. цитоплазматичні включення Грамнегативні бактерії мають значно тоншу
оболонку, що складається з 1-2 шарів
 петидоглікану, не містить тейхоєвих кислот, а,
отже, не втримують комплекс основного
барвника при знебарвленні спиртом. При
додатковій обробці мазка фуксином вони
фарбуються в червоний колір. Окрім того,
різне забарвлення мікроорганізмів пов’язане з
більш високою концентрацією комплексу
протеїн-рибонуклеїнату магнію в клітинах
грампозитивних бактерій, більш кислим
значенням рH і різним співвідношенням
РНК:ДНК у цитоплазмі (у грампозитивних 8:1,
а грамнегативних 1:1).
5. В бактеріологічну лабораторію доставили Рухливість бактерій вивчається в нефіксованих
блювотні маси хворого з підозрою на холеру. З пат. нативних препаратах «висяча» та «роздавлена
матеріалу приготували препарат "висяча крапля", крапля» за домогою темнопольної або фазово-
щоб мікроскопувати його в темному полі і оцінити контрасної мікроскопії.
рухливість збудника, що є важливою
діагностичною ознакою. Яким реактивом необхідно
обробити препарат перед мікроскопією?
А. Люмінісцюючою сироваткою
В. Дезінфікуючим розчином
С. Ніяким
D. Розчином метиленового синього
Е. Лужною пептонною водою
6. При мікроскопії мазка з виділень рани, були
виявлені грампозитивні, кулясті клітини, які
розташовуються у вигляді ''грон винограду''. До
якого виду можуть бути віднесені побачені
мікроорганізми?
А. Клостридії
В. Стрептококи
С. Стафілококи
D. Мікоплазми
Е. Гонококи
7. На занятті з мікробіології студенти ознайомилися За допомогою мікроскопічного методу
з мікроскопічним методом діагностики. Які вивчають морфологічні (форма клітин,
властивості бактерій вивчають цим методом? розміри, наявність додаткових структурних
А. Культуральні елементів і т.д.) та тинкторільні властивості
В. Антигенні (відношення до барвникі і, в першу чергу до
С. Токсигенні тих, що використовуються при забарвленні за
D. Біохімічні Грамом)
Е. Морфологічні, тинкторіальні
8. Реакція імунофлюоресценції широко
використовується для експрес-діагностики багатьох
бактеріальних та вірусних інфекцій. Виберіть
умову, без дотримання якої неможливо визначити
результат реакції.
А. Виділеної чистої культури збудника
В. Наявність люмінесцентного мікроскопа
С. Наявність електронного мікроскопа
D. Наявності імерсійного мікроскопа
Е. Сироватки хворого
9. Для виявлення збудника сифілісу з вмісту дна Нефіксовані препарати «висяча крапля» та
твердого шанкра готують препарат "роздавлена «роздавлена крапля» вивчаються за допомогою
крапля", в якому вивчають рухливість цих темнопольної або фазово-контрасної
мікроорганізмів. Яку мікроскопію слід застосувати мікроскопії.
в цьому випадку?
А. Фазово-контрастн
В. Люмінісцентну
С. Темнопольну
D. Поляризаційну
Е. Інтерференційну
10. Істотним недоліком мікроскопічного методу
діагностики інфекцій є його недостатня
інформативність у зв’язку з морфологічною
подібністю багатьох видів мікроорганізмів. Яка
імунологічна реакція дозволяє значно підвищити
інформативність цього методу?
А. Реакція Кумбса
В. Імуноферментний аналіз
С. Реакція імунофлюоресценції
D. Реакція опсонізації
Е. Радіофмунний аналіз
11. У посіві гною з фурункулу знайдено кулястої
форми мікроби, розташовані як “гроно” винограду.
Які мікроби виявлено?
А. Диплококи
В. Мікрококи
С. Стрептококи
D. Стафілококи
Е. Тетракоки
12. Із рото-глотки хлопчика, який хворіє на
хронічний тонзиліт виділили культуру кокових
бактерій. У мазках вони розташовувалися у вигляді
ланцюжків. Які це можуть бути бактерії?
А. Стафілококи
В. Ешерихії
С. Клостридії
D. Стрептококи
Е. Вібріони
13. У мазку слизу з мигдалин у хворого на ангіну
знайдено кулястої форми мікроорганізми,
розташовані короткими ланцюжками. Який з
перелічених мікроорганізмів знайдено в мазках з
мигдалин?
А. Стафілококи
В. Стрептококи
С. Мікрококи
D. Диплококи
Е. Тетракоки
14. Зі слизових оболонок і харкотиння хворого, якій
тривалий час приймав імунодепресанти, були
виділені грампозитивні великі овальні клітини з
брунькуванням, що розташовані хаотично та
подовжені клітини, розташовані ланцюжками. Який
збудник виділений?
А. Стрептобактерії
В. Актиноміцети
С. Стрептококи
D. Ієрсінії
Е. Кандіди
15. У лабораторній діагностиці багатьох
інфекційних захворювань використовують метод
забарвлення за Грамом. Які структури мікробної
клітини відповідають за здатність
сприймати барвник?
А. Цитоплазматична мембрана
В. Клітинна стінка
С. Мезосоми
D. Капсула
Е. Плазміди