食博克SOP文件

医学检验科文件编号： FPHJY-SOP-7120
临床免疫专业组版本： 3.0

食物过敏原特异性 IgG 抗发布日期： 2023 年 11 月 15 日
体检测(FIGG)标准操作指生效日期： 2023 年 12 月 1 日
导书页码：第 1 页，共 7 页
修改页
序号修改日期修改内容章节号批准人发布日期
云南省第一人民医院
编写者：审核
批准者：
者：
乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量检测
标准操作指导书
1. 目的
规范操作规程，保证食物特异性 IgG 抗体定性检测结果的准确可靠。
2. 适用范围
定性检测指尖全血或血清中的食物特异性 IgG 抗体，辅助诊断食物不耐受引起的肠易
激综合征、湿疹、关节炎等疾病，检测项目：玉米、大米、牛奶、蛋清/蛋黄、小麦、大豆、
西红柿、牛肉、鸡肉、猪肉、蟹、虾、鳕鱼、蘑菇。
3. 实验原理
微孔板的反应孔内分别包被有特异性食物过敏原。患者血清中的特异性抗体与过敏原
反应。清洗微孔板后去除反应过剩的血清蛋白。加入酶标记的抗体结合液，同过敏原-抗体
复合物反应。再加入偶联酶的生色底物，发生显色反应。测定反应产物的吸光度值，该值
与食物过敏原特异性 IgG 抗体浓度成正比。
4. 样本种类及要求
本试验用血清进行检测，用量为 20μL。按照标准方法收集的血清，在室温可贮存 8 小
时，在 2~8℃可贮存 2 天，在-20℃以下可以保存更长时间。
5. 使用试剂
江苏浩欧博生物医药股份有限公司的食物特异性 IgG 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
6. 仪器名称及型号
6.1 试验仪器
6.2 相关仪器
编写者：审核
批准者：
者：
7. 操作步骤
使用前请将所有试剂平衡至室温。
7.1 准备绘制标准曲线：
取 4 支 12 x 75 mm 玻璃管，分别标记 50, 100, 200 和 400 U/mL。依次在这 4 个管中加
入 150 μL 血清稀释液。在标有 400 U/mL 的管中加入 150 μL 食物 IgG 抗体标准血清。
混合后，取 150 μL 加入到标有 200 U/mL 的管中；再混合后，取 150 μL 加入到标有
100 U/mL 的管中；同样混合后，取 150μL 加入到标有 50 U/mL 的管中。这样就得到了
浓度分别为 100, 200 和 400 U/mL IgG 抗体标准血清各 150 μL，浓度为 50 U/mL IgG 抗
体标准血清 300 μL。这些浓度作为绘制标准曲线的横坐标。从每管中各取 100 μL 按下
表加入到微孔板内：
管标号反应孔号
50 U/mL 1B
100 U/mL 1C
200 U/mL 1D
400 U/mL 1E
加入 100μL 血清稀释液到 1A，加入 100μL 阳性质控到 1F。
7.2 将 100 μL 稀释的患者血清(见标本预处理)加入到剩余反应孔内。所有反应孔的液体量
必须为 100 μL。
7.3 用封口膜或塑料袋封闭微孔板，置室温(22-25°C)孵育 1 小时。
7.4 孵育后，用 300 μL 工作清洗液清洗每个反应孔，需清洗 3 次(见试剂准备和贮存)。如
果选用自动清洗仪，请参照厂家说明进行 3 次循环清洗，并将清洗容量设为 300 μL。
7.5 在所有反应孔中加入 100 μL 抗人 IgG 抗体-辣根过氧化物酶结合液。
7.6 置室温(22-25°C)孵育 30 分钟。
7.7 重复步骤 4 清洗微孔板。
7.8 在所有反应孔中加入 100 μL 工作底物混合液(见试剂准备和贮存)。
7.9 封闭微孔板，置室温(22-25°C)孵育 10 分钟。
7.10 在所有反应孔中加入 50μL 终止液(此时反应孔中的溶液由蓝色变为黄色)。
编写者：审核
批准者：
者：
7.11 用酶标仪测定每孔在 450 nm 处的吸光度值。
7.12 用 1A-1E 的数据绘制标准曲线。
8. 校准
8.1 校准条件
8.1 执行校准
9. 室内质控及失控限
在 450 nm 处吸光度值(OD 值)应满足以下质控标准：
OD 空白对照孔 <0.2
OD 50U/mL 标准孔 >1.2×OD 空白对照孔
OD 100U/mL 标准孔 > 1.2×OD 50U/mL 标准孔
OD 200U/mL 标准孔 > 1.2×OD 100U/mL 标准孔
OD 400U/mL 标准孔 > 1.2×OD 200U/mL
标准孔阳性对照标准化活性 > 100U/mL
10. 性能参数
10.1 外观：试剂盒外部包装盒应整洁，文字符号标识清晰，所有试剂瓶密闭，无漏液，所
有液体澄清透明。包被抗原微孔板为无色本底 96 孔板。
10.2 溯源性：江苏浩欧博生物医药股份有限公司使用的企业标准品溯源至 BIOMERICA 的
产品标准品。
10.3 阳性符合率：检测 10 份企业阳性质控血清，各项阳性符合率均应≥90%。
10.4 阴性符合率：检测 10 份企业阴性质控血清，各项阴性符合率均应≥90%。
10.5 检测限：应≤50U/mL。
10.6 重复性：用至少 2 个浓度水平的样本各重复检测 10 次，变异系数 CV≤13%。
10.7 批间差：用 3 个批号试剂盒检测同一份样本，批间变异系数 CV≤15%。
11. 结果计算程序
编写者：审核
批准者：
者：
为消除清洗和仪器变异等影响，检验结果按由标准曲线计算得到的形如下式的三次多
项式进行标准化计算：
Y=AX3+BX2+CX+D
其中：X：样本或阳性对照的标准化活性(U/ml)
Y：样本或阳性对照的吸光度
12. 干扰和交叉反应限云南省第一人民医院

12.1 牛肉过敏原与牛奶、猪肉、鸡肉、羊肉过敏原无明显的交叉反应，鸡肉过敏原与鸡蛋、
牛肉、猪肉、羊肉过敏原无明显的交叉反应，鳕鱼过敏原与金枪鱼、鳞鱼过敏原无明
显的交叉反应，玉米过敏原与小麦、大米过敏原无明显的交叉反应，蟹过敏原与虾、
蛤、扇贝过敏原无明显的交叉反应，鸡蛋过敏原与鸡肉过敏原无明显的交叉反应，牛
奶过敏原与牛肉、羊奶、奶酪过敏原无明显的交叉反应，猪肉过敏原与牛肉、鸡肉、
羊肉过敏原无明显的交叉反应，大米过敏原与玉米、小麦过敏原无明显的交叉反应，
虾过敏原与螃蟹、蛤、扇贝、龙虾过敏原无明显的交叉反应，大豆过敏原与花生、芝
麻、玉米、青豆过敏原无明显的交叉反应，西红柿过敏原与黄瓜、茄子过敏原无明显
的交叉反应，小麦过敏原与大麦、燕麦、黑麦过敏原无明显的交叉反应。
12.2 血红蛋白浓度≤10.0 mg/mL、甘油三酯浓度≤40.0 mg/mL、胆红素浓度≤0.4 mg/mL 时
对检测无干扰，高浓度 IgA、IgM 样本对检测无干扰。
12.3 临床试验表明，正常人群体内也可能含有对某种食物特异性的 IgG 抗体。不能仅凭任
何一个试验结果做出最终临床诊断，只有医生根据所有临床特征和实验室结果才能做
出最后诊断。
13. 参考区间
阴性判定：食物特异性 IgG 水平<50U/mL 时，判断为阴性。
阳性判定：食物特异性 IgG 水平≥50U/mL 时，判断为阳性。
14. 可报告范围
15. 危急值
无
编写者：审核
批准者：
者：
16. 实验室解释
17. 安全防护与措施
17.1 标准血清和质控血清是人血清制品。通过 FDA 检测方法已经确证这些人血清制品均为

HbsAg，HIV-1/2 和 HCV 抗体阴性。但是由于没有实验能完全排除 HIV，B 型乙肝病毒
和其它传染因素的存在，因此应将这些试剂视为具有潜在感染性进行处理。
17.2 一些试剂中含有防腐剂叠氮钠，与铅或铜接触可反应生成易爆的金属叠氮物。若倒掉
含叠氮钠的试剂，应用大量水清洗以防止叠氮物堆积。
17.3 终止液含 1N H2SO4。此为强酸，应小心处理。硫酸可灼伤皮肤，使用时应带手套，并
戴防护眼镜以及穿上适当的防护衣。应避免吸入。溅出的硫酸应用水稀释，再用纸巾
擦净。
18. 变异潜在来源
19. 操作环境条件
19.1 实验室温度：20～25℃。
19.2 实验室湿度：≤85%。
20. 支持性文件
21. 参考文献
21.1 杨智勇, 阿祥仁. 食物特异性 lgG 抗体检测的研究进展[J]. 中华检验医学杂志, 2020,
43(4): 6.
21.2 Panel N S E. Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United
States: report of the NIAID-sponsored expert panel[J].Journal of Allergy and Clinical
Immunology, 2010, 126(6): S1-S58.
21.3 曾强. 应重视健康体检人群中食物不耐受的研究[J]. 中华健康管理学杂志, 2012, 06(3):
145-146.
编写者：审核
批准者：
者：
21.4 郑延松, 赵威. 免疫球蛋白 G 抗体介导的食物不耐受[J]. 中华健康管理学杂志, 2010,
4(3): 3
22. 其他必须内容
编写者：审核
批准者：
者：

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医学检验科 文件编号： FPHJY-SOP-7120

临床免疫专业组 版本： 3.0

序 号 修改日期 修改内容章节号 批准人 发布日期

规范操作规程，保证食物特异性 IgG 抗体定性检测结果的准确可靠。

与食物过敏原特异性 IgG 抗体浓度成正比。

时，在 2~8℃可贮存 2 天，在-20℃以下可以保存更长时间。

江苏浩欧博生物医药股份有限公司的食物特异性 IgG 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

取 4 支 12 x 75 mm 玻璃管，分别标记 50, 100, 200 和 400 U/mL。依次在这 4 个管中加

混合后，取 150 μL 加入到标有 200 U/mL 的管中；再混合后，取 150 μL 加入到标有

100 U/mL 的管中；同样混合后，取 150μL 加入到标有 50 U/mL 的管中。这样就得到了

体标准血清 300 μL。这些浓度作为绘制标准曲线的横坐标。从每管中各取 100 μL 按下

加入 100μL 血清稀释液到 1A，加入 100μL 阳性质控到 1F。

7.2 将 100 μL 稀释的患者血清(见标本预处理)加入到剩余反应孔内。所有反应孔的液体量

必须为 100 μL。

7.3 用封口膜或塑料袋封闭微孔板，置室温(22-25°C)孵育 1 小时。

7.4 孵育后，用 300 μL 工作清洗液清洗每个反应孔，需清洗 3 次(见试剂准备和贮存)。如

果选用自动清洗仪，请参照厂家说明进行 3 次循环清洗，并将清洗容量设为 300 μL。

7.5 在所有反应孔中加入 100 μL 抗人 IgG 抗体-辣根过氧化物酶结合液。

7.6 置室温(22-25°C)孵育 30 分钟。

7.7 重复步骤 4 清洗微孔板。

7.8 在所有反应孔中加入 100 μL 工作底物混合液(见试剂准备和贮存)。

7.9 封闭微孔板，置室温(22-25°C)孵育 10 分钟。

7.10 在所有反应孔中加入 50μL 终止液(此时反应孔中的溶液由蓝色变为黄色)。

7.11 用酶标仪测定每孔在 450 nm 处的吸光度值。

7.12 用 1A-1E 的数据绘制标准曲线。

在 450 nm 处吸光度值(OD 值)应满足以下质控标准：

OD 50U/mL 标准孔 >1.2×OD 空白对照孔

OD 100U/mL 标准孔 > 1.2×OD 50U/mL 标准孔

OD 200U/mL 标准孔 > 1.2×OD 100U/mL 标准孔

OD 400U/mL 标准孔 > 1.2×OD 200U/mL

标准孔阳性对照标准化活性 > 100U/mL

10.2 溯源性：江苏浩欧博生物医药股份有限公司使用的企业标准品溯源至 BIOMERICA 的

10.3 阳性符合率：检测 10 份企业阳性质控血清，各项阳性符合率均应≥90%。

10.4 阴性符合率：检测 10 份企业阴性质控血清，各项阴性符合率均应≥90%。

10.6 重复性：用至少 2 个浓度水平的样本各重复检测 10 次，变异系数 CV≤13%。

10.7 批间差：用 3 个批号试剂盒检测同一份样本，批间变异系数 CV≤15%。

12. 干扰和交叉反应限 云南省第一人民医院

对检测无干扰，高浓度 IgA、IgM 样本对检测无干扰。

12.3 临床试验表明，正常人群体内也可能含有对某种食物特异性的 IgG 抗体。不能仅凭任

阴性判定：食物特异性 IgG 水平<50U/mL 时，判断为阴性。

阳性判定：食物特异性 IgG 水平≥50U/mL 时，判断为阳性。

17.1 标准血清和质控血清是人血清制品。通过 FDA 检测方法已经确证这些人血清制品均为

21.1 杨智勇, 阿祥仁. 食物特异性 lgG 抗体检测的研究进展[J]. 中华检验医学杂志, 2020,

States: report of the NIAID-sponsored expert panel[J].Journal of Allergy and Clinical

Immunology, 2010, 126(6): S1-S58.

21.3 曾强. 应重视健康体检人群中食物不耐受的研究[J]. 中华健康管理学杂志, 2012, 06(3):

21.4 郑延松, 赵威. 免疫球蛋白 G 抗体介导的食物不耐受[J]. 中华健康管理学杂志, 2010,

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