Generalitat de Catalunya

Departament d’Educació
Institut Pedraforca

UF Núm. 1 Nom i Cognoms: Laura Miguel Garrido

PRÀCTICA Núm. 11 Data: 11-01-2024

TÍTOL: Comptatge de leucòcits

OBJECTIU/S:

Conèixer els mètodes bàsics de comptatge cel·lular.

Familiaritzar-se amb les cambres de comptatge de tipus Neubauer i el seu ús.
Realitzar el comptatge de leucòcits, per veure si la mostra està o no dins els valors de referència.

FONAMENTS TEÒRICS:

El comptatge de leucòcits (WBC) consisteix en determinar el nombre de leucòcits que hi ha en un volum

determinat de sang, habitualment 1 mm³.
Per fer el comptatge de leucòcits amb cambra, primer s’ha de diluir la mostra en un líquid adient.
Posteriorment, es diposita una quantitat de la mostra diluïda a la cambra, i es compten les cèl·lules
presents en alguns dels quadrats del reticle.
El comptatge s’ha de fer per duplicat.

MATERIAL:

• Cambra de Neubauer/N. millorada.

• Cobreobjectes adaptat a la cambra.
• Mostra de sang venosa anticoagulada amb EDTA (BST).
• Líquid de dilució: líquid de Turk.
• Capil·lar sense heparina.
• Eppendorf.
• Micropipeta de 100 µl.
• Puntes de pipeta.
• Microscopi.

REACTIUS:

El líquid de Turk és el líquid de dilució més utilitzat per fer el comptatge de leucòcits.
És una solució hipotònica que conté àcid acètic i un colorant bàsic.
L’àcid acètic produeix la lisi dels eritròcits, sense alterar els leucòcits.
El colorant, blau de metilè, tenyeix el nucli dels leucòcits, i facilita la seva visualització.

CFGS LABORATORI CLÍNIC I BIOMÈDIC

MP6 – Tècniques d’anàlisi hematològiques
Curs 2023-24
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut Pedraforca

PROCEDIMENT:

1. Homogeneïtzar amb cura la sang venosa procedent del BST.

2. Pipetejar 50 µl de sang en un Eppendorf.
3. Afegir-hi 950 µl de líquid de Turk.
4. Homogeneïtzar la mescla.
5. Col·locar el cobreobjectes damunt la cambra de recompte.
6. Omplir la cambra de recompte amb un capil·lar sense heparina o amb una micropipeta. Si s’utilitza la
micropipeta, omplir-la amb 50 μl de la dilució, acostar-la al marge del cobreobjectes, en posició gairebé
vertical, i deixar que la cambra s’ompli per capil·laritat. Evitar la formació de bombolles o que la sang
sobresurti.
7. Deixar que la sang se sedimenti durant uns 5’ abans de fer el comptatge, per tal que les cèl·lules es
dipositin al fons.
8. Enfocar la retícula amb l’objectiu de 10x, i comprovar que els leucòcits estan homogèniament
distribuïts. Si no és així, retirar la cambra i tornar-la a omplir.
9. Comptar els leucòcits dels 4 quadrats grans de les cantonades (dels 16 quadrat mitjans de cada un
d’ells) amb l’objectiu de 40x (i amb el condensador baix). Si els leucòcits es veuen bé, també es pot fer el
comptatge amb l’objectiu de 10x.
10. Repetir el comptatge i donar com a resultat la mitjana.

RESULTATS:

QUADRAT GRAN A

4 3 5 4

3 2 5 1

4 5 4 2

1 3 4 3
TOTAL: 53

QUADRAT GRAN B

3 5 1 2

4 4 4 3

1 2 3 4

4 4 3 2
TOTAL : 49

CFGS LABORATORI CLÍNIC I BIOMÈDIC

MP6 – Tècniques d’anàlisi hematològiques
Curs 2023-24
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut Pedraforca

QUADRAT GRAN C

2 5 3 4

4 3 2 3

5 2 4 3

3 1 4 2
TOTAL : 50

QUADRAT GRAN D

4 2 2 0

5 3 4 3

4 5 7 2

1 3 4 3
TOTAL : 52
TOTA DE LEUCÒCITS COMPTATS : 53 + 49 + 50 + 52 = 204
FORMULA : WBC (NM) = L x 10/4 x D
WBC = 204 X 10/4 X 20 =10200 leucos mm3
RESULTATS AYESHA : 10400 leucos mm3
MITJANA DELS DOS RESULTATS : 10200+10400 /2 = 10300 leucos mm3

CFGS LABORATORI CLÍNIC I BIOMÈDIC

MP6 – Tècniques d’anàlisi hematològiques
Curs 2023-24
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut Pedraforca

VALORACIÓ DELS RESULTATS/CONCLUSIONS:

El nombre de leucòcits que hem comptat es de 10300 mm3

Els valors de referencia son .
WBC = 5.000 – 11.000 leucòcits/mm³
Donat això entenen que aquesta sang es troba dins els valors de referencia normals per al comptatge de leucòcits.

CFGS LABORATORI CLÍNIC I BIOMÈDIC

MP6 – Tècniques d’anàlisi hematològiques
Curs 2023-24