Generalitat de Catalunya

Departament d’Educació
Institut de Vic

AEA2. PROVES DE VALORACIÓ DE L’HEMOSTÀSIA

MP6. TÈCNIQUES D’ANÀLISI HEMATOLÒGIC
UF2. TÈCNIQUES DE VALORACIÓ DE L’HEMOSÀSIA I COAGULACIÓ

CURS ____________

NOM:

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

ÍNDEX
PREPARACIÓ DE LA MOSTRA .................................................................................................. 3
PRÀCTICA 0: OBTENCIÓ DE PLASMA .................................................................................................................... 4

PRÀCTICA 1: OBTENCIÓ DE PLASMA RIC EN PLAQUETES (PRP) ........................................................................... 4

PRÀCTICA 2: OBTENCIÓ DE PLASMA POBRE EN PLAQUETES (PPP) ..................................................................... 4

PRÀCTICA 3: OBTENCIÓ DE PLASMA ADSORBIT................................................................................................... 4

PROVES D’HEMOSTÀSIA PRIMÀRIA: ....................................................................................... 5

PRÀCTICA 5a: PROVA DE RUMPEL-LEEDE ............................................................................................................ 6

PRÀCTICA 5b: PROVA DE RETRACCIÓ DEL COÀGUL ............................................................................................. 7

PROVES QUE INVESTIGUEN LA COAGULACIÓ .......................................................................... 8

PRÀCTICA 6: TEMPS DE COAGULACIÓ ................................................................................................................. 8

PRÀCTICA 7:TEMPS DE RECALCIFICACIÓ DEL PLASMA o TEST DE HOWELL (PRP) ............................................... 8

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA INTRÍNSECA............................................................................ 9

PRÀCTICA 8: TEMPS DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA) ........................................................... 10

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA EXTRÍNSECA. ........................................................................ 11

PRÀCTICA 9:TEMPS DE PROTROMBINA (TP) o TEMPS DE QUICK ...................................................................... 11

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA COMÚ .................................................................................. 13

PRÀCTICA 10: TEMPS DE TROMBINA (TT) .......................................................................................................... 13

PRÀCTICA 11: QUANTIFICACIÓ DE FIBRINOGEN ................................................................................................ 14

PROVES DE MESCLES ............................................................................................................ 16

PROVES QUE ESTUDIEN LA FIBRINÒLISI ................................................................................ 18

PRÀCTICA 12: TEMPS DE LISIS DEL COÀGUL DE SANG TOTAL............................................................................ 18

PRÀCTICA 13: TEMPS DE LISI DEL COÀGUL D’EUGLOBULINES ........................................................................... 19

PRACTICA 14: QUANTIFICACIÓ D’ANTITROMBINA III ........................................................................................ 20

PROVES QUE VALOREN LA FIBRINÒLISI PARCIALMENT ......................................................... 22

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PREPARACIÓ DE LA MOSTRA

EXTRACCIÓ DE LA MOSTRA:
• No medicació dues setmanes abans de l’analítica (compte amb AAS, heparina i
anticoagulants orals...).
• En dejú (risc de plasmes lipèmics).
• Advertir presència d’hemòlisi o icterícia.
• Extracció de la mostra amb estasi mínima.
• Mínim dany als teixits circumdants (risc contaminació amb tromboplastina tissular)
• Refusar els primers mil·límetres de sang (utilitzar tubs d’extracció múltiple)
• No utilitzar vies venoses col·locades prèviament (poden contenir heparina)
• Per valoració de la fibrinòlisi, cal prendre la mostra al matí, en repòs i enviar-les en un
bany de gel.

ANTICOAGULACIÓ:
• Anticoagulant; citrat trisòdic. Concentració de 0,11 mols/litre (3,8 g de citrat trisòdic pur per
100ml de dissolució aquosa): Tap blau clar
• Barrejar la mostra amb l’anticoagulant immediatament després de l’extracció, per inversió
suau 3 o 4 cops.
• 1 part de citrat de trisòdic amb 9 parts de sang venosa
• Plasmes pobres en Calci, degut a l’acció quelant del citrat.
• Per preparar plasmes pobres en factor V, l’anticoagulant és l’oxalat sòdic, invertir la mostra
8 cops: Tub gris

CONSERVACIÓ DE LA MOSTRA
• Processar la mostra el més aviat possible, en un període inferior a 30 minuts des de
l’extracció.
• Conservar a 5ºC si no es pot processar abans de 30 minuts.
• El plasma obtingut, analitzar-lo abans de les 2 primeres hores de l’extracció, o 4 hores si
es conserva entre 2ºC i 8ºC.
• Si s’analitza el factor VIII, sempre abans de les 2 primeres hores.
• Es pot congelar el plasma de manera ràpida: exposició a -20ºC. Serà estable 28 dies
(més fiabilitat les dues primeres setmanes).
• Descongelar el plasma en un bany de 37ºC durant 3-5 minuts per 1-2 ml de mostra.
Agitar suaument per resuspendre el crioprecipitat .

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 1: OBTENCIÓ DE PLASMA

Objectiu: Obtenció de plasma.
Procediment:
1. Centrifugació de la mostra (sang anticoagulada) a 1500 rpm durant 15 minuts.
2. Observem les tres fraccions.
3. Es retira el sobrenedant (plasma) ràpidament i es transfereix a un tub adequat.

PRÀCTICA 2: OBTENCIÓ DE PLASMA RIC EN PLAQUETES (PRP)

Objectiu: Obtenció de plasma ric en plaquetes, útil per estudis plaquetaris.
Procediment:
4. Centrifugació suau de la mostra (sang anticoagulada amb citrat trisòdic) a 1000 rpm
durant 10 minuts (en recomptes de plaquetes inferiors a 120.000 plaquetes/mm3, es
centrifuga a 800 rpm durant 10 minuts.
5. Es retira el sobrenedant (PRP) ràpidament i es transfereix a un tub adequat.

PRÀCTICA 3: OBTENCIÓ DE PLASMA POBRE EN PLAQUETES (PPP)

Objectiu: Obtenció de plasma pobre en plaquetes, utilitzat en la majoria de proves de
coagulació.
Procediment:
1. Centrifugació intensa de la mostra (sang anticoagulada amb citrat trisòdic) a 3000-3500
rpm durant 10 minuts o a 2500 rpm durant 15 minuts.
2. Es retira el sobrenedant (PPP) ràpidament i es transfereix a un tub adequat.

PRÀCTICA 4: OBTENCIÓ DE PLASMA ADSORBIT

Objectiu: Obtenció de plasma adsorbit utilitzat en algunes de les proves de mescles.
Procediment:
1. Afegir una part de gel d’hidròxid d’alumini a nou parts de plasma citrat (per exemple, 0,1
ml d’hidròxid d’alumini i 0,9 de plasma).
2. Agitar la mescla.
3. Incubar a 37ºC durant 5 minuts.
4. Centrifugar la mescla a 3000 rpm durant 10 minuts.
5. Decantar el sobrenedant (plasma adsorbit) amb una pipeta Pasteur.

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES D’HEMOSTÀSIA PRIMÀRIA:

• PROVES QUE ESTUDIEN LA FRAGILITAT VASCULAR
o PROVA DE RUMPEL-LEEDE (Pràctica 5a)

• PROVES QUE ESTUDIEN LA FUNCIONALITAT PLAQUETÀRIA

o PROVA DE RETRACCIÓ DEL COÀGUL (Pràctica 5b)
o DETERMINACIÓ DEL TEMPS DE SAGNAT (TS): Prova antiga que mesura el temps
des de la secció d’un grup de capil·lars fins la formació del trombó blanc
plaquetari. Es realitza una petita ferida a la pell i es mesura el temps que para de
sagnar:
• Tècnica de Duke: Punció al lòbul de l’orella amb una llanceta (3 min.)
• Tècnica d’Ivy: Realització de talls amb un aparell especial (Simplate II®) (6
minuts)

o DETERMINACIÓ DEL TEMPS D’OBTURACIÓ: Es fa passar un volum petit de sang

total citrada a través d’una obertura de 150 mm que simula una lesió vascular a
l’inici del procés d’hemostàsia primària. L’obertura es troba en una membrana
de col·lagen i ADP (Col/ADP) o col·lagen i Epinefrina (Col/Epi). Es valora la
capacitat d’adhesió i d’agregació de les plaquetes. Determina el CT (Temps
d’obstrucció o closuretime), que és el temps en segons des de l’inici de la prova
fins que els agregats plaquetaris constitueixen un tap prou gran per obstruir
l’obertura. CT normal és d’uns 180 segons. Si només està prolongat Col/Epi pot
ser degut a la presència d’àcid acetil salicílic. Si estan totes dues prolongades pot
ser anèmia, trombocitopènia o poc FvW.

o PROVES D’AGREGACIÓ PLAQUETÀRIA: Avaluen la capacitat que tenen les

plaquetes d’unir-se entre elles. Es posa en contacte un plasma ric en plaquetes
amb una substància que indueixi la seva agregació (ristocetina, àcid araquidònic,
ADP, trombina, epinefrina, col·lagen). Es fa en autoanalitzadors.

o ALTRES:
• CITOMETRIA DE FLUXE: Es determinen deficiències de glucoproteïnes
• MICROSCOPIA ELECTRÒNICA
• ESTUDIS GENÈTICS: BIOLOGIA MOLECULAR
• PROVES IMMUNOLÒGIQUES
• QUANTIFICACIÓ DEL FACTOR DE VON WILLEBRAND: Es quantifica
l'expressió antigènica del FvW mitjançant Immunoassaig, ELISA,
Immunoturbidimetria...
• QUANTIFICACIÓ D’Ac ANTITROMBOCÍTICS: Un 5% dels pacients
tractats amb heparina poden patir una Trombocitopènia induïda
per Heparina (TIH), on s’observa la producció d’Ac que reaccionen
amb f4p si està unit a heparina; de manera que tenen més risc de
patir hemorràgies. Per detectar aquests Ac s’utilitzen diferents
proves comercials basades en l’immunoassaig.

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 5a: PROVA DE RUMPEL-LEEDE

Objectiu: Avaluar la resistència que ofereixen les parets capil·lars al augmentar la pressió
intracapil·lar i l’anòxia, responsables de la producció d’extravasacions sanguínies i petèquies.
Material:
• Retolador
• Esfigmomanòmetre
• Rellotge
Procediment:
1. Mesurem la pressió arterial i calculem la mitja entre la pressió sistòlica i la diastòlica.
2. Dibuixem un cercle d’uns 5 cm de diàmetre en la cara anterior de l’avantbraç escollit.
3. Posem l’esfigmomanòmetre i apliquem la pressió mitja calculada durant 5 minuts
4. Afluixem i retirem l’esfigmomanòmetre
5. Contem el nombre de petèquies que han aparegut en el cercle
Lectura de resultats:
Resultats negatius: <10
Resultat dubtós: 10-20
Resultat positiu: >20

Interpretació clínica dels resultats:

S’observa un augment de la fragilitat vascular en l’escorbut, les trombocitopènies, en la malaltia
de von Willebrand i en les púrpures vasculars.

FULLA DE TREBALL
1. Quan temps es deixa l’esfigmomanòmetre en aquesta prova?
2. Com es visualitzen les petèquies?
3. Quantes petèquies ha de contenir el cercle per tal que el resultat sigui clarament
positiu?
4. En quines malalties es dóna una prova de Rumpel-Leede positiva?

Resultat obtingut:

Valoració dels resultats:

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 5b: PROVA DE RETRACCIÓ DEL COÀGUL

Objectiu: Valorar la capacitat de retracció del coàgul format prèviament, tenint en compte que
depèn de la capacitat de les plaquetes d’alliberar trombostenina.

Mostra: Sang no anticoagulada

Procediment:
1. Posem 2 ml de sang sense anticoagulant en un tub de vidre graduat.
2. Afegim un filferro amb varies espirals
3. Deixem la sang a 37ºC durant 1 hora o a Tª ambient 3 hores
4. Valorem l’adherència del coàgul format a les parets del tub
5. Valorem el volum del sèrum exprimit del coàgul durant la retracció. El mesurem després
de retirar el filferro on hi ha adherit el coàgul.

Interpretació dels resultats:

Volum normal: La meitat del volum inicial de sang (1 ml)

En anèmies i hipofibrinogenèmies la capacitat de retracció del coàgul està augmentada; el

coàgul és petit i el volum de sèrum obtingut equivaldrà a 2/3 del volum inicial de sang.

En trombocitiopenies i en la trombastenia de Glanzmann la capacitat de retracció del coàgul

està disminuïda; el coàgul serà gran i el volum de sèrum és escàs.

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE INVESTIGUEN LA COAGULACIÓ

• PROVES QUE INVESTIGUEN GLOBALMENT LA COAGULACIÓ

Valoren la coagulació en conjunt, sense diferenciar l’estat en el que es troben les diferents vies.
S’han substituït per proves més específiques.

o TEMPS DE COAGULACIÓ
o TEMPS DE RECALCIFICACIÓ DEL PLASMA O TEST DE HOWELL

PRÀCTICA 6: TEMPS DE COAGULACIÓ

Objectiu: Detectar trastorns relacionats amb la via intrínseca i la via comú de la coagulació. Tot i
que aquesta prova actualment s’utilitza poc ja que no detecta deficiències lleugeres dels
factors.

Procediment:
1. Posar sang sense anticoagulants en contacte amb una superfície de vidre (tub hemòlisi)
2. Incubar a 37ºC
3. Mesurar el temps que tarda a formar-se el coàgul

Interpretació resultats:
Valors normals: 5-10 minuts

PRÀCTICA 7:TEMPS DE RECALCIFICACIÓ DEL PLASMA o TEST DE HOWELL (PRP)

Objectiu: Valorar el temps que tarda a coagular un plasma obtingut en una mostra
anticoagulada amb citrat quan es torna a recalcificar.

Procediment:
1. Posem el plasma en un tub de vidre i afegim una solució de Clorur de Calci (CaCl2)
2. Incubem a 37ºC
3. Valorem el temps de recalcificació (quan es forma el coàgul)

Interpretació dels resultats:

Valors normals: 90-250 segons (fins a 130 segons en el Test de Howell)

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA INTRÍNSECA.

La via intrínseca de la coagulació es pot avaluar mitjançant diverses proves, algunes de les quals
representa una eina de rutina per l’avaluació dels trastorns hemorràgics.

o TEMPS DE TROMBOPLASTINA PARCIAL (TTP)

o TEMPS DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

TEMPS DE TROMBOPLASTINA PARCIAL (TTP):

Fonament. És el temps que necessita un coàgul de PPP després de la seva recalcificació i en

presència d’un substitut del f3p. També s’anomena temps de cefalina.

Procediment:
1. Al PPP se li afegeix cefalina, una suspensió de fosfolípids obtinguda a partir de cervells
de conills, actua com a substitut del f3p. La cefalina evita que el temps que tarda a
generar-se el coàgul no depengui del nombre de plaquetes.

2. S’afegeix clorur de calci (CaCl2)

3. Valorar el temps de formació del coàgul.

Interpretació de resultats
Valors normals: 60-100 segons

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 8: TEMPS DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

Objectiu: Determinar deficiències en la primera fase del procés de coagulació (fVIII, IX, XI, XII i
PK). Útil per detectar deficiències dels factors de la via intrínseca de la coagulació i per al
control dels tractaments amb anticoagulants, en concret, les teràpies amb heparina.
Material:
• Bany termostàtic a 37ºC
• Cronòmetre
• Gradeta

• Tubs d’assaig

Reactius:
• Clorur de Calci (CaCl2) 0,025M
Mostra:
• PPP a partir de sang anticoagulada amb citrat sòdic al 3,8%
Procediment:
1. Preincubar el Clorur de Calci a 37ºC
2. Dispensar en un tub 0,1 ml de plasma
3. Barrejar el reactiu d’Hemoscann per inversió i afegir-ne 0,1ml al plasma
4. Incubar la barreja durant 3 minuts a 37ºC
5. Afegir 0,1 ml de la dissolució de Clorur de Calci a 37ºC i posar en marxa el
cronòmetre
6. Registrar el temps de formació del coàgul
7. Calcular el valor mig de determinacions de cada mostra de plasma

Interpretació dels resultats:

Valors normals: Entre 30 i 40 segons
Ratio de TTPA: També es pot expressar el resultat en forma de quocient, entre el TTPA del
plasma del pacient i el TTPA d’un control normal

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA EXTRÍNSECA.

La via extrínseca de la coagulació es valora mitjançant el temps de protrombina.

PRÀCTICA 9:TEMPS DE PROTROMBINA (TP) o TEMPS DE QUICK

Objectiu: Determinar el temps que tarda a coagular un PPP quan es posa en contacte amb un
excés de calci i de tromboplastina hística. S’utilitza per la detecció de deficiències de factors de
la via extrínseca, pel control de pacients sotmesos a tractaments amb anticoagulants orals
(Sintrom®).

Procediment: Prova comercial similar a la ATTP

Interpretació dels resultats:

Valors normals TP: 11-15 segons
Si el TP s’allarga hi ha més risc d’hemorràgies
Si el TP s’escurça hi ha més risc de trombos

Ratio: TP de la mostra/TP d’un plasma control normal

Valors normals entre 0,9 i 1,15

International Normalized Ratio (quocient corregit per l’ISI)

INR= (TP de la mostra/TP d’un plasma control normal)ISI
ISI: Índex de Sensibilitat Internacional. És el valor de la TH de les diferents proves comercials, al
comparar-lo amb la ISI de la TH de referència internacional (ISI=1). Com més baix sigui l’ISI del
reactiu comercial, més sensibilitat té la prova.
Valors normals: 0,8 i 1,2
INR per pacients tractats amb anticoagulants orals, ha d’estar entre 2 i 3
INR elevats (4 o 5): Més risc d’hemorràgies
INR baixos (0,5): el tractament és insuficient, hi ha més risc de coàguls.

Índex Quick: Es prepara una bateria de dilucions a partir d’un plasma control normal i es
mesura el TP de cada una de les dilucions preparades. S’assigna el 100% d’activitat al número
de segons mesurats en la determinació del TP del plasma control normal pur i es calcula el
percentatge que proporcionalment correspon als valors de TP determinats en cada una de les
seves dilucions. Amb aquestes dades es fa un corba de calibració de calibrat (corba d’activitat
de la protrombina) anotant a l’eix d’ordenades els valors en segons del TP del plasma control no
diluït i de cada una de les seves dilucions i en l’eix d’abscisses el % d’activitat assignat a cada un
d’ells. S’interpola a la gràfica el valor en segons del TP determinat en el plasma problema i
trobarem el % d’activitat de la protrombina problema.
Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

Valors normals índex de Quick: 70% – 130%

Índex < 70%: més risc d’hemorràgies
Índex > 130%: més risc de trombos
Actualment el TP es determina mitjançant un aparell portàtil (CoaguChek® dels laboratoris
Roche), que consisteix en un fotòmetre de reflectància que precisa de tires especials. Els
resultats s’expressen en INR.

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE ESTUDIEN LA VIA COMÚ.

TEMPS DE TROMBINA (TT)
TEMPS DE REPTILASE (TR)
QUANTIFICACIÓ DE FIBRINOGEN

PRÀCTICA 10: TEMPS DE TROMBINA (TT)

És el temps que tarda a coagular un PPP quan se li afegeix una quantitat petita de trombina. La
trombina s’expressa en unitats NIH (quantitat de trombina capaç de degradar a 1 ml de solució
estàndard de fibrinogen en 15 segons a 28ºC); per la TT s’utilitzen 5 U NIH.
Els valors normals de TT oscil·len entre 15 i 20 segons. Normalment, es fa conjuntament la
valoració TT del plasma problema i la valoració TT d’un plasma normal, i diferències de 4 segons
o més es consideren patològiques.
TT llargs indiquen excés d’inhibidors de la trombina (heparina, PDFs) o alteracions qualitatives i
quantitatives del fibrinogen.

Interpretació dels resultats:

TEMPS DE REPTILASE (TR)

Semblant a la TT però la trombina es substitueix per verí de serp (Bothrops atrox o Bothrops
jararacak) que fa la mateixa acció que la trombina però no és inhibit per l’heparina.
Els valors normals de TR oscil·len entre 15 i 20 segons.
Aquesta prova s’utilitza per diferenciar entre una alteració del fibrinogen (TT i TR allargats) i un
efecte de l’heparina (TT allargat i TR normal)

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 11: QUANTIFICACIÓ DE FIBRINOGEN

Objectius: Determinació de la quantitat de fibrinogen mitjançant un excés de trombina (que

promou la transformació del fibrinogen a fibrina). El temps de formació del coàgul és
inversament proporcional a la concentració de fibrinogen en el plasma. L’augment de
fibrinogen indica dany tissular o inflamació (infarts, leucèmia, lupus) i disminueix en malalties
hepàtiques greus.

Material:
• Bany termostàtica a 37ºC

• Gradeta i tubs

• Pipetes

Reactius:
• Reactiu A: Trombina

• Reactiu B: Tampó

• Reactiu C: Calibrador del fibrinogen

Mostra: Sang anticoagulada amb citrat sòdic al 3,8%. Centrifugar a 3000rpm durant 5 minuts i
separar el sobrenedant

Procediment:
1. Diluir el plasma amb el tampó (1plasma:9tampó)

2. Incubar el reactiu A (trombina) a 37ºC durant 10-15 minuts

3. Dispensar 0,2 ml de plasma diluït en un tub i incubar a 37ºC durant 2 minuts

4. Afegir 0,1 ml de reactiu A (trombina)

5. Posar en marxa el cronòmetre i determinar el temps de formació del coàgul

Corba de calibració:
1. Reconstruir el vial del calibrador del fibrinogen

2. Preparar les següents dilucions:

150% 100% 50% 25%

Tampó (ml) 0.85 0.90 1.90 3.90
Calibrador (ml) 0.15 0.10 0.10 0.10

3. Determinar els temps de coagulació de cada dilució

4. Es realitza la corba de calibració (temps de coagulació-concentració corresponent)

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

5. A partir de la corba obtinguda transformem els temps de coagulació de les mostres

problema en concentració de fibrinogen per interpolació.

Interpretació dels resultats:

Valors normals. 200-400 mg/dl (2-4 g/L)

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 1 de 22

Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 16 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES DE MESCLES
Es fan quan algunes de les proves bàsiques de coagulació (generalment TTPA) estan allargades.
Es mesclen a parts iguals el plasma problema i un plasma o sèrum control normal. Si els temps
determinats en la mescla es corregeixen indica que falta algun factor en el plasma problema,
que ha estat compensat pel plasma o sèrum normal. Si no es compensa indica que el trastorn
de la coagulació és degut a altres problemes, i no al dèficit dels factors analitzats; com pot ser
presència d’heparina, PDF, anticoagulant lúpic, etc.

MESCLA AMB PLASMA NORMAL

• S’utilitza PPP
• Quan TP normal i TTPA allargat
• Sospitem de dèficit d’algun factor de la via intrínseca (VIII, IX, XI o XII)
MESCLA AMB SÈRUM NORMAL
• S’utilitza PPP
• Quan sospitem de dèficit d’algun dels factors VIII, IX, XI o XII.
• El sèrum conté factors IX, XI i XII però NO conté factor VIII:
o Si en la mescla el TTPA es corregeix indica que falten IX, XI o XII
o Si en la mescla el TTPA no es corregeix indica que falta factor VIII
MESCLA AMB PLASMA ADSORBIT
• S’utilitza PPP
• Quan sospitem de dèficit d’algun dels factors IX, XI o XII
• El plasma adsorbit conté els factors XI i XII però NO el factor IX.
o Si en la mescla el TTPA es corregeix indica que falten XI o XII
o Si en la mescla el TTPA no es corregeix indica que falta el factor IX.
QUANTIFICACIÓ DE FACTORS ACTIVATS
Proves cromogèniques
Proves coagulomètriques de tipus indirecte
Per valorar l’activitat dels factors es realitzen proves coagulomètriques de tipus indirecte, que
consisteixen en diluir el plasma problema amb una solució tampó i un reactiu (plasma amb tots
els factors de la coagulació, excepte el factor buscat). Es mesura el temps de coagulació, de
manera que depèn exclusivament del factor buscat en el plasma problema.
L’activitat dels factors es mesura en U/ml (1U= activitat equivalent a la continguda en una
mescla de plasmes normals). També pot expressar-se en percentatge (1%=1U/dl).
Valors normals:
• Factors II, V, VII i X: 60-120%
• Factors IX, XI i XII: 60-140%
• Factor VIII: 50-150%

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 17 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

Proves immunològiques
• Determinació immunològica del fVIII: El factor VIII actua com Ag (FVIIIAg), i es pot
detectar mitjançant proves immunològiques que utilitzen Ac específics. No es pot
determinar si és funcional. Quan es detecta VIII no funcional es parla de MRC positiu
(material de reacció creuada ).

• Determinació immunològica del fXIII: Es busca l’expressió antigènica FXIIIAg mitjançant

l’Ac específic unit a partícules de làtex (aglutinació indirecta). Es pot quantificar segons
el grau d’aglutinació.

Determinació del factor XIII

1. Coagulació del plasma problema
2. Afegim una solució 5M d’urea o àcid monocloroacètic al 1%
3. Valoració a les 24 hores:
• El coàgul persisteix: nivells de fXIII correctes
• El coàgul es dissol: Dèficit de fXIII
o Dèficit total de fXIII si el coàgul es dissol en 10 minuts
Fent dilucions seriades del plasma problema es pot fer una determinació semiquantitativa.

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 18 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE ESTUDIEN LA FIBRINÒLISI

PROVES QUE VALOREN LA FIBRINÒLISI GLOBALMENT
• TEMPS DE LISIS DEL COÀGUL DE SANG TOTAL
• TEMPS DE LISIS DEL COÀGUL D’EUGLOBULINES

PRÀCTICA 12: TEMPS DE LISIS DEL COÀGUL DE SANG TOTAL

Objectiu: Determinar el temps que tarda a lisar-se in vitro un coàgul format a partir de sang
total.
Procediment:
1. Posem un tub amb sang coagulada en un bany a 37ºC
2. Observem en temps establerts (8, 24, 48, 72 hores) el moment en el que es lisa el
coàgul, s’observa una dissolució del coàgul, veurem la sang del tub en dues fases,
inferior (cèl·lules) i superior (fase líquida).
Valoració dels resultats:
Valors normals: Temps igual o superior a 72 hores
Temps inferiors indiquen hiperfibrinòlisis

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 19 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRÀCTICA 13: TEMPS DE LISI DEL COÀGUL D’EUGLOBULINES

Objectiu: Temps que tarda a lisar-se un coàgul d’euglobulines plasmàtiques (precipiten quan el
plasma és diluït i acidificat). Són: fibrinogen, plasminogen i activadors del plasminogen. És una
prova més sensible que la determinació del temps de lisi del coàgul de sang total.
Procediment:
1. Fem una mescla de PPP aigua destil·lada i àcid acètic
2. Centrifuguem
3. Decantem el sobrenedant on hi ha els inhibidors de la fibrinòlisi que no són euglobulines
i el descartem
4. Tornem a dissoldre el sediment en un tampó alcalí i afegim trombina per fer que
coagulin les euglobines
5. Incubem a 37ºC el coàgul format i mesurem el temps que tarda a dissoldre’s
Valoració dels resultats:
Valors normals: de 2 a 4 hores
Temps inferiors indiquen hiperfibrinòlisi

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 20 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PRACTICA 14: QUANTIFICACIÓ D’ANTITROMBINA III

Objectiu: Quantificar els nivells d’Antitrombina III presents en una mostra de plasma problema.
Fonament: l’Antisèrum anti-Antitrombina III reacciona amb la’Antitrombina III de la mostra
formant agregats, que provoca un augment de l’absorbància del sistema.
Material:
• Espectofotòmetre i cubetes d’espectofotòmetre
• Pipetes i punts de pipetes
• Eppendorfs
Reactius:
• A: Dissolució tampó
• B: Antisèrum d’anti-Antitrombina III humana
Procediment:
1. Homogeneitzar els reactius suaument i mantenir-los a 37ºC.
2. Introduir en una cubeta:
• 560 µl de dissolució tampó (A)
• 70 µl d’antiserum
• 10µ mostra
3. Determinar l’absorbància inicial a l’espectofotòmetre (ABSi) a 340 nm
4. Tornar a llegir l’absorbància al cap de 5 minuts (ABSf) a 340 nm
CÀLCULS:
Determinar la variació de l’absorbància:
ΔABS=ABSf – ABSi
Extrapolar la concentració d’Antitrombina III utilitzant la corba de cal·libració.

1 2 3 4 5 6

Calibrador (µl) ClNa 9g/L -- 10 25 50 75 100

(µl) 100 90 75 50 25 ---

Factor 0 0.1 0.25 0.5 0.75 1

Absorbància

AT mg/dl 0 3 7.5 15 22.5 30

Calibrador: 30 mg/dl

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 21 de 22

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

LECTURA i INTERPRETACIÓ DE RESULTATS

Nivells de referència: 23-39 mg/dl Nivells
inferiors:
• Malalties hepàtiques greus
• Nefropaties (per pèrdua de proteïnes plasmàtiques
Nivells superiors:
• Processos inflamatoris

Quines són les funcions de l’Antitrombina III en el procés de coagulació?

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 22 de 22

Generalitat de Catalunya
Departament d’Educació
Institut de Vic

PROVES QUE VALOREN LA FIBRINÒLISI PARCIALMENT

• QUANTIFICACIÓ D’ACTIVADORS DEL PLASMINOGEN: Mitjançant ELISAs comercials
• QUANTIFICACIÓ DEL PLASMINOGEN:
• QUANTIFICACIÓ DEL FIBRINOGEN
• DETECCIÓ DE MONÒMERS DE FIBRINA I DELS SEUS COMPLEXOS

• DETERMINACIÓ PDF
• QUANTIFICACIÓ DELS INHIBIDORS DEL PLASMINOGEN

Codi imprès: ACT-R1 Versió: 01 Activitat d’ensenyament-aprenentatge 23 de 22