การศึกษาสภาวะการแยกสารตามตำรับยาที่กฎหมายกำหนด

โดยวิธี Hight performance liquid chromatography

กลุ่มปฏิบัติการ C1
Condition ในการทดลอง
Mode : HPCL
Mobile phase : solution A (Monobasic sodium phosphate pH 3.0) and solution B (Acetonitrile)
Diluent : Acetonitrile and Solution A (5:95)
Column : BDS Hypersil C18 (4.6 mm * 150 mm), 5 μm
Lot. 12203, S/N 10033657, Thermo Scientific, USA.
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : UV 225 nm
Injection volume : 10 μl

Condition ใน USP46
Mode : LC
Mobile phase : solution A (Monobasic potassium phosphate pH 3.0) and solution B (Acetonitrile)
Diluent : Acetonitrile and Solution A (5:95)
Column : 4.6-mm × 25-cm; 5- μm packing L1
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : UV 225 nm
Injection volume : 10 μl
ขั้นตอนการเตรียม Mobile phase
เตรียม mobile phase สําหรับการทดลองโดยใช้ monobasic sodium phosphate ตามวิธีใน USP40 จํานวน 1 ลิตร

ขั้นตอนการเตรียม Standard solution

เตรียม Standard solution ความเข้มข้น 0.5 mg/ml โดยเตรียมเป็น stock solution ที่มีความเข้มข้น 2 mg/ml และ Dilute ให้มีความเข้มข้นของ Standard
solution ตามต้องการ จํานวน 10 ml.

ขั้นตอนการเตรียม Sample solution

การเตรียม Sample solution ให้มีปริมาณ Chlorpheniramine maleate เท่ากับ 0.4 mg/mL โดยเตรียมจํานวน 25 mL
Results
Blank
Results
Standard
Results
Sample
Results
1. Selectivity
คือ การแสดงความสามารถของวิธีวิเคราะห์ในการจำแนกสารที่ต้องการวิเคราะห์ออกจากสาร หรือองค์ประกอบอืน่ ๆ ที่ปนในสารตัวอย่าง

Standard Sample
 2. Resolutions
คือการบอกประสิทธิภาพการทำงานของคอลัมน์ว่าสารที่ถูกชะออกมาได้แยกออกจากกัน
2(tR2−tR1)
R= (W2+W1)

Standard

N1 N2 N3
Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2
tR (cm.) 2.85 12.9 2.85 12.9 2.85 2.85
W (cm.) 0.15 0.55 0.2 0.55 0.08 0.6
resolution 28.71 26.8 29.56
average 28.35667

Sample

N1 N2 N3
Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2
tR (cm.) 2.90 13.55 2.40 13.55 2.90 13.55
W (cm.) 0.5 0.8 0.3 0.7 0.3 0.7
resolution 16.38 22.3 21.3
average 19.99333
 3. Repeatability
เป็นหนึ่งใน system suitability parameters เป็นการทําซ้ําเพื่อตรวจสอบความแม่นยํา ( precision ) โดยการฉีดสารละลายเดียวกันซ้ําๆ เพื่อคํานวณค่าความ
แม่นยํา ซึ่ง คํานวณจากค่า retention time ในหน่วย min หรือ cm
SD×100
%RSD = x̄
Standard

Standard chlorpheniramine solution Retention time (min) Retention time (cm.)

Standard solution 1 8.630 12.90
Standard solution 2 8.630 12.90
Standard solution 3 8.629 12.90
Average 8.6296 12.90
S.D. 0.0005 0
%RSD 0.006% 0%

Sample

Sample chlorpheniramine solution Retention time (min) Retention time (cm.)

Sample solution 1 9.043 13.55
Sample solution 2 9.047 13.55
Sample solution 3 9.051 13.55
Average 9.047 13.55
S.D. 0.004 0
%RSD 0.044% 0%
 4. Peak shape
คือ ค่าที่บ่งบอกความสมมาตรของ peak ซ่ึงถ้า peak สมมาตรจะมีค่า Peak shape = 1 โดย USP 46 กำหนดว่า Peak shape ควรมีค่าไม่มากกว่า 2.0
(NMT 2.0)
𝑊0.05
Symmetry factor = 2𝑑

Number of solutions Standard Chlorpheniramine solution Sample Chlorpheniramine solution

Solution 1 1 1
Solution 2 0.9821 1
Solution 3 1 1
Average 0.9940 1

𝑊0.05 0.50 𝑊0.05 0.70

Standard CPM 1 = = = 1 Sample CPM 1 = = = 1
2𝑑 2(0.25) 2𝑑 2(0.35)

𝑊0.05 0.55 𝑊0.05 0.60

Standard CPM 2 = = = 0.9821 Sample CPM 2 = = =1
2𝑑 2(0.28) 2𝑑 2(0.30)

𝑊0.05 0.60 𝑊0.05 0.60

Standard CPM 3 = = = 1 Sample CPM 3 = = =1
2𝑑 2(0.30) 2𝑑 2(0.30)
 5. Column performance
เป็นหัวข้อที่บ่งบอกถึงประสิทธิภาพของ Column โดยมีการกำหนดค่า N มากกว่า 2000 ตามที่กำหนดใน USP
𝑡𝑅
N = 16( 𝑤 )2

Standard
N1 N2 N3
Peak Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2
t 2.85 12.90 2.85 12.90 2.85 12.90
w 0.15 0.55 0.20 0.60 0.20 0.60
Column performance - 8801.85 - 7396 - 7396
Of Chlorpheniramine
Average 7864.62

Sample

N1 N2 N3
Peak Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2 Peak 1 Peak 2
t 2.90 13.55 2.40 13.55 2.90 13.55
w 0.25 0.80 0.30 0.70 0.30 0.70
Column performance - 4590.06 - 5995.18 - 5995.18
Of Chlorpheniramine
Average 5526.81
 6. Retention time
เป็นเวลา หรือระยะทางที่สารแต่ละชนิดใช้ในการเคลื่อนที่ผ่าน Column
Standard

Standard chlorpheniramine solution Retention time (min) Retention time (cm.)

Standard solution 1 8.630 12.90
Standard solution 2 8.630 12.90
Standard solution 3 8.629 12.90
Average 8.6296 12.90

Sample

Sample chlorpheniramine solution Retention time (min) Retention time (cm.)

Sample solution 1 9.043 13.55
Sample solution 2 9.047 13.55
Sample solution 3 9.051 13.55
Average 9.047 13.55
Discussion

หัวข้อการประเมิน Standard of CPM Sample of CPM เกณฑ์ที่กำหนด (USP46)

Selectivity ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกันชัดเจน ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกันชัดเจน Peak ของสารไม่ซ้อนทับกัน
Resolutions 28.35667 19.99333 NLT 1.5
Repeatability 0.006% 0.044% NMT 0.73%
Peak shape 0.9940 1 NMT 2.0
Column performance 7864.62 5526.81 N > 2,000
Retention time 8.6296 9.047 Retention time ของสาร
มาตรฐาน มีค่าเดียวหรือใกล้เคียง
กับสารตัวอย่าง

Standard
Discussion

หัวข้อการประเมิน Standard of CPM Sample of CPM เกณฑ์ที่กำหนด (USP46)

Selectivity ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกันชัดเจน ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกันชัดเจน Peak ของสารไม่ซ้อนทับกัน
Resolutions 28.35667 19.99333 NLT 1.5
Repeatability 0.006% 0.044% NMT 0.73%
Peak shape 0.9940 1 NMT 2.0
Column performance 7864.62 5526.81 N > 2,000
Retention time 8.6296 9.047 Retention time ของสาร
มาตรฐาน มีค่าเดียวหรือใกล้เคียง
กับสารตัวอย่าง

Sample
Conclusion

หัวข้อการประเมิน Standard of CPM Sample of CPM เกณฑ์ที่กำหนด (USP46) ผลการประเมิน

Selectivity ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกัน ระยะห่างระหว่าง Peak ห่างกัน Peak ของสารไม่ซ้อนทับกัน Pass
ชัดเจน ชัดเจน
Resolutions 28.35667 19.99333 NLT 1.5 Pass
Repeatability 0.006% 0.044% NMT 0.73% Pass
Peak shape 0.9940 1 NMT 2.0 Pass
Column performance 7864.62 5526.81 N > 2,000 Pass
Retention time 8.6296 9.047 Retention time ของสาร Pass
มาตรฐาน มีค่าเดียวหรือ
ใกล้เคียงกับสารตัวอย่าง