Báo cáo

Bài báo khoa học

Nhận dạng phân tử của Bacillus subtilis
BI19 mới phân lập và tối ưu hóa các
điều kiện sản xuất để nâng cao sản xuất
Amylase ngoại bào

Tác giả: Biplab Kumar Dash,M. Mizanur Rahman, and Palash Kumar Sarker

GVHD: TS. Nguyễn Phạm Hương Huyền
BCV: Dương Nguyễn Thùy Dung
Trịnh Thị Thúy Diễm
Bối cảnh
• Amylase đại diện cho một nhóm các enzym ngoại
bào (bao gồm α- amylase, β- amylase và
glucoamylase)
• Thủy phân thành: dextrin và các polymer nhỏ dần
bao gồm các đơn vị glucose
• Chúng đã được tìm thấy rộng rãi nhất là ở vi sinh
vật
• Ứng dụng thực phẩm, chất tẩy rửa, dệt may, dược
phẩm, giấy và các ngành công nghiệp hóa chất tốt
để thủy phân tinh bột
• Chi Bacillus đã và đang trở thành một lựa chọn
đáng tin cậy để tìm ra vi khuẩn mới và đầy hứa hẹn
cho quá trình sản xuất amylase
Thí nghiệm
• Các mẫu đất được thu thập từ các khu vực khác nhau tại Savar,
Dhaka
• Phân lập và sàng lọc Amylolytic của vi khuẩn. 
• Phân tích trình tự 16S rDNA để xác định vi khuẩn.
• B. subtilis  BI19 có thể được khai thác để sản xuất amylase với
chi phí và thời gian tương đối thấp
Thí nghiệm
• Chuẩn bị chất cấy.
• Tối ưu hóa nhiệt độ ấp, môi trường ban đầu pH, thời gian ủ và
tốc độ khuấy để sản xuất amylase
• Tối ưu hóa các nguồn cacbon, nitơ hữu cơ, và nguồn đạm vô
cơ để sản xuất Amylase.
• Ảnh hưởng của Glucose, Chất hoạt động bề mặt và
Polyhydroxy trong sản xuất Amylase 
• Ảnh hưởng của khối lượng môi trường lên men và kích thước
chất cấy lên sản xuất Amylase
•  Ảnh hưởng của pH đến hoạt động và độ ổn định của Amylase
thô.
Chuẩn bị chất cấy:
• Chất cấy sinh dưỡng đã được sử dụng trong các nghiên cứu
hiện tại. 50 mL môi trường cấy có chứa canh trường dinh
dưỡng 13 g / L, pH 7,4 được chuyển hóa được lên men vào
bình Erlenmeyer 250 mL và được khử trùng trong nồi hấp
tiệt trùng (CL-40M, Nhật Bản) ở 15 lbs / inch 2 áp suất ở
121 ∘ C trong 20 phút. Sau khi làm mát ở nhiệt độ phòng,
một vòng nuôi cấy vi khuẩn mới phát triển được chuyển
vào một cách vô trùng. Bình được ủ qua đêm ở 37 ∘C và
150 vòng / phút trong tủ ấm lắc quay (Stuart SI 500, Vương
quốc Anh).
. KẾT QUẢ
1.Phân lập, sàng lọc và xác định vi khuẩn phân giải amylolitic
bacteria

• Thành viên của chi Bacillus được phát hiện là sản xuất tốt hơn
các loại amylase khác nhau [ 21, 22]. Trong mối quan hệ này,
tổng số 35 khuẩn lạc đơn lẻ có hình thái tốt đã được chọn lọc
từ các mẫu đất khác nhau trên cơ sở sự khác biệt logic về hình
thái của chúng trong các đĩa NA. Trong đó có 19 loại được
phát hiện là nhà sản xuất amylase. . Cuối cùng, BI19 chủng
được chọn là nhà sản xuất amylase tốt nhất theo đến giá trị chỉ
số hiệu lực cao nhất
2.Tối ưu hóa các nguồn cacbon, nitơ hữu cơ, và nguồn đạm vô
cơ để sản xuất Amylase.

Quá trình sản xuất amylase của Bacillus subtilis BI19 trong quá trình lên
men bình lắc.
 (a) Ảnh hưởng của các nguồn nitơ hữu cơ khác nhau
(b) ảnh hưởng của các nồng độ peptone khác nhau.
Quá trình sản xuất amylase của Bacillus subtilis BI19 trong quá trình
lên men bình lắc. 
(a) Ảnh hưởng của các nguồn nitơ vô cơ khác nhau
(b) ảnh hưởng của các nồng độ khác nhau của amoni sulfat.
3.Ảnh hưởng của Glucose, Chất hoạt động bề mặt và
Polyhydroxy Thêm vào Cồn trong sản xuất Amylase.

• Việc bổ sung glucose tự do trong môi trường lên men được

phát hiện để ngăn chặn sự sản xuất amylase
• Việc Bổ sung chất hoạt động bề mặt và rượu polyhydroxy
trong môi trường sản xuất để tăng tiết amylase
4.Tối ưu hóa nhiệt độ ấp, môi trường ban đầu pH, thời gian ủ
và tốc độ khuấy để sản xuất amylase

Quá trình sản xuất amylase của Bacillus subtilis BI19 trong quá

trình lên men bình lắc. 
(a) Ảnh hưởng của việc bổ sung các nồng độ khác nhau của
glucozơ trong môi trường bazơ và
(b) ảnh hưởng của việc bổ sung các nguyên tố khác nhau trong
môi trường bazơ
5. Ảnh hưởng của khối lượng môi trường lên men và kích thước chất cấy lên sản xuất Amylase. 

• Thể tích môi trường lên men đóng vai trò quan trọng trong
việc cung cấp không khí và chất dinh dưỡng, tăng trưởng của
vi sinh vật và sản xuất enzyme
• Sự gia Tăng hơn nữa của kích thước chất cấy làm giảm đáng
kể sản lượng, có thể là do sự phát triển nhanh chóng của vi
khuẩn và vi khuẩn tiêu thụ nhanh các nguồn dinh dưỡng thiết
yếu trong giai đoạn đầu.
6.Tối ưu hóa nhiệt độ ấp, môi trường ban đầu pH, thời gian ủ
và tốc độ khuấy để sản xuất amylase

(a) Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của amylase thô.
(b) Ảnh hưởng của nhiệt độ đến độ ổn định
(c) Ảnh hưởng của pH đến hoạt động của amylase thô.
(d) Ảnh hưởng của pH đến độ ổn định của amylase thô.
 
7.Ảnh hưởng của pH đến hoạt động và độ ổn định
của Amylase thô.
Ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy khác nhau đến sản xuất
amylase của Bacillus subtilis BI19 trong quá trình lên men bình lắc.
 Tổng kết
• Việc tối ưu hóa các thành phần môi trường và các điều kiện nuôi cấy để
tăng cường sản xuất amylase cuối cùng của B. subtilis BI19 và mô tả một
phần đặc tính của amylase thô đã được thực hiện trong nghiên cứu này.
Những phát hiện mới nhất và quan trọng nhất là khả năng của dòng này sử
dụng bột gạo làm nguồn cacbon duy nhất để tạo ra mức amylase tối đa chỉ
sau 24 giờ ủ. Quá trình tổng hợp và bài tiết enzyme bị ảnh hưởng rất nhiều
khi bổ sung chất hoạt động bề mặt (chất cảm ứng dương tính) và glucose
dễ chuyển hóa (chất cảm ứng âm tính) trong môi trường cơ bản. Sự sản
xuất enzym tối ưu của dòng vi khuẩn được tìm thấy ở 37C, trong khi hoạt
động của enzym tối đa được tìm thấy ở 60∘C và pH 5,0–7,0. Nghiên cứu
sâu hơn sẽ được lên kế hoạch và thực hiện để cải thiện vết bẩn, tinh chế
amylase thô, xác định trình tự gen được mã hóa của amylase, và tiếp tục
mở rộng quy mô bằng cách tăng thêm tỷ lệ sử dụng fermenter.