Enzimologija

(Primeri zadataka sa pismenih

ispita u školskoj 2016/2017. g.)
Specifična aktivnost peroksidaze u sirovom ekstraktu iznosi 2 U/mg, dok je ukupna masa
proteina u ekstraktu 0,2 g. Nakon jonoizmenjivačke hromatografije, koncentracija enzimske
aktivnosti u prečišćenom rastvoru enzima je iznosila 5 U/mL, a koncentracija proteina 200
μg/mL, dok je zapremina rastvora bila 8 mL. Izračunajte prinos i stepen prečišćenja.
Protein kinaza iz Neurospora crassa ima energiju aktivacije 44512 J/mol. Izračunajte koliko
će puta brže teći reakcija na 37oC nego na 25oC?
Pri određivanju molekulske aktivnosti katalaze dobiјeni su sledeći rezultati:
a. Enzimski preparat čistoće 85% je rastvoren u puferu tako da koncetracija bude 2.95 mg/L;
b. Manometrijski je određeno da 0.1 mL tog preparata oslobađa 340 µL kiseonika (svedeno
na normalne uslove), u prisustvu vodonik peroksida, u toku 10 minuta;
c. Može se uzeti da je molekulska masa katalaze 225000.
Izračunajte molekulsku aktivnost katalaze, kao i trajanje katalitičkog ciklusa.

Km supstrata za hipotetički enzim iznosi 1 mM, dok je Ki za kompetitivni inhibitor navedenog

enzima 10-4 M. Brzina neinhibirane reakcije je jednaka brzini inhibirane reakcije, kada je
koncentracije supstrata 10-3 M u neinhibiranoj, a 50 mM u inhibiranoj reakciji. Izračunajte
koncentraciju inhibitora pod datim uslovima.
1% (w/v) rastvor skroba je izhidrolizovan na pH 6,7 pomoću 15 μg β-amilaze (152000 Da).
Utvrđeno je da je maksimalna početna brzina oslobađanja maltoze (342 Da) 8,5 mg u minuti.
Izračunati specifičnu aktivnost β-amilaze. (2 boda)
Za konstantnu koncentraciju nekog enzima (1 μM) urađena su kinetička merenja i dobijeni
rezultati su prikazani u tabeli i na grafiku.
[S] Vo
(μM) (μM/min)
2 2,9

1/Vo (μM/min)-1
3 3,8
4 4,4
5 5,0
6 5,4
7 5,8
8 6,2
9 6,4
10 6,7
1/[S] (105 M-1)
Na osnovu ovih podataka odrediti: Vmax, KM i kcat za taj enzim. (Σ3 boda)
Izračunati koncentraciju nekompetitivnog inhibitora (Ki = 4 x 10-6 M) koja je potrebna za 65%
inhibicije enzimom katalizovane hemijske reakcije. (2 boda)
Napisati jednačinu koja povezuje konstantu brzine hemijske reakcije sa temperaturom.
Prikazati ovu zavisnost grafički. Protein kinaza iz Neurospora crassa ima energiju aktivacije od
57,512 kJ/mol: izračunati koliko brže će ova reakcija teći na 37˚C nego na 15˚C. (Σ3 boda)
Acetilholinesteraza (turnover broj 25000 s-1) katalizuje hidrolizu acetilholina. Izračunajte vreme
potrebno enzimu da razloži jedan molekul acetilholina. 2p

Rezultati analize aktivnosti nekog enzima su prikazani u tabeli. (4x0,75=3p)

Na osnovu ovih podataka odredite:
(a) Vmax;
(b) KM;
(c) Početnu brzinu na [S] = 1 x 10‒1 M;
(d) Količinu nastalog proizvoda nakon 5 minuta
za [S] = 2 x 10‒3 M.

Energija aktivacije za razlaganje vodonik-peroksida do vode i molekulskog kiseonika iznosi 42

kJ mol-1. U prisustvu katalaze ona se smanjuje na 7,0 kJ mol-1. Izračunajte temperaturu na kojoj
bi brzina nekatalizovane reakcije bila jednaka onoj u prisustvu kazalaze na 20ºC, uz pretpostavku
da je pre-eksponencijalni faktor isti u oba slučaja. 2p
 Popunite tabelu. (2p)
Ukupno dobijeno Specifična Stepen Prinos
Protein (mg) Enzim (U) aktivnost prečiščenja (%)
Korak u prečiščavanju:
Polazni materijal 714 5880
Taloženje 40% AS 253 5584
DEAE-celuloza, pH 9,0 5,1 5174

Enzim (1,84 μg; Mr = 36800) katalizuje reakciju u prisustvu viška supstrata brzinom od 4,2
μmol supstrata/min. Izračunajte turnover broj tog enzima. (2p)
Na slici su prikazani podaci dobijeni merenjem kinetike enzimom katalizovane reakcije bez
(E) i u prisustvu 10 mM inhibitora A (+A) i 5 mM inhibitora B (+B). (1+2=3p)

Na osnovu ovih rezultata: (a) Odredite tip inhibicije za oba inhibitora; (b) Izračunajte konstantu
inhibicije (KI) za oba inhibitora.
200 mg enzima je rastvoreno u 5 mL pufera. Pretpostavimo da 0,5 mL ovog rastvora
prevodi 6,0 mmol supstrata za 30 sekundi. Izračunajte specifičnu aktivnost enzima. 2p

Za izvođenje nekog eseja potrebno je 2 x 103 jedinica enzima. Izračunajte koliko najviše
ovakvih eseja može da se uradi sa 0,8 katala istog enzima? 2p

Brzina neke enzimom katalizovane reakcije iznosi 35 μmol/min, pri [S] = 10-4 M i KM =
2 x 10-5 M. Izračunajte brzinu reakcije za [S] = 2 x 10-6 M?

U tabeli su prikazani kinetički parametri za enzim (10 μM) koji hidrolizuje spektar
mogućih supstrata (A-E).
A B C D E
Km (mM) 1,0 0,44 0,81 0,49 1,2
Vmax (μM min-1) 11,5 9,80 13,2 11,7 10,4
Računski obrazložite koji će od supstrata biti najbrže izhidrolizovan.

Karbonska anhidraza ima jedno aktivno mesto i molekulsku masu od 30000 g/mol.
Ukoliko 8 μg enzima katalizuje hidrataciju 0,146 g CO2 za 30 sekundi na 37°C,
izračunajte turnover broj ovog enzima.