KHẢ NĂNG TƯƠNG THÍCH SINH HỌC CỦA XƯƠNG GHÉP:

ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SỐNG SÓT VÀ TĂNG SINH CỦA TẾ BÀO

GỐC ĐA DÒNG NHÍM TRONG ỐNG NGHIỆM

Thay thế ghép xương (BGS) được sử dụng rộng rãi trong thực hành lâm sàng. Đối với các phương pháp dựa
trên tế bào gốc đối với kỹ thuật mô xương, BGS cần thể hiện đủ khả năng tương thích sinh học trong môi
trường in vitro. Nghiên cứu này được thiết kế để chứng minh ảnh hưởng của sáu BGS khác nhau đối với sự
tăng sinh và hoạt động trao đổi chất của tế bào gốc đa tuyến trung mô của lợn (pMSC) trong ống nghiệm.
PMSC có nguồn gốc từ tủy xương được nuôi cấy trong 24 giờ với phần rửa giải của sáu BGS khác nhau. Các
chất rửa giải được tạo ra bằng cách ủ BGS ba lần liên tiếp trong 24 giờ với môi trường nuôi cấy và thu thập các
chất nổi trên mặt. Sức sống và sự tăng sinh của pMSC với sự có mặt của chất rửa giải từ lần ủ thứ nhất, thứ hai
và thứ ba được đánh giá bằng cách định lượng thử nghiệm WST của các tế bào hoạt động chuyển hóa.
Nuôi cấy pMSC với chất rửa giải trong mọi trường hợp dẫn đến giảm số lượng tế bào theo cách phụ thuộc
nồng độ. Ít nhất mất 65% tế bào so với đối chứng (môi trường nuôi cấy không có chất rửa giải) có thể được
quan sát thấy trong sự hiện diện của chất rửa giải không pha loãng. Ảnh hưởng tiêu cực của chất rửa giải thay
đổi đáng kể giữa các BGS. Trong mọi trường hợp, chất rửa giải thứ hai và thứ ba ít mạnh hơn trong các tác
động tiêu cực của chúng đối với sức sống / sự tăng sinh của tế bào. Để kết luận, BGS được kiểm tra ở đây nên
được gửi đến quá trình tạo phôi kỹ lưỡng trước khi sử dụng in vitro cho các cấu trúc dựa trên tế bào để tối đa
hóa khả năng sống của tế bào cho kỹ thuật mô xương. (Folia Morphol 2011; 70, 3: 154 – 160 )

GIỚI THIỆU đồng nghiệp [8, 9, 26], người gọi chúng là

Khiếm khuyết xương lớn đòi hỏi phải ghép
xương để tái tạo. Tính khả dụng của tự động
có thể bị hạn chế và liên quan đến tỷ lệ mắc
bệnh của nhà tài trợ đáng kể [19, 45, 46].
Allogcraft chịu rủi ro từ chối miễn dịch và
truyền bệnh [22]; do đó, chất thay thế ghép
xương (BGS) được sử dụng rộng rãi trong
thực hành lâm sàng. Chúng bao gồm gốm
hydroxyapatite và beta-tricalcium phosphate
[11, 40], vật liệu tổng hợp xương khử khoáng
[5, 32], và các polyme bao gồm axit
polyglycolic và polylactic [24]. Thay thế
ghép xương nên duy trì tính toàn vẹn không
gian, cung cấp sự ổn định cơ học, cho phép
gắn tế bào, ăn mòn mạch máu và lắng đọng
xương, và nên được phân hủy, cuối cùng dẫn
đến thay thế hoàn toàn bằng xương.
Hiệu quả của BGS có thể được tăng cường
bằng cách kết hợp các giàn giáo thích hợp với
các tế bào tạo xương [34]. Kể từ khi phát hiện
và phân lập các tế bào tạo xương từ tủy
xương trưởng thành của Friedenstein và các
các nguyên bào sợi đơn vị hình thành khuẩn
lạc (CFU-F) hoặc tế bào gốc tế bào tủy
xương (BMSC), nghiên cứu đã tập trung vào
việc nuôi cấy và mô tả các tế bào gốc này
trong ống nghiệm [4]. Tiềm năng đa dòng
của chúng đã được chứng minh ở người [28]
và các loài khác [3, 30].
Các tế bào gốc đa dòng đã được chứng minh
là một nguồn tuyệt vời của các tế bào tạo
xương. Khi kết hợp với BGS, các tế bào gốc
này có thể tăng cường tái tạo xương in vivo
[4, 10, 16, 35]. Đối với các mục đích kỹ thuật
mô, tức là việc nuôi cấy in vitro của hạt giống
tế bào
cấu trúc, vật liệu giàn giáo phải hỗ trợ các tế
bào gốc đa dòng khả năng tồn tại để giảm
thiểu lượng tế bào tài trợ cần thiết trong khi
cung cấp số lượng lớn các tế bào xương chức
năng.
Hầu hết các nghiên cứu về tính tương thích
sinh học của BGS được thiết kế như các thí
nghiệm gieo hạt [23, 37] và đã sử dụng các
dòng tế bào liên tục [25, 38, 41], các nguyên phê duyệt và phù hợp với ủy ban đạo đức địa phương
bào xương [1, 18], nguyên bào sợi [15] hoặc (V 742-72241.121-1415-2 / 04).
các tế bào không sinh sản khác [43]. Ngoài Thay thế ghép xương
ra, hầu hết các nghiên cứu đều đề cập đến
việc thử nghiệm BGS đơn lẻ, không thể so Sáu loại BGS vô trùng khác nhau thuộc loại
sánh trực tiếp giữa các BGS khác nhau. Cuối hóa học và hình thái khác nhau đã được mua
cùng, thông tin về tác dụng ban đầu của BGS và bảo quản ở nhiệt độ phòng (Bảng 1).
đối với chuyển hóa tế bào là khan hiếm. Chúng là các vật liệu hạt tổng hợp có nguồn
Nghiên cứu này được thiết kế để chứng minh gốc sinh học hoặc thường được tìm thấy
và so sánh các tác động ban đầu của sáu BGS trong thực hành lâm sàng hiện nay: BioOss®
khác nhau đối với sự tăng sinh và hoạt động (Geistlich, Wolhusen, Thụy Sĩ) [12, 13, 48],
trao đổi chất của tế bào gốc đa tuyến trung Straumann Bone Ceramic® (Straumann AG,
mô của lợn (pMSC) trong ống nghiệm. Freiburg, Đức), Cerasorb® (Curasan AG,
Kleinostheim, Đức) [27], NanoBone®
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP (Artoss GmbH, Rostock, Đức), NovaBone-
Nghiên cứu này đã được Bộ trưởng Bộ Tự nhiên, OM® (NovaBone Products, Alachua, Fl,
Môi trường và Lâm nghiệp của Schleswig-Holstein USA) và Pepgen P15® (Friadent GmbH,
Mannheim, Đức) [25, 29, 39].
Bảng 1. Đặc điểm của chất thay thế ghép xương với khả năng tương thích sinh học tốt trong
môi trường in vivo
Kích Độ Kích
Tên hãng Vâ ̣t liêụ thước hạt xốp thước lỗ
[mm] [%] [μm]
BioOss® Deproteinised xương bò 1–2
Straumann
Tổng hợp, 60% HA, 40% β-TCP 0.5–1.0 90 100 – 500
Bone Ceramic®
Cerasorb® Tổng hợp, > 99% β-TCP thiêu kết ở > 1000 ° C 0.5–1.0 30 ± 5 0.1 – 50
NanoBone® Tổng hợp, 76% HA, 24% SiO2 được sản xuất ở 700 ° C 0.6 > 80 0.01–0.02
NovaBone-
Tổng hợp, Si, Na, Ca, P, O 0.09–1.0
OM®
Bovine HA được phủ peptide (= miền hoạt động của
Pepgen P15® 0.25–0.42
collagen I)

Thế hệ của BGS eluates Dung dịch rửa giải BGS được tạo ra bằng
cách ủ 0,1 ml mỗi BGS ba lần liên tiếp trong
Tính chất vật liệu của BGS, như kích thước
24 giờ với 1 mL môi trường nuôi cấy (CM)
hạt, hình thái bề mặt, điện tích, độ xốp và
ở 37 ° C và thu thập chất nổi. Khoảng thời
kích thước lỗ rỗng, có thể ảnh hưởng đáng kể
gian 72 giờ này được chọn để đánh giá tác
đến sự tuân thủ tế bào [7, 17, 21], tăng sinh
động ban đầu của các yếu tố hòa tan được
và kiểu hình [47], so sánh trực tiếp giữa các
giải phóng từ BGS cũng như để kiểm tra các
BGS khác nhau khó khăn. Trái ngược với các
tác động phụ thuộc thời gian. Các chất rửa
thí nghiệm gieo hạt thông thường, các chất
giải thu được của quá trình ủ thứ nhất, thứ hai
rửa giải BGS được sử dụng để làm giảm sự
và thứ ba được lưu trữ ở 4 ° C cho đến khi sử
phức tạp của các điều kiện nuôi cấy in vitro
dụng tiếp, để nuôi cấy pMSC (xem bên
và đưa ra so sánh giữa các BGS khác nhau có
dưới).
thể. Tất cả các thí nghiệm được thực hiện
trong ba lần. Nguồn tế bào và nuôi cấy tế bào
Các tế bào gốc đa dòng được thu hoạch từ tủy
xương chậu của một người trưởng thành (23
tháng tuổi) minttig (Ellegaard Göttingen
Minipigs A / S, Dalmose, Đan Mạch), như đã
mô tả trước đây [20]. Tóm lại, dưới gây mê
toàn thân với điều kiện ketamine và xylazine
và vô trùng, khoảng 1,5 ml xương xốp đã
được thu hoạch, cắt thành các mảnh nhỏ 0,1
0,1,5 cm và được xử lý trước với 0,1%
collagenase (Nordmark, Ueteren, Đức) trong
2 giờ ở 37 giờ ° C. Sau khi rửa kỹ bằng PBS
(pH = 7.4) để loại bỏ dung dịch collagenase,
các tế bào được nhuộm màu xanh lam với 4%
trypan (Gibco, Paisly, Scottland, Vương
quốc Anh), được tính bằng máy đo huyết áp
và được mạ ở mật độ 5.000 tế bào / cm2 Bình
nuôi cấy mô T75 (đoạn 0). CM bao gồm môi
trường Eagle đã được biến đổi của Dulbecco
(DMEM) được bổ sung với 105 IU / L
penicillin, 100 mg / L streptomycin (tất cả
Biochrom AG, Berlin, Đức), 1 mM L-
ascorbic acid (Sigma, Deisenhofen, Đức) và
10 % FCS. Các tế bào được nuôi cấy trong
điều kiện tiêu chuẩn ở 37 ° C trong bầu không
khí ẩm 95% không khí và 5% CO2. Môi
trường đã được thay đổi đầu tiên sau 24 giờ
để loại bỏ các tế bào không tuân thủ và hai
lần mỗi tuần sau đó. Ở 70 708080% hợp lưu
(vào ngày 14), các tế bào được tách ra dưới
sự kiểm soát bằng kính hiển vi sau khi rửa
bằng D-PBS (Gibco, Paisly, Scottland, UK)
trong 2 phút sau đó ủ với Accutase (PAA,
Cölbe, Đức) trong 15 phút tối thiểu ở 37 ° C.
Các tế bào tách ra đã bị đình chỉ trong CM,
ly tâm trong 5 phút với tốc độ 1.200 vòng /
phút, được treo lại trong CM, nhuộm màu
xanh lam trypan, được tính như trên, thay thế
ở mật độ 2.500 tế bào / cm2 (đoạn 1) và nuôi
cấy cho đến khi kết thúc Tích 80%) một lần
nữa. Cấy truyền tiếp tục được tiếp tục đến
đoạn 3 như mô tả. Điều này cho phép tiêu
chuẩn hóa vì cùng một dòng tế bào đã được
sử dụng cho tất cả các thí nghiệm.
Kiểm tra tương thích sinh học
PMSC tiểu phần mở rộng của đoạn 3 đã được
nhân đôi trên các đĩa 96 giếng với mật độ
5.000 tế bào trên mỗi giếng (mẫu) trong 100
μL CM và được phép bám vào tấm. Một hàng
tiêu chuẩn trùng lặp gồm 20.000, 10.000,
5.000, 2.500, 1.250, 625, 312 và 156 ô trên
mỗi giếng trong 100 μL CM được dùng để
thiết lập đường cong chuẩn (tiêu chuẩn) trên
mỗi tấm. Giếng có 100 μL CM nhưng không
có ô được dùng làm điều khiển âm (khoảng
trống). Sự phân bố đồng nhất của các tế bào
trong các giếng mẫu được xác nhận bằng
kiểm tra bằng kính hiển vi sau 24 giờ cấ y.
Các tế bào tuân thủ sau đó được nuôi cấy với
các phần tử ủ thứ nhất, thứ hai và thứ ba được
tạo ra trước đó của sáu BGS khác nhau (xem
ở trên). Để nghiên cứu các hiệu ứng phụ
thuộc nồng độ, chất rửa giải được sử dụng
không pha loãng (100%) hoặc pha loãng với
CM theo tỷ lệ 1: 1 (50%), 1: 3 (25%) hoặc 1:
7 (12,5%). Giếng được cấ y chỉ với CM (tức
là 0% chất rửa giải) được dùng làm đối
chứng.
Sau 24 giờ nuôi cấy pMSC khả năng sống sót
và tăng sinh được đánh giá bằng cách định
lượng các tế bào hoạt động trao đổi chất bằng
cách sử dụng xét nghiệm WST-1 (Roche
Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)
[2]. Theo hướng dẫn của nhà sản xuất,
phương tiện đã được thay thế bằng giải pháp
10% WST-1. Sau 45 phút ủ ở 37 ° C, sự phân
tách WST-1 và sự hình thành formazan bằng
các tế bào hoạt động trao đổi chất được đo
bằng phương pháp trắc quang ở 450nm với
đầu đọc đĩa 96 ELISA (SPECTRAmax®
PLUS, Thiết bị phân tử, Sunnyvale, CA, Hoa
Kỳ). Sáu phép đo cho mỗi BGS và loại rửa
giải được ghi lại.
Đánh giá thống kê
Phân tích thống kê bao gồm phân tích hai yếu
tố về phương sai cho các biện pháp lặp lại
của các giá trị tuyệt chủng. Mức ý nghĩa được
đặt ở p <0,05.
REFERENCES
1. Acil Y, Terheyden H, Dunsche A, Fleiner B, Jepsen S
(2000) Three-dimensional cultivation of human osteoblast-
like cells on highly porous natural bone mineral. J Biomed
Mater Res, 51: 703–710.
2. Berridge MV, Herst PM, Tan AS (2005) Tetrazolium dyes
as tools in cell biology: new insights into their cellular
reduction. Biotechnol Annu Rev, 11: 127–152.
3. Bosnakovski D, Mizuno M, Kim G, Takagi S, Okumura M,
Fujinaga T (2005) Isolation and multilineage differentiation of
bovine bone marrow mesenchymal stem cells. Cell Tissue Res,
319: 243–253.
4. Bruder SP, Kraus KH, Goldberg VM, Kadiyala S (1998)
The effect of implants loaded with autologous mesenchymal
stem cells on the healing of canine segmental
bone defects. J Bone Joint Surg Am, 80: 985–996.
5. Cammack GV, 2nd, Nevins M, Clem DS, 3rd, Hatch JP,
Mellonig JT (2005) Histologic evaluation of mineralized
and demineralized freeze-dried bone allograft for ridge
and sinus augmentations. Int J Periodontics Restorative
Dent, 25: 231–237.
6. Delloye C, Cnockaert N, Cornu O (2003) Bone substitutes
in 2003: an overview. Acta Orthop Belg, 69: 1–8.
7. Fischer EM, Layrolle P, Van Blitterswijk CA, De Bruijn JD
(2003) Bone formation by mesenchymal progenitor cells
cultured on dense and microporous hydroxyapatite
particles. Tissue Eng, 9: 1179–1188.
8. Friedenstein AJ, Chailakhjan RK, Lalykina KS (1970) The
development of fibroblast colonies in monolayer cultures
of guinea-pig bone marrow and spleen cells. Cell
Tissue Kinet, 3: 393–403.
9. Friedenstein AJ, Piatetzky S, II, Petrakova KV (1966)
Osteogenesis
in transplants of bone marrow cells. J Embryol
Exp Morphol, 16: 381–390.
10. Gronthos S, Akintoye SO, Wang CY, Shi S (2006) Bone
marrow stromal stem cells for tissue engineering. Periodontol
2000, 41: 188–195.
11. Guzzardella GA, Torricelli P, Nicoli-Aldini N, Giardino R
(2003) Osseointegration of endosseous ceramic implants
after postoperative low-power laser stimulation:
an in vivo comparative study. Clin Oral Implants Res,
14: 226–232.
12. Hammerle CH, Chiantella GC, Karring T, Lang NP (1998)
The effect of a deproteinized bovine bone mineral on
bone regeneration around titanium dental implants.
Clin Oral Implants Res, 9: 151–162.
13. Hurzeler MB, Quinones CR, Kirsch A, Gloker C,
Schupbach P, Strub JR, Caffesse RG (1997) Maxillary
sinus augmentation using different grafting materials
and dental implants in monkeys. Part I. Evaluation of
anorganic bovine-derived bone matrix. Clin Oral Implants
Res, 8: 476–486.
14. Jäger M, Fischer J, Schultheis A, Lensing-Hohn S, Krauspe
R 29. Qian JJ, Bhatnagar RS (1996) Enhanced cell attachment
(2006) Extensive H(+) release by bone substitutes affects
biocompatibility in vitro testing. J Biomed Mater
Res A, 76: 310–322.
15. Kauschke E, Rumpel E, Fanghanel J, Bayerlein T,
Gedrange T, Proff P (2006) The in vitro viability and
growth of fibroblasts cultured in the presence of different
bone grafting materials (NanoBone and Straumann
Bone Ceramic). Folia Morphol, 65: 37–42.
16. Kon E, Muraglia A, Corsi A, Bianco P, Marcacci M,
Martin I, Boyde A, Ruspantini I, Chistolini P, Rocca M,
Giardino R, Cancedda R, Quarto R (2000) Autologous
bone marrow stromal cells loaded onto porous hydroxyapatite
ceramic accelerate bone repair in criticalsize
defects of sheep long bones. J Biomed Mater Res,
49: 328–337.
17. Kruyt MC, Persson C, Johansson G, Dhert WJ, de Bruijn
JD
(2006) Towards injectable cell-based tissue-engineered
bone: the effect of different calcium phosphate
microparticles and pre-culturing. Tissue Eng,
12: 309–317.
18. Kübler A, Neugebauer J, Oh JH, Scheer M, Zoller JE
(2004) Growth and proliferation of human osteoblasts
on different bone graft substitutes: an in vitro study.
Implant Dent, 13: 171–179.
19. Laurie SW, Kaban LB, Mulliken JB, Murray JE (1984)
Donor-site morbidity after harvesting rib and iliac bone,
Plast Reconstr Surg, 73: 933–938.
20. Liu Y, Springer I, Zimmermann CE, Terheyden H (2007)
Missing osteogenic effect of expanded autogenous
bone marrow stromal cells in minipig model of sinus
augmentation with simultaneous dental implant installation.
Clin Oral Implants Res, 19: 497–504.
21. Mankani MH, Kuznetsov SA, Fowler B, Kingman A,
Robey PG (2001) In vivo bone formation by human bone
marrow stromal cells: effect of carrier particle size and
shape. Biotechnol Bioeng, 72: 96–107.
22. Marx RE, Carlson ER (1993) Tissue banking safety:
caveats
and precautions for the oral and maxillofacial surgeon.
J Oral Maxillofac Surg, 51: 1372–1379.
23. Mauney JR, Blumberg J, Pirun M, Volloch V, Vunjak-
-Novakovic G, Kaplan DL (2004) Osteogenic differentiation
of human bone marrow stromal cells on partially demineralized
bone scaffolds in vitro. Tissue Eng, 10: 81–92.
24. Nair Pn PR, Schug J (2004) Observations on healing of
human tooth extraction sockets implanted with bioabsorbable
polylactic-polyglycolic acids (PLGA) copolymer
root replicas: a clinical, radiographic, and histologic
follow-up report of 8 cases. Oral Surg Oral Med
Oral Pathol Oral Radiol Endod, 97: 559–569.
25. Nguyen H, Qian JJ, Bhatnagar RS, Li S (2003) Enhanced
cell attachment and osteoblastic activity by P-15 peptide-
coated matrix in hydrogels. Biochem Biophys Res
Commun, 311: 179–186.
26. Owen M (1988) Marrow stromal stem cells. J Cell Sci
Suppl, 10: 63–76.
27. Palm F, Hilscher C, Kind M (2006) Einsatz einer neuen
synthetischen,
hasenreinen beta-TCP Keramik in der Mund-,
Kiefer- und Gesichtschirurgie. Implantologie J, 4: 6–12.
28. Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, Jaiswal RK,
Douglas R, Mosca JD, Moorman MA, Simonetti DW, Craig S,
Marshak DR (1999) Multilineage potential of adult
human mesenchymal stem cells. Science, 284: 143–147.
to anorganic bone mineral in the presence of a synthetic
peptide related to collagen. J Biomed Mater Res,
31: 545–554.
30. Ringe J, Kaps C, Schmitt B, Buscher K, Bartel J,
Smolian H, Schultz O, Burmester GR, Haupl T,
Sittinger M (2002) Porcine mesenchymal stem cells.
Induction of distinct mesenchymal cell lineages. Cell
Tissue Res, 307: 321–327.
31. Saalfeld U, Meenen NM, Jures TT, Saalfeld H (1994)
Solubility behaviour of synthetic hydroxyapatites in
aqueous solution: influence of amorphous constituents
on pH value. Biomaterials, 15: 905–908.
32. Scarano A, Degidi M, Iezzi G, Pecora G, Piattelli M, Orsini
G,
Caputi S, Perrotti V, Mangano C, Piattelli A (2006)
Maxillary sinus augmentation with different biomaterials:
a comparative histologic and histomorphometric
study in man. Implant Dent, 15: 197–207.
33. Schaffner P, Dard MM (2003) Structure and function
of RGD peptides involved in bone biology. Cell Mol
Life Sci, 60: 119–132.
34. Schliephake H, Knebel JW, Aufderheide M, Tauscher M
(2001) Use of cultivated osteoprogenitor cells to increase
bone formation in segmental mandibular defects:
an experimental pilot study in sheep. Int J Oral
Maxillofac Surg, 30: 531–537.
35. Shang Q, Wang Z, Liu W, Shi Y, Cui L, Cao Y (2001)
Tissue-engineered bone repair of sheep cranial defects
with autologous bone marrow stromal cells. J Craniofac
Surg, 12: 586–593.
36. Shin H, Temenoff JS, Bowden GC, Zygourakis K, Farach-
-Carson MC, Yaszemski MJ, Mikos AG (2005) Osteogenic
differentiation of rat bone marrow stromal cells
cultured on Arg-Gly-Asp modified hydrogels without
dexamethasone and beta-glycerol phosphate. Biomaterials,
26: 3645–3654.
37. Takahashi Y, Yamamoto M, Tabata Y (2005) Osteogenic
differentiation of mesenchymal stem cells in biodegradable
sponges composed of gelatin and beta-tricalcium
phosphate. Biomaterials, 26: 3587–3596.
38. Tamura S, Kataoka H, Matsui Y, Shionoya Y, Ohno K,
Michi KI, Takahashi K, Yamaguchi A (2001) The effects
of transplantation of osteoblastic cells with bone
morphogenetic
protein (BMP)/carrier complex on bone repair.
Bone, 29: 169–175.
39. Trasatti C, Spears R, Gutmann JL, Opperman LA (2004)
Increased Tgf-beta1 production by rat osteoblasts in the
presence of PepGen P-15 in vitro. J Endod, 30: 213–217.
40. Trisi P, Rao W, Rebaudi A, Fiore P (2003) Histologic effect
of pure-phase beta-tricalcium phosphate on bone
.
regeneration in human artificial jawbone defects. Int
J Periodontics Restorative Dent, 23: 69–77.
41. Tsuchiya K, Mori T, Chen G, Ushida T, Tateishi T,
Matsuno T, Sakamoto M, Umezawa A (2004) Customshaping
system for bone regeneration by seeding marrow
stromal cells onto a web-like biodegradable hybrid
sheet. Cell Tissue Res, 316: 141–153.
42. Turhani D, Weissenbock M, Watzinger E, Yerit K, Cvikl
B,
Ewers R, Thurnher D (2005) Invitro study of adherent
mandibular osteoblast-like cells on carrier materials. Int
J Oral Maxillofac Surg, 34: 543––550.
43. Wanschitz F, Nell A, Patruta S, Wagner A, Ewers R (2005)
Influence of three currently used bone replacing materials
on the in vitro proliferation of human peripheral blood
mononuclear cells. Clin Oral Implants Res, 16: 570–574.
44. Wiedmann-Al-Ahmad M, Gutwald R, Gellrich NC,
Hubner U, Schmelzeisen R (2005) Search for ideal
biomaterials
to cultivate human osteoblast-like cells for reconstructive
surgery. J Mater Sci Mater Med, 16: 57–66.
45. Younger EM, Chapman MW (1989) Morbidity at bone
graft donor sites. J Orthop Trauma, 3: 192–195.
46. Zimmermann CE, Borner BI, Hasse A, Sieg P (2001)
Donor
site morbidity after microvascular fibula transfer.
Clin Oral Invest, 5: 214–219.
47. Zimmermann CE, Gierloff M, Acil Y, Terheyden H,
Wiltfang J (2007) Biocompatibility of bone graft substitutes:
Effects on adherence, proliferation and phenotype
of porcine multilineage stem cells in vitro. 57th
Annual Meeting of the German Association for Oral
and Maxillofacial Surgery, Wiesbaden.
48. Zitzmann NU, Scharer P, Marinello CP, Schupbach P,
Berglundh T (2001) Alveolar ridge augmentation with
Bio-Oss: a histologic study in humans. Int J Periodontics
Restorative Dent, 21: 288–295