Machine Translated by Google

hội đàm

Lập trình lại hạt nhân và tạo tế bào gốc

JB Gurdon*, JA Byrne và S. Simonsson

Viện Nghiên cứu Ung thư Wellcome Trust Cancer UK, Đường Tennis Court, Cambridge CB2 1QR, Vương quốc Anh; và Khoa Động vật học, Đại học
Cambridge, Cambridge CB2 3EJ, Vương quốc Anh

Việc cấy ghép nhân tế bào soma vào trứng đã được mã hóa dẫn đến việc marker endermin (5) từ giai đoạn neurula muộn trở đi.
lập trình lại chính sự biểu hiện gen và chuyển đổi số phận tế bào. Ngay trước giai đoạn này, các tế bào nội bì đã được xác định [tức là chúng
Chúng tôi xem xét hiệu quả của việc lập trình lại hạt nhân bằng cách chỉ hình thành các dẫn xuất nội bì dưới dạng mẫu cấy (6, 7)] và được xác
chuyển giao hạt nhân. Việc cấy ghép nối tiếp các hạt nhân từ những định [tức là chúng chỉ hình thành các dẫn xuất nội bì nếu được cấy vào
phôi chuyển phôi đầu tiên bị khiếm khuyết và việc ghép các tế bào từ các vị trí ngoài tử cung (8)]. Tuy nhiên, nhân được cấy ghép từ các tế bào
những phôi đó sang phôi chủ bình thường làm tăng đáng kể tỷ lệ các hạt nội bì ở giai đoạn tiến triển hơn vào trứng chưa được thụ tinh sẽ tạo
nhân có thể được nhìn thấy là đã được lập trình lại. Chúng tôi thảo thành các tế bào cơ và thần kinh chức năng trong 20% tất cả các trường hợp (Bảng 1).
luận về những lý do có thể dẫn đến sự thất bại sớm của hầu hết quá Ngay cả ở giai đoạn nhịp tim, khi nội bì đã bắt đầu biệt hóa theo vùng (9,
trình chuyển nhân từ các tế bào đã biệt hóa và mô tả giá trị tiềm năng 10), 13% lượng hạt nhân được chuyển giao từ nội bì có thể hình thành các
của tế bào trứng đang phát triển, thay vì trứng chưa được thụ tinh, tế bào cơ và thần kinh chức năng (Bảng 1). Tương tự như vậy, vùng trung bì
như một nguồn cung cấp các phân tử tái lập trình hạt nhân và để nhận được thiết kế để hình thành cơ biểu hiện các gen myogen Myf5 và MyoD ở
dạng cuối cùng các phân tử này. . Chuyển giao hạt nhân cung cấp một lộ giai đoạn dạ dày muộn (11, 12), và các tế bào từ vùng này tiếp tục biểu
trình khả thi để tạo ra tế bào gốc từ tế bào soma trưởng thành. hiện các dấu hiệu cơ ngay cả khi các tế bào này được cấy đơn lẻ vào nội bì
(11, 12). 13). Tuy nhiên, nhân của các tế bào cơ tạo ra hệ thần kinh chức
năng ở 5% số ca cấy ghép hạt nhân. Những kết quả này không thể được cho là
Tái lập trình do tế bào mầm thoát ra hoặc các loại tế bào hiếm khác cư trú trong nội bì
hoạt độnghạt
gennhân
đượclàtạo
mộtrathuật
bằng ngữ
thựcdùng để mô
nghiệm tả cách
bằng nhữngđưa
thay
hạtđổi trong
nhân vào
hoặc cơ, vì tỷ lệ thành công quá cao.
môi trường tế bào chất mới. Khi nhân từ các tế bào đã biệt hóa một phần
hoặc hoàn toàn được cấy vào trứng đã được mã hóa nhân của Amphibia hoặc
động vật có vú trong siêu giai đoạn giảm phân thứ hai, có thể thu được
Sử dụng nhân từ tế bào biệt hóa hoặc tế bào trưởng thành, tỷ lệ chuyển
phôi phôi hoặc phôi nang và chúng có thể tạo thành nhiều loại mô và loại
nhân thành công thấp hơn nhiều so với tế bào ấu trùng hoặc phôi (Bảng 1).
tế bào. Tính đa năng của những phôi cấy ghép hạt nhân này có nghĩa là chúng
Trong trường hợp mô Xenopus trưởng thành , các tế bào phát triển từ mẫu
có chung một số đặc điểm của tế bào gốc giai đoạn đầu. Thật vậy, những
vật có hình thái nguyên bào sợi và thường không biểu hiện các dấu hiệu biệt
phôi cấy ghép hạt nhân trải qua quá trình tăng trưởng (sau khi ăn ở loài
hóa. Tuy nhiên, đối với mục đích cuối cùng là thay thế tế bào, khả năng
lưỡng cư và sau khi cấy vào động vật có vú) để trưởng thành phải chứa tế
tiếp cận mô trưởng thành, như trong trường hợp da hoặc máu, quan trọng hơn
bào gốc để làm mới các mô. Ở mức độ này, việc cấy ghép hạt nhân có thể đạt
nhiều so với việc xác định loại tế bào. Trong các thí nghiệm của Xenopus ,
được việc tạo ra các tế bào gốc hoặc các tế bào giống thân từ các tế bào
các tế bào từ da trưởng thành đã thu được bằng cách phát triển tự nhiên
soma có tiềm năng phát triển rất hạn chế.
trong môi trường nuôi cấy và duy trì biểu hiện của chất đánh dấu keratin
biểu bì. Nhân từ các tế bào này cho kết quả chuyển nhân với hiệu quả tương
đương với tế bào từ các cơ quan trưởng thành khác (14). Khoảng 1% trứng
Ngược lại, việc xác định và phân lập tế bào gốc tự nhiên từ các mô bình
nhận nhân cấy ghép từ tế bào da trưởng thành đạt đến giai đoạn phản ứng cơ
thường là một quá trình khó khăn và chưa thành công đối với hầu hết các mô
và do đó có các tế bào cơ và thần kinh chức năng (Bảng 1). Nghiên cứu với
của động vật có xương sống (1). Hơn nữa, trạng thái biệt hóa của các tế
động vật có vú đã cho kết quả tương đương (15), mặc dù tương đối ít thí
bào rất ổn định và khó có thể khiến các tế bào đã bắt đầu một con đường
nghiệm được thực hiện trong đó nhân của các loại tế bào xác định được cấy
biệt hóa chuyển sang một con đường khác. Do đó, cấy ghép hạt nhân hiện nay
vào trứng đã được mã hóa.
là phương pháp đáng tin cậy nhất để tạo ra các tế bào đa tiềm năng từ bất
kỳ loại mô nào. Vì lý do này, việc tái lập trình hạt nhân được quan tâm
như một phương tiện để tạo ra một loạt các tế bào thay thế cùng loại di
Kết luận chung từ các thí nghiệm chuyển nhân trực tiếp này là một tỷ lệ
truyền với nguồn hiến tặng, do đó tránh được nhu cầu ức chế miễn dịch như
cợưĐ

đáng kể nhân từ các tế bào phôi được xác định hoặc xác định biểu hiện các
yêu cầu với hầu hết các mảnh ghép hoặc cấy ghép không tương đồng về mặt di
dấu hiệu biệt hóa trải qua quá trình tái lập trình lớn khi được cấy vào
truyền. Mục đích của bài viết này là tóm tắt hiệu quả của việc tái lập
trứng đã được mã hóa.
trình hạt nhân bằng chuyển giao hạt nhân và từ đó nhận xét về tiềm năng
của nó như một nguồn tế bào gốc.

Chuyển giao và ghép hạt nhân nối tiếp

Câu hỏi đặt ra là liệu tỷ lệ chuyển giao hạt nhân thành công thấp trong
Bảng 1 đối với hạt nhân không nội bì có ý nghĩa gì không?
Phát triển phôi cấy ghép hạt nhân Làm thế nào
rằng chỉ một số ít tế bào trong mô có khả năng được lập trình lại hoặc khả
nhân tế bào soma có thể được lập trình lại thành trạng thái phôi thai một
năng này tồn tại nhưng chưa được chứng minh vì lý do kỹ thuật hoặc lý do
cách hiệu quả và hiệu quả? Trong trường hợp của Amphibia, những câu hỏi
khác. Ở Amphibia, một
này đã được giải quyết bằng các thí nghiệm chuyển giao hạt nhân đầu tiên
được thực hiện với Rana và Xenopus. Vì những lý do vẫn chưa rõ ràng, thành
công trong chuyển giao hạt nhân giảm nhanh chóng khi tuổi của người hiến
Bài viết này là kết quả của Hội thảo Arthur M. Sackler của Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia,
tặng ngày càng tăng ở Rana (2), và việc phát triển cấy ghép hạt nhân thành ''Y học tái tạo'' được tổ chức từ ngày 18 đến ngày 22 tháng 10 năm 2002, tại Trung tâm

công hơn nhiều ở Xenopus. Trong dòng nội bì, đã được phân tích chi tiết Arnold và Mabel Beckman của Viện Hàn lâm Khoa học và Kỹ thuật Quốc gia ở Irvine, CA.

nhất (3, 4), hiện nay người ta biết rằng các tế bào biểu hiện dòng nội bì. *Thư từ cần được gửi tới ai. Email: jbg1000@hermes.cam.ac.uk.

© 2003 bởi Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia Hoa Kỳ

www.pnas.orgcgidoi10.1073pnas.1834207100 PNAS ngày 30 tháng 9 năm 2003 tập. 100 bổ sung. 1 11819–11822
 Machine Translated by Google

Bảng 1. Sự chuyển giao hạt nhân đầu tiên sử dụng các tế bào đã được xác định và biệt hóa

% Tổng

chuyển giao hạt nhân

đạt cơ bắp
Giống loài Mô hiến tặng Giai đoạn tài trợ giai đoạn phản ứng Tham chiếu

Xenopus laevis Endoderm X. laevis Giai đoạn phản ứng của cơ 23–26 17–24 3
Endoderm X. laevis Cơ X. laevis Nhịp tim giai đoạn 36 9–13 3
Biểu mô ruột Ăn sớm giai đoạn Phản ứng cơ giai đoạn 26 42
nòng nọc 47 X. laevis Phát triển ngoài da Bò trưởng thành Tế bào khối tế bào bên 2 1– 4
trong Linh trưởng phôi Linh trưởng 4–32 phôi tế bào Cừu 3 14
Phôi Động vật có vú Chuột trưởng thành Cumulus Trưởng thành 1,3 43
0,6 44
1,4 45
0,4 2,8 46

tỷ lệ đáng kể của phôi cấy ghép hạt nhân tách ra Kết quả thực hiện ghép hạt nhân nối tiếp cho thấy
bất thường và chết dưới dạng blastulae một phần trong vòng 24 giờ sau khi hạt nhân rằng một tỷ lệ đáng kể của phôi nang bị cắt một phần
chuyển khoản. Trong trường hợp nhân từ tế bào biệt hóa hoặc tế bào trưởng thành, chứa các hạt nhân có tiềm năng phát triển rộng. Khi đây là
sự phân tách một phần là kết quả của một phần tư đến một phần ba tổng số được tính đến, tỷ lệ tế bào biểu mô ruột ban đầu có nhân có thể thúc đẩy sự
chuyển giao hạt nhân và xảy ra thường xuyên hơn nhiều so với thời kỳ phân cắt biệt hóa cơ và thần kinh tăng lên 20% (Bảng 2 và phần 4).
hoàn toàn (4). Tuy nhiên, người ta nhận thấy rằng biểu hiện bình thường
các tế bào của blastulae một phần có thể được sử dụng làm người hiến tặng lần thứ hai, nối tiếp Sử dụng lối suy nghĩ tương tự, người ta phát hiện ra rằng các tế bào xuất
tập hợp các quá trình chuyển giao hạt nhân tới những quả trứng có nhiều nhân hơn, một thử nghiệm hiện bình thường của phôi nang một phần có thể được ghép vào vật chủ.
thiết kế được King và Briggs sử dụng lần đầu tiên vào năm 1956 (16). Khi đây là phôi thai và sau đó bộc lộ nhiều tiềm năng phát triển. Sử dụng hạt nhân cho
được thực hiện với một phần blastulae có nguồn gốc từ biểu mô ruột được đánh dấu GFP, người ta đã tính được rằng
tế bào của Xenopus, người ta thấy rằng nhiều hạt nhân nối tiếp
ít nhất 16% tế bào biểu mô ruột ấu trùng đã biệt hóa
phôi cấy phát triển khá tốt, có khi đạt đến giai đoạn nòng nọc bình thường
chứa các hạt nhân có khả năng thực hiện các con đường chuyển hóa hoàn toàn khác nhau
(4). Những con nòng nọc có nguồn gốc nối tiếp này
sự khác biệt (19). Tóm lại, việc sử dụng hạt nhân nối tiếp
phản ánh tiềm năng phát triển của nhân tế bào biểu mô ruột được cấy ghép ban
chuyển giao và ghép cho thấy tỷ lệ cao hơn nhiều của
đầu, mặc dù điều này
các tế bào đã biệt hóa chứa các nhân trải qua quá trình tái lập trình chủ yếu
tiềm năng không được tiết lộ bởi những lần chuyển giao hạt nhân đầu tiên.
bởi tế bào chất của trứng so với tỷ lệ rõ ràng là 1–3% khi
Lời giải thích tốt nhất cho sự cải thiện rõ ràng này trong năng lực hạt nhân
chỉ xem xét chuyển giao hạt nhân đầu tiên.
chuyển giao thành công như sau. Người ta tin rằng hạt nhân từ
tế bào soma phân chia chậm không thể hoàn thành nhiễm sắc thể của chúng Lý do có thể dẫn đến thất bại
sao chép kịp thời cho lần phân chia đầu tiên của trứng nhận,
Sau khi chuyển nhân từ các tế bào đã biệt hóa sang trứng đã được mã hóa nhân,
luôn diễn ra theo lịch trình thời gian của quả trứng, vì
dù ở lưỡng cư hay động vật có vú, chỉ một số ít trong số đó
ví dụ lúc 1,5 giờ cho lần phân tách đầu tiên ở Xenopus. Tế bào soma
cấy ghép hạt nhân phát triển thành động vật trưởng thành. Có một số
mất khoảng 6 giờ để hoàn thành quá trình sao chép nhiễm sắc thể. Khi của họ
những khả năng có thể giải thích cho tỷ lệ thành công thấp này, và
các hạt nhân được cấy ghép buộc phải tiến hành nguyên phân sớm với các nhiễm
lý do chính cho sự thất bại trong phát triển có thể khác nhau giữa
sắc thể được sao chép không hoàn chỉnh, chúng có khả năng bị tổn thương nhiễm
Lưỡng cư và động vật có vú. Ở Amphibia, phần lớn trứng
sắc thể (17, 18) và tạo ra các khiếm khuyết về nhiễm sắc thể
nhận nhân được cấy ghép từ các tế bào trưởng thành hoặc biệt hóa
phôi không thể sống sót. Tuy nhiên, đôi khi nó xảy ra
chỉ trải qua một vài lần phân chia không đều hoặc không phân chia chút nào.
rằng nhân được cấy ghép không trải qua quá trình phân chia nhiễm sắc thể khi
Vì vậy, sự mất mát cơ bản trong quá trình chuyển nhân tế bào soma ở lưỡng cư
trứng nhận phân chia thành hai tế bào và
toàn bộ hạt nhân được cấy ghép đang sao chép sẽ chuyển sang một trong những hạt nhân đầu tiên
là trong thời gian phân tách sớm nhất. Ở động vật có vú, sự suy giảm trí tuệ

hai phôi bào. Sau đó nó có cơ hội thứ hai để hoàn thành trong quá trình phát triển có xu hướng lớn hơn sau lần phân chia đầu tiên. TRONG

sao chép các nhiễm sắc thể của nó trước khi tiến hành nguyên phân khi loài linh trưởng, sự phát triển đến giai đoạn đầu 8 tế bào đã được

trứng chuyển từ giai đoạn hai đến bốn tế bào. Kết quả là, một phần được chứng minh là giống nhau về nhân tế bào soma và phôi
cợưĐ

blastulae thu được nhờ một trong hai phôi bào đầu tiên chuyển và sau khi tiêm tinh trùng vào bào tương trứng (ICSI)

trải qua quá trình phân cắt với hạt nhân được cấy ghép, trong khi (từ 80% đến 90% trong mọi trường hợp). Tuy nhiên, sự phát triển của phôi nhân

phôi bào khác không có nhân sẽ chết. Những blastu-lae một phần này có nhiều bản đến giai đoạn phôi nang muộn hơn là

khả năng chứa các hạt nhân được sao chép hoàn toàn khác biệt rõ rệt; chỉ 1% số lần chuyển nhân tế bào soma

bộ nhiễm sắc thể hơn là những phôi cấy ghép hạt nhân đạt đến giai đoạn phôi nang, trong khi 34% hạt nhân phôi

trải qua quá trình phân ly nhiễm sắc thể ở lần nguyên phân đầu tiên. chuyển giao và 46% điều khiển ICSI đạt đến giai đoạn này (20).

Bảng 2. Tổng hợp kết quả chuyển giao hạt nhân lần thứ nhất và nối tiếp

% Tổng

chuyển giao hạt nhân

đạt cơ bắp
Giống loài Mô hiến tặng Giai đoạn tài trợ giai đoạn phản ứng Tham chiếu

X. laevis Biểu mô ruột Nòng nọc ăn sớm giai đoạn 47 20 4

X. laevis Sự phát triển của da Người lớn 11–12 14
X. laevis Thận, phổi, tim Người lớn 13 47

11820 www.pnas.orgcgidoi10.1073pnas.1834207100 Gurdon và cộng sự.

 Machine Translated by Google

Những biến thể trong giai đoạn mất phát triển này có thể phản ánh
các vấn đề khác nhau gặp phải sau khi chuyển nhân tế bào soma ở động
vật lưỡng cư và động vật có vú. Ở Amphibia, vấn đề chính có thể là khó
khăn đã đề cập trước đó mà nhân tế bào soma gặp phải trong việc hoàn
thành quá trình sao chép nhiễm sắc thể trong khoảng thời gian rất hạn
chế (chỉ 90 phút ở Xenopus) trước khi trứng trải qua quá trình phân cắt
(21). Ở động vật có vú, có 20 giờ đối với chuột hoặc lâu hơn đối với
con người, từ thời điểm thụ tinh đến lần phân chia đầu tiên. Điều này
khiến cho việc sao chép nhiễm sắc thể không hoàn chỉnh không phải là
vấn đề ở động vật có vú. Tuy nhiên, động vật có vú có các gen in dấu
(22) mà Amphibia không có (23), và có ý kiến cho rằng sự mất phát triển
quan sát được sau khi chuyển nhân tế bào soma ở động vật có vú có thể
là do việc lập trình lại không hoàn chỉnh các gen in dấu khác nhau

(cũng như ngày 4 tháng 10 ) (24). Một đề xuất gần đây khác về sự thất
bại trong phát triển của động vật có vú là quá trình tạo mầm sẽ loại bỏ
các protein trục chính của mẹ cần thiết để duy trì thể bội qua các lần
phân cắt ban đầu (25).

Mặc dù phôi nhân bản của động vật lưỡng cư có xu hướng bị tổn thương
nhiễm sắc thể do sự sao chép nhiễm sắc thể không hoàn chỉnh và phôi
nhân bản của động vật có vú có xu hướng không biểu hiện chính xác các
gen được in dấu, nhưng cũng có một loạt các yếu tố khác có thể ảnh
hưởng đến cả quá trình cấy ghép hạt nhân của động vật lưỡng cư và động
vật có vú. Việc lập trình lại biểu hiện gen không chính xác về mặt định
lượng không đầy đủ đã được tìm thấy ở cả phôi nhân bản của động vật
lưỡng cư (19) và động vật có vú (26), và người ta cho rằng điều này có
thể ảnh hưởng đến sự phát triển (27). Ngoài ra, có ý kiến cho rằng giai
đoạn của chu kỳ tế bào của người hiến tặng có thể rất quan trọng để
tránh tình trạng lệch bội thông qua việc tái sao chép bộ gen của người hiến tặng (28).
Một ý tưởng khác liên quan đến ly tâm; điều này thường được đưa vào
cùng với tinh trùng khi thụ tinh và trứng của hầu hết các loài động vật
không chứa trung thể của chính chúng. Có lẽ hầu hết các tế bào biệt hóa
không còn cần thiết để phân chia đều không chứa trung thể đầy đủ chức
năng. Có thể các yếu tố kỹ thuật cũng có thể quan trọng. Việc không làm
Hình 1. Sơ đồ thể hiện thang thời gian tái lập trình hạt nhân ở Xenopus và chuột. (A) Sự
vỡ được tế bào của người hiến tặng chắc chắn sẽ dẫn đến việc thiếu sự
hình thành và phát triển ban đầu của Xenopus.
phân chia hoàn toàn. Mặt khác, vị trí trong trứng mà nhân được cấy ghép (B) Trong quá trình chuyển nhân trứng Xenopus , biểu hiện gen được lập trình lại được
được cho là không quan trọng vì tinh trùng khi xâm nhập từ bề mặt trứng nhìn thấy ở giai đoạn phôi nang muộn sau ít nhất 12 chu kỳ phân chia tế bào. (C) Trong
luôn tìm đường đến đúng vị trí trung tâm của trứng. quá trình chuyển nhân tế bào trứng Xenopus , biểu hiện gen được lập trình lại được thấy
trong trường hợp hoàn toàn không có sự sao chép DNA và phân chia tế bào. (D) Trong quá
trình chuyển nhân chuột sang trứng, người ta đã thấy biểu hiện gen được lập trình lại ở

Tóm lại, không có lời giải thích rõ ràng nào về tần suất cao mà các giai đoạn blas-tocyst.

hạt nhân được cấy ghép từ các tế bào biệt hóa hoặc tế bào trưởng thành
không tạo ra bất kỳ sự phân cắt hoặc phát triển nào của trứng nhận. Nó
có lẽ là sự kết hợp của lệch bội, tổn thương di truyền và tái lập trình
biểu sinh không hoàn chỉnh. Với mục đích thay thế tế bào, đây chỉ là
vấn đề nghiêm trọng nếu nguồn cung cấp trứng của người nhận bị hạn chế
nghiêm ngặt, như trường hợp của con người.
Tiềm năng biệt hóa tế bào của một bộ gen không hoàn hảo Ý tưởng
cơ bản đằng sau các thí nghiệm chuyển nhân nguyên thủy ở động vật có
cợưĐ
sản xuất dòng tế bào gốc phôi (29). Phát hiện này cho thấy phôi động
vật có vú được nhân bản bị khiếm khuyết, không có khả năng phát triển
thành một con chuột hoàn chỉnh, vẫn có thể tạo ra các dòng tế bào gốc
hữu ích. Một hướng nghiên cứu thú vị trong tương lai sẽ là nghiên cứu
khả năng biệt hóa của các hạt nhân được cấy ghép mang những thiếu sót
về nhiễm sắc thể hoặc gen đã biết. Có lẽ các tế bào bị thiếu hụt về mặt
di truyền có thể hoàn toàn phù hợp để thay thế tế bào soma.

xương sống là cần có một bộ gen hoàn chỉnh để trứng phát triển thành
một con trưởng thành bình thường. Điều này rất có thể đúng; trên thực
tế, tính đầy đủ của bộ gen có thể được xác định theo cách này. Nhưng Tái lập trình mà không sao chép Phần lớn
điều này hoàn toàn không có nghĩa là mỗi con đường biệt hóa tế bào
các thí nghiệm chuyển nhân ở cả động vật có vú và lưỡng cư đã được thực
riêng lẻ cũng phụ thuộc vào một bộ gen hoàn chỉnh.
hiện với trứng trong kỳ giữa giảm phân thứ hai làm tế bào nhận. Trong
Tuy nhiên, các hạt nhân thiếu các gen thiết yếu cho một con đường phát
tất cả các trường hợp này, phản ứng đầu tiên của trứng được mã hóa với
triển vẫn có thể tiến hành theo các con đường biệt hóa khác. Các thí
nhân được cấy ghép là kích hoạt quá trình tổng hợp DNA và phân chia tế
nghiệm chuyển hạt nhân ở cả động vật lưỡng cư và động vật có vú đã ủng
bào (Hình 1). Ở Amphibia, quá trình phiên mã mới và do đó là bằng chứng
hộ ý tưởng này. Ở Xenopus, người ta đã phát hiện ra rằng nhiều phôi cấy
về việc tái lập trình hạt nhân, bắt đầu sau 12 chu kỳ tế bào ở giai
ghép hạt nhân bị cắt một phần (có khiếm khuyết về mặt phát triển) có
đoạn chuyển tiếp tế bào trung gian-tula, 5 giờ sau khi tiêm hạt nhân.
biểu hiện sai lệch về số lượng của các gen hợp tử sớm (19). Mặc dù
Ở chuột, quá trình phiên mã mới bắt đầu ở giai đoạn đầu của hai tế
vậy, các tế bào khỏe mạnh từ những phôi như vậy, được đánh dấu di
truyền bởi GFP, sau khi ghép vào phôi chủ, có thể tham gia vào quá bào, 24 giờ sau khi tiêm nhân và quá trình phiên mã mới bắt đầu muộn

trình biệt hóa và phát triển của cơ, dây sống, biểu bì và các tế bào hơn ở các loài động vật có vú khác. Tình huống này làm tăng khả năng

khác bình thường (19). Ở chuột, người ta phát hiện ra rằng trong khi việc tái lập trình hạt nhân đòi hỏi phải sao chép DNA và hoặc phân

chỉ có 2% phôi cấy ghép hạt nhân có thể phát triển thành động vật chia tế bào để thiết lập lại chương trình biểu sinh, một gợi ý được đưa
trưởng thành thì 9% phôi cấy ghép hạt nhân có thể phát triển thành động ra bởi Tada và Tada (30).
vật trưởng thành.

Gurdon và cộng sự. PNAS Ngày 30 tháng 9 năm 2003 tập. 100 bổ sung. 1 11821
 Machine Translated by Google
Để kiểm tra khả năng này, chúng tôi đã cấy nhân tế bào soma vào
tế bào trứng lưỡng cư không phân chia trong kỳ đầu của bệnh teo cơ
đầu tiên. Những tế bào này không thể được thụ tinh, không hoạt động
trong quá trình tổng hợp DNA nhưng hoạt động mạnh mẽ trong quá trình
phiên mã (Hình 1). Các gen hoạt động của chúng chứa tối đa RNA
polymerase, như đã thấy trong các phức hợp phiên mã ngoạn mục của Miller Bởi vì một tế bào trứng Xenopus có hàm lượng protein gấp 4.000 lần
(31).
Chúng tôi đã cấy từ 10 đến 100 nhân tế bào soma vào một tế bào trứng trứng của động vật có vú và vì một con Xenopus cái chứa khoảng
để thu được phản ứng có thể phát hiện được và kết quả được đánh giá
bằng phân tích protein 2D. Các hạt nhân được tiêm không có sự gia
tăng lớn về thể tích và sự phân tán chất nhiễm sắc của chúng trong
vài ngày mà tế bào trứng được tiêm có thể được nuôi cấy. Phân tích
protein cho thấy các protein mới được tổng hợp bởi tế bào trứng được
tiêm nhân động vật có vú từ tế bào HeLa nuôi cấy, mặc dù chưa xác
định được danh tính của các protein (32, 33). Trong trường hợp nhân
của một loài lưỡng cư (Pleurodele) được cấy vào tế bào trứng của
Xenopus, một số protein mới đã được tổng hợp với kích thước và đặc
tính điện tích của các gen biểu hiện tế bào trứng (34). Trong các
thí nghiệm khác, các gen 5S đặc hiệu cho tế bào trứng đã được kích
hoạt khi nhân tế bào soma Xenopus với các gen 5S loại tế bào trứng
không hoạt động được tiêm vào tế bào trứng (35) và các enzyme đặc
hiệu của gan bị ức chế trong các thí nghiệm với hai loài Ambystoma
(36) .
Gần đây, chúng tôi đã mở rộng phân tích về quá trình chuyển nhân
trong tế bào trứng Xenopus . Khá ngạc nhiên, chúng tôi phát hiện ra
rằng nhân của các tế bào trưởng thành đã biệt hóa của chuột (tế bào
tuyến ức) và của con người (tế bào bạch cầu) ở một mức độ nào đó có
thể được lập trình lại bởi tế bào trứng Xenopus (37). Đặc biệt, gen
đánh dấu tế bào gốc đa năng chẩn đoán oct4 được tạo ra trong nhân
của động vật có vú này sau khi tiêm vào túi mầm (nhân tế bào trứng
đã mở rộng). Bản phiên mã oct4 có trình tự của người hoặc chuột khi
tế bào trứng được tiêm soma của người hoặc chuột
1. McKay, R. (2000) Thiên nhiên 406, 361–364.
2. Briggs, R. & King, TJ (1957) J. Morphol. 100, 269–312.
3. Gurdon, JB (1960) J. Embryol. Exp. Morphol. 8, 505–526.
4. Gurdon, JB (1962) J. Embryol. Exp. Morphol. 10, 622–640.
5. Sasai, Y., Lu, B., Piccolo, S. & De Robertis, EM (1996) EMBO J. 15,
4547–4555.
6. Hudson, C., Clements, D., Friday, RV, Stott, D. & Woodland, HR (1997)
Phòng 91, 397–405.
7. Newman, CS, Chia, F. & Krieg, PA (1997) Mech. Dev. 66, 83–93.
8. Wylie, CC, Snape, A., Heasman, J. & Smith, JC (1987) Dev. Biol. 119,
496–502.
9. Chalmers, AD & Slack, JM (1998) Dev. Dyn. 212, 509–521.
10. Zorn, AM & Mason, J. (2001) Cơ khí. Dev. 103, 153–157.
11. Harvey, RP (1990) Development (Cambridge, UK) 108, 669–680.
12. Hopwood, ND, Pluck, A. & Gurdon, JB (1989) EMBO J. 8, 3409–3417.
13. Kato, K. & Gurdon, JB (1993) Proc. Natl. Học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 90, 1310–1314.
14. Gurdon, JB, Laskey, RA & Reeves, OR (1975) J. Embryol. Exp. Morphol.
34, 93–112.
15. Campbell, KH, McWhir, J., Ritchie, WA & Wilmut, I. (1996) Nature 380,
64–66.
cợưĐ
16. King, TJ & Briggs, R. (1956) Cold Spring Harbor Symp. Số lượng. Biol. 21,
271–290.
17. Briggs, R., King, TJ & Di Berardino, MA (1960) Symp. Tế bào mầm Dev.
441–477.
18. DiBerardino, MA & King, TJ (1967) Dev. Biol. 15, 102–128.
19. Byrne, JA, Simonsson, S. & Gurdon, JB (2002) Proc. Natl. Học viện. Khoa học. Hoa Kỳ
99, 6059–6063.
20. Mitalipov, SM, Yeoman, RR, Nusser, KD & Wolf, DP (2002) Biol.
Trả lời. 66, 1367–1373.
21. Graham, CF, Arms, K. & Gurdon, JB (1966) Dev. Biol. 14, 349–381.
22. Surani, MA, Barton, SC & Norris, ML (1984) Nature 308, 548–550.
23. Meehan, RR & Stancheva, I. (2001) Tiểu luận Hóa sinh. 37, 59–70.
24. Bortvin, A., Eggan, K., Skaletsky, H., Akutsu, H., Berry, DL, Yanagimachi, R., Page,
DC & Jaenisch, R. (2003) Development (Cambridge, UK) 130 , 1673–1680.
25. Simerly, C., Dominko, T., Navara, C., Payne, C., Capuano, S., Gosman, G., Chong, KY,
Takahashi, D., Chace, C., Compton, D. , và cộng sự. (2003) Khoa học 300, 297.
11822 www.pnas.orgcgidoi10.1073pnas.1834207100
nhân tế bào tương ứng. Khả năng kích hoạt biểu hiện oct4 trong nhân
tế bào soma trưởng thành có thể làm tăng khả năng tạo ra tế bào gốc
phôi từ phôi cấy ghép hạt nhân (38). Rõ ràng là tế bào trứng của
động vật lưỡng cư có chứa các phân tử và điều kiện có thể ít nhất
lập trình lại một phần nhân của tế bào động vật có vú trưởng thành.
25.000 tế bào trứng, nên buồng trứng Xenopus tạo thành vật liệu thuận
lợi cho việc xác định các phân tử và cơ chế lập trình lại.
Sự tăng sinh của các tế bào được tái
lập trình Để có ích về mặt lâm sàng, cần phải có khả năng tăng sinh
rộng rãi các tế bào được tái lập trình. Phát hiện đáng chú ý, chủ
yếu của Evans (39), là các tế bào phôi nang của chuột có thể được
tạo ra để sinh sôi nảy nở gần như vô thời hạn trong môi trường nuôi
cấy, dưới dạng tế bào gốc phôi, mà không mất đi khả năng biệt hóa
thành hầu hết và đôi khi là tất cả các loại tế bào của chuột trưởng
thành. mang lại sự khuyến khích lớn trong yêu cầu này. Tại cuộc họp
này, chúng tôi đã nghe nói về nhiều nghiên cứu hiện tại hướng tới
việc tìm hiểu cơ chế và kiểm soát sự tăng sinh và biệt hóa tế bào
gốc phôi. Cuối cùng có thể cần thiết phải xây dựng vào các tế bào
dành cho mục đích thay thế khả năng tăng sinh hữu hạn để giảm khả
năng các tế bào được hiến tặng trở thành
ung thư.
Để kết luận, chúng tôi đề xuất rằng khả năng lập trình lại đặc
biệt của trứng và tế bào trứng có thể dẫn đến việc xác định các phân
tử và cơ chế tái lập trình. Những điều này có thể tạo điều kiện
thuận lợi cho lộ trình thay thế tế bào ở người, bằng sự kết hợp
giữa chuyển nhân, tạo tế bào gốc và tăng sinh tế bào gốc phôi, như
đề xuất của nghiên cứu của Munsie et al . (40) và Rideout et al.
(41).
26. Humpherys, D., Eggan, K., Akutsu, H., Friedman, A., Hochedlinger, K., Yanagimachi, R.,
Lander, ES, Golub, TR & Jaenisch, R. (2002) Proc . Natl.
Học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 99, 12889–12894.
27. Rideout, WM, III, Eggan, K. & Jaenisch, R. (2001) Science 293, 1093–1098.
28. Campbell, KH, Loi, P., Otaegui, PJ & Wilmut, I. (1996) Rev. Reprod. 1,
40–46.
29. Wakayama, T., Tabar, V., Rodriguez, I., Perry, AC, Studer, L. & Mombaerts, P. (2001)
Khoa học 292, 740–743.
30. Tada, T. & Tada, M. (2001) Cấu trúc tế bào. Chức năng. 26, 149–160.
31. Miller, CV, Jr., (1965) Natl. Viện Ung thư. Monogr. 18, 79–99.
32. Gurdon, JB (1976) J. Embryol. Exp. Morphol. 36, 523–540.
33. De Robertis, EM, Partington, GA, Longthorne, RF & Gurdon, JB
(1977) J. Embryol. Exp. Morphol. 40, 199–214.
34. De Robertis, EM & Gurdon, JB (1977) Proc. Natl. Học viện. Khoa học. Mỹ 74,
2470–2474.
35. Korn, LJ & Gurdon, JB (1981) Nature 289, 461–465.
36. Etkin, LD (1976) Dev. Biol. 52, 201–209.
37. Byrne, JA, Simonsson, S., Western, PS & Gurdon, JB (2003) Curr. Biol. 13, 1206–1213.
38. Boiani, M., Eckardt, S., Scholer, HR & McLaughlin, KJ (2002) Genes Dev. 16, 1209–1219.
39. Evans, M. (1981) J. Reprod. Phân bón. 62, 625–631.
40. Munsie, MJ, Michalska, AE, O'Brien, CM, Trounson, AO, Pera, MF
& Mountford, PS (2000) Curr. Biol. 10, 989–992.
41. Rideout, WM, III, Hochedlinger, K., Kyba, M., Daley, GQ & Jaenisch, R.
(2002) Ô 109, 17–27.
42. Gurdon, JB, Brennan, S., Fairman, S. & Mohun, TJ (1984) Ô 38,
691–700.
43. Sims, M. & First, NL (1994) Proc. Natl. Học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 91, 6143–6147.
44. Meng, L., Ely, JJ, Stouffer, RL & Wolf, DP (1997) Biol. Trả lời. 57,
454–459.
45. Wilmut, I., Schnieke, AE, McWhir, J., Kind, AJ & Campbell, KH (1997)
Thiên nhiên 385, 810–813.
46. Wakayama, T., Perry, AC, Zuccotti, M., Johnson, KR & Yanagimachi, R.
(1998) Thiên nhiên 394, 369–374.
47. Laskey, RA & Gurdon, JB (1970) Nature 228, 1332–1334.
Gurdon và cộng sự.