Tầm quan trọng của phân tích kích thước hạt

Giảm kích thước hạt là một phương pháp nhanh chóng và tiết kiệm chi phí để tăng sự tiếp
xúc của thuốc uống kém hòa tan bằng cách tăng diện tích bề mặt và do đó cải thiện tốc độ
hòa tan. Cách tiếp cận này sẽ chỉ hoạt động đối với các thuốc DCS IIa trong đó tốc độ hòa tan
là yếu tố giới hạn tốc độ hấp thu. Điều này có thể ứng dụng cho khoảng một phần sáu các loại
thuốc hiện đang được phát triển.

Kích thước hạt là một thuộc tính quan trọng trong API, các sản phẩm thuốc uống dạng rắn
(viên nén và viên nang - ảnh hưởng đến tính đồng nhất, dòng chảy và quá trình chế biến) và
là thuộc tính chất lượng quan trọng trong các sản phẩm bán rắn (hỗn dịch) và các sản phẩm
lỏng vô trùng (thuốc tiêm). Phân tích kích thước hạt đã trở thành một đại diện cho phép đo
diện tích bề mặt thông thường. Tuy nhiên, bối cảnh là quan trọng. Do đó, lấy mẫu đại diện,
tính đồng nhất của mẫu và hình thái hạt là rất quan trọng vì kích thước mẫu nhỏ, khả năng
lắng của mẫu, v.v.

Một loạt các kỹ thuật có sẵn để xác định kích thước hạt; tuy nhiên, kỹ thuật được sử dụng
rộng rãi nhất là nhiễu xạ laser. Có thể đạt được các phép đo cực kỳ chính xác và lặp lại,
nhưng hiểu được những hạn chế của kỹ thuật này là rất quan trọng để thu được thông tin có ý
nghĩa.

Việc tạo ra dữ liệu kích thước hạt có ý nghĩa bắt đầu bằng việc lấy mẫu đại diện. Tất cả các
loại bột sẽ tách biệt trong quá trình vận chuyển, xếp dỡ và thậm chí là lưu kho. Theo thời
gian, các hạt nhỏ hơn trong mẫu sẽ di chuyển xuống đáy trong khi các hạt lớn hơn sẽ tập
trung nhiều hơn ở phía trên của vật chứa. Điều này áp dụng cho các mẫu phụ phân tích cũng
như các mẫu chung. Mặc dù khái niệm này được hiểu rộng rãi, nhưng nó thường bị bỏ qua.
Độ chệch lấy mẫu có thể tăng thêm khi lấy mẫu phụ tiếp theo trong phòng thí nghiệm hoặc
nơi khác.

Khi lấy mẫu bột từ các vật chứa khối lượng lớn, thực hành tốt là lấy mẫu đại diện cho toàn bộ
chiều cao của lớp bột từ trên xuống dưới, ví dụ như sử dụng dụng cụ lấy mẫu lõi. Sau đó, các
mẫu phụ để kiểm tra phân tích có thể được tạo ra bằng cách sử dụng các kỹ thuật trộn và
phân chia chẳng hạn như cuộn gợn sóng, hình nón và chia nhỏ, hoặc quay / đảo ngược đơn
giản của mẫu phòng thí nghiệm trước khi lấy một phần mẫu để phân tích.

Các cân nhắc về kỹ thuật đo laser và phương pháp luận

Khi phát triển một phương pháp dựa trên kích thước cho API được nghiền nhỏ hoặc đã được
nghiền nhỏ, nhà phân tích phải xác định những gì họ muốn đo, ví dụ: kích thước của các hạt
rời rạc hoặc kết tụ, hoặc cả hai. Phương pháp phân tán ướt để đo kích thước hạt rời rạc
thường sử dụng siêu âm để phá vỡ vật lý các hạt kết dính và việc sử dụng chất hoạt động bề
mặt trong môi trường phân tán để đảm bảo không xảy ra hiện tượng kết tụ lại trước khi đo.
Phương pháp phân tán khô có thể sử dụng áp suất bộ phân tán cao để đảm bảo tách các hạt
rời rạc. Trong khi đó, một phương pháp nhằm đánh giá sự kết tụ của các hạt có thể sử dụng
siêu âm giảm hoặc không để bảo quản các kết tụ mẫu.

Dụng cụ nhiễu xạ laze không thể phân biệt giữa các hạt rời rạc và các tập hợp hạt. Do đó, tầm
quan trọng của kỹ thuật xác nhận trực giao thứ cấp, đặc biệt là kính hiển vi điện tử quét hoặc
quang học, để đánh giá định tính sự phân bố kích thước hạt cung cấp bối cảnh quan trọng.
Ảnh hiển vi điện tử quét (Hình 1) cho thấy rõ ràng các hạt rời rạc có kích thước nhỏ hơn
khoảng 2-3μm, chúng tạo thành các kết tụ không đều có đường kính trên 100μm. Nếu không
bị phân tán, những khối kết tụ này sẽ được đo bằng nhiễu xạ laze > 100μm.

Máy phân tích kích thước hạt nhiễu xạ laser thường hiển thị dữ liệu dưới dạng phân bố dựa
trên thể tích, trong khi các kỹ thuật hình ảnh thường trình bày dữ liệu dưới dạng số. Trong
phương pháp dựa trên thể tích, sự phân bố kích thước tổng thể bị ảnh hưởng chủ yếu bởi các
hạt lớn nhất có mặt. Đây là lý do tại sao các giá trị D (v, 0,9) - mức dựa trên thể tích mà dưới
90% hạt được đo và có ảnh hưởng lớn nhất đến tốc độ hòa tan - rất nhạy cảm với những thay
đổi nhỏ trong các thông số xay xát. Ngược lại, phân bố dựa trên số bị ảnh hưởng chủ yếu bởi
các hạt nhỏ nhất và nhiều nhất trong mẫu. Trong biểu đồ nhiễu xạ laser, dữ liệu thô giống hệt
nhau có thể được hiển thị dưới dạng cả phân phối dựa trên số hoặc phân phối dựa trên thể
tích. Ví dụ, một tập dữ liệu giả định có thể hiển thị 90% các hạt được đo là ≤1. Kích thước
0μm sử dụng phân phối dựa trên số; trong khi đó, dữ liệu tương tự sẽ được báo cáo vì 90%
các hạt được đo có kích thước ≤ 5,2μm bằng cách sử dụng phân bố dựa trên thể tích.

Hơn nữa, các kết quả nhiễu xạ laze gần như luôn luôn được biểu thị dưới dạng đường kính
'hình cầu tương đương', do đó cho phép một giá trị số duy nhất để biểu thị kích thước của một
hạt. Tuy nhiên, khi các hạt đi lệch khỏi thói quen hình cầu lý tưởng, dữ liệu nhiễu xạ laser
không cung cấp cái nhìn sâu sắc về hình dạng hạt. Ví dụ, một hạt giống như kim có chiều dài
100μm, có thể có đường kính hình cầu tương đương chỉ 5μm. Nếu hình dạng hạt quan trọng
đối với API hoặc hiệu suất của công thức, thông tin quan trọng này sẽ bị mất nếu không có
phương pháp phân tích trực giao thứ cấp. Ngoài ra, việc đo kích thước hạt của API trong một
sản phẩm có công thức trở nên rất khó khăn.
Cách tiếp cận khác

Việc sử dụng phép đo kích thước hạt nội tuyến như một phần của chiến lược công nghệ phân
tích quá trình (PAT) hướng tới kiểm soát thời gian thực các quá trình liên tục đã được sử
dụng trong hơn hai thập kỷ. List và Steffens đã mô tả một phương pháp quang phổ gần tia
hồng ngoại (NIR) để theo dõi nội tuyến của quá trình tạo hạt. Tuy nhiên, có hai nhược điểm
lớn với cách tiếp cận này. Thứ nhất, một lượng dữ liệu đáng kể cần được tạo ra để hiệu chuẩn
và sử dụng thường xuyên. Thứ hai, 'tắc nghẽn' cảm biến có thể dẫn đến kết quả giả và gây
hiểu lầm.

Gần đây, tính khả thi của việc giám sát trực tiếp sự thay đổi đường cơ sở trong NIR đã được
đánh giá. Những dịch chuyển đường cơ sở này có thể được sử dụng để theo dõi kích thước
hạt, hình dạng hạt, mật độ và chỉ số khúc xạ của hạt. Dạng dịch chuyển đường cơ sở là do sự
thay đổi của hiệu ứng truyền qua, hệ số phản xạ và tán xạ xảy ra trong quá trình tạo hạt và sự
hiện diện của điểm uốn có thể được sử dụng để xác định điểm kết thúc tạo hạt.

Công nghệ lọc không gian (SFT) được sử dụng như một phương pháp kích thước hạt nội
dòng mới để theo dõi các quá trình tạo hạt ở tầng chất lỏng. Nó có lợi thế hơn so với các
phương pháp tiếp cận NIR ở chỗ không cần phải hiệu chuẩn sản phẩm sử dụng cảm biến. Vận
tốc của hạt được đo trong một mảng sợi quang, do đó cho phép xác định phân bố kích thước
hạt theo thời gian thực và trực tiếp. Petrak đã so sánh dữ liệu SFT với các phát hiện nhiễu xạ
laser ngoài dòng và cho thấy mối tương quan tốt đối với các hạt hình cầu có kích thước
khoảng 100μm, nhưng nếu không thì dữ liệu SFT thường thấp hơn dữ liệu nhiễu xạ laser
tương ứng. Tuy nhiên, kỹ thuật này vẫn có thể được sử dụng để theo dõi những thay đổi
tương đối về kích thước hạt, ví dụ, trong quá trình tạo hạt. Tuy nhiên, vị trí của cảm biến là
quan trọng và kết quả phải tương quan với các phép đo nhiễu xạ laser ngoại tuyến nếu có thể.
Đánh giá sự phân bố kích thước hạt của huyền phù theo thời gian đã được báo cáo gần đây.
Các ảnh hưởng của góc đầu dò và các thông số trộn vị trí đầu dò được đánh giá và đánh giá
tính đồng nhất và các hiệu ứng lắng và tái phân tán liên quan. Có một mối tương quan chặt
chẽ giữa số lượng hạt và nồng độ của một hệ thống mô hình. Phép đo phản xạ chùm tia tập
trung (FBRM) đã được sử dụng để đánh giá sự phân bố kích thước hạt trong quá trình kết
tinh API. Kỹ thuật này thường được sử dụng song song với quá trình hình ảnh video (PVI).
So sánh các phân bố kích thước hạt được đo bằng nhiễu xạ laser và FBRM được thực hiện
cho quy trình kết tinh API cho thấy độ nhạy kém của FBRM đối với các tinh thể kích thước
hạt nhỏ, tức là < 1μm.

Ngoài ra, việc phát hiện và phân tích nhanh các hạt có thể nhìn thấy và nhìn thấy được trong
các sản phẩm tiêm là một vấn đề ngày càng tăng trong ngành. Hình ảnh dòng vi mô (MFI) là
một công nghệ mới nổi để định cỡ và đếm các hạt có thể nhìn thấy được. Trong MFI, sự thay
đổi cường độ ánh sáng khi nó đi qua một hạt so với nền được sử dụng để đánh giá cả kích
thước hạt và số lượng hạt. Những hình ảnh này cũng có thể được sử dụng để đánh giá tỷ lệ
khung hình và độ trong suốt. Trong phạm vi nhỏ hơn micromet, có thể sử dụng phân tích theo
dõi hạt nano (NTA). Các hạt phân tán được theo dõi kịp thời để đánh giá kích thước hạt.
Ngoài ra, Phân tích tán sắc Taylor (TDA), có thể được sử dụng để đo hệ số khuếch tán và bán
kính thủy động lực học, với độ chính xác rất cao (< 1% RSD). Sediq và cộng sự đã sử dụng
kết hợp sắc ký loại trừ kích thước, MFI và NTA để phân tích động học phát triển của hạt của
một sản phẩm tiêm. Họ cho thấy sự hình thành nhanh chóng của các hạt nano, sau đó là sự
hình thành của các vi hạt trong phạm vi 1 - 2μm.

Kết luận

Việc đo lường sự phân bố kích thước hạt của API kém hòa tan, sản phẩm thuốc trung gian và
sản phẩm thuốc cuối cùng là một thách thức đang diễn ra trong ngành. Cả việc lấy mẫu và
chuẩn bị phương pháp đều có thể ảnh hưởng đáng kể đến kết quả dữ liệu. Phương pháp phổ
biến nhất để đo kích thước hạt là phương pháp luận dựa trên laser; tuy nhiên, điều quan trọng
là phải xác nhận trực quan kết quả đầu ra bằng cách tiếp cận trực giao, ví dụ: kính hiển vi. Sự
ra đời của việc giám sát liên tục các quá trình sản phẩm đã pha trong thời gian thực hoặc gần
thực đã dẫn đến việc sử dụng các phương pháp tiếp cận định cỡ dựa trên quang phổ, ví dụ,
NIR, SFT, FBRM. Ngoài ra, nhu cầu giám sát các hạt nhìn thấy được và nhìn thấy được trong
các sản phẩm đường tiêm đã dẫn đến việc áp dụng MFI và NTA cho các hạt micromet và
dưới micromet. Như với các phương pháp tiếp cận dựa trên tia laser, điều quan trọng là phải
có được xác nhận trực giao về kích thước của các hạt này.

Tài liệu tham khảo

1. Butler JM, Dressman J. Hệ thống phân loại khả năng phát triển: Ứng dụng các khái niệm
dược sinh học để phát triển công thức. Tạp chí Khoa học Dược phẩm. 2010; 99 (12): 4940-
4954.

2. Bayliss và cộng sự. Hướng dẫn chất lượng cho các ứng cử viên thuốc uống: liều lượng, độ
hòa tan và tính ưa béo. Đĩa Thuốc Ngày Nay. 2016; 21 (10): 1719-1727.

3. Danh sách K, Steffens KJ. Überwachung und steuerung von granulationprozessen mit hilfe
der nah-Infrarot-Spektroskopie. Pharmind 1996; 58; 1110-1117.

4. Bushmüller C, Wiedy W, Döscher C, Plitzko M, Breitkreutz J. Giám sát trực tuyến độ ẩm

và nhiệt độ của hạt trong toàn bộ quá trình tạo hạt tầng sôi bằng công nghệ cộng hưởng vi
sóng (Phần I): Pharmind. 2009; 71: 1403-1408.

5. Kuriyama A, Osuga J, Hattori Y, Otsuka M. 2017. Giám sát nội tuyến của quá trình tạo hạt
có độ cắt cao sử dụng sự dịch chuyển đường cơ sở của phổ hồng ngoại gần. AAPS
PharmSciTech. 2017; 1-11. DOI: 10.1028 / s12249-017-0882-2.
6. Lipsanen Y, Närvänen T, Raikkönen H, Anitkainen O, Ylireuusi J. 2008. Kích thước hạt,
độ ẩm và các biến thể tầng sôi được mô tả bằng các phép đo vật lý nội tuyến gián tiếp của
quá trình tạo hạt ở tầng chất lỏng. AAPS PharmSciTech. 2008; 9: 1070-1077.

7. Roβteuscher-Carl K, Fricke S, Hacker MC, Schultz-Siegmund M. Giám sát trực tuyến kích
thước hạt trong máy tạo hạt tầng chất lỏng. Các cuộc điều tra liên quan đến vị trí và cấu hình
của cảm biến. Int J Pharm. 2014; 46: 31-37.

8. Petrak D. Đo đồng thời kích thước hạt và vận tốc của hạt bằng kỹ thuật lọc không gian. Par
Sys Charac. Năm 2002; 19: 391-400.

9. Huang J, Goolcharron C, Utz J, Hernandez-Abad P, Ghosh K, Nagi A. Phương pháp tiếp

cận PAT để nâng cao hiểu biết về quy trình tạo hạt tầng chất lỏng bằng cách sử dụng đặc tính
kích thước hạt trong dòng và phân tích đa biến. J Pharm Innov. 2010; 5: 58-68.

10. Dave K, Luner PE, Forness C, Baker D, Jankovsky C, Chen S. Tính khả thi của phép đo
phản xạ chùm tiêu điểm (FBRM) để phân tích huyền phù dược phẩm trong quá trình phát
triển tiền lâm sàng. AAPS PharmSciTech. 2017; 1-9. DOI: 10.1028 / s12249-017-0819-9.

11. Ruf A, Worlitscheck J, Mazzotti M. Mô hình hóa và phân tích thử nghiệm các phép đo
PSD thông qua FBRM. Nhân vật Part Part Sys. 2000. DOI: 10.1002 / 1521-4117 (200012)
17: 4 <167 :: AID-PPSC167> 3.0.CO; 2-T. http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1521-
4117(200012)17:4%3C167::AID-PPSC167%3E3.0.CO;2-T/full. Truy cập ngày 7 tháng 11
năm 2017.

12. Kougoulos E, Jones AG, Jennings KH, Wood-Kaczmar MW. Sử dụng phép đo độ phản
xạ chùm tia tập trung (FBRM) và xử lý hình ảnh video (PVI) trong bộ kết tinh làm mát hỗn
hợp dạng huyền phù đã sửa đổi (MSMPR). J Tinh thể phát triển. 2005; 273 (3-4): 529-534.

13. Zõlls S, Weinbuch D, Wiggerhorn M, Winter G, Friess W, Jiskoot W, Howe A. Kính hiển
vi hình ảnh dòng chảy để phân tích hạt protein - một phân tích so sánh của bốn dụng cụ phân
tích khác nhau. AAPS J. 2013; 15: 1200-1211.

14. Pedersen JS, Persson M. Khám phá các hạt protein xuyên sáng bằng các thuật toán hình
ảnh dòng vi mô được cải tiến. J Pharm Sci. 2014; 102: 2152-2165.

15. Sediq AH, Nejandik MR, Bialy IE, Witkamp GJ, Jiskoot W. Tương tác protein-
polyelerctrolyte: Theo dõi sự hình thành và tăng trưởng của hạt bằng phân tích theo dõi hạt
nano và kính hiển vi hình ảnh dòng chảy. Eur J Pharm Biopharm. 2015; 93: 339-345.

16. Filipe V, Hawe A, Jiskoot W. Đánh giá quan trọng của phân tích theo dõi hạt nano (NTA)
bằng NanoSight cho các phép đo của các hạt nano và tập hợp protein. Dược phẩm Res. 2010;
27: 769-810. 17. Hulse WL, Forbes RT. Một phương pháp phân tích phân tán Taylor để định
cỡ các protein điều trị và tập hợp của chúng bằng cách sử dụng lượng mẫu nanolit. Int J
Pharm. 2011; 416: 394-397.