TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN GEN NLPA NHẰM ĐỊNH HƯỚNG PHÁT

TRIỂN VẮC-XIN DNA CHỐNG LẠI ACINETOBACTER BAUMANNII

1. Mở đầu
a. Đối tượng: vi khuẩn Acinetobacter Baumannii cụ thể hơn là gen NlpA
b. Mục tiêu: tạo dòng và biểu hiện gen NlpA và nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của
gen này.
c. Lý do:
-Acinetobacter baumannii là một trong những loại vi khuẩn kháng kháng sinh
cao, gây nhiễm trùng với tỷ lệ tử vong cao. Vi khuẩn này là một trong những
nguyên nhân phổ biến gây nhiễm trùng trên toàn thế giới dẫn đến nhiễm trùng
bệnh viện cấp tính và dịch bệnh.
-NlpA là một trong những yếu tố kháng nguyên quan trọng trong quá trình
hình thành sinh học của các túi màng ngoài và vắc-xin được báo cáo dựa trên
OMV ở A. baumannii đã kích thích các phản ứng miễn dịch, nên nghiên cứu
này nhằm mục đích sao chép và biểu hiện gen nlpA trong các tế bào HDF nhân
chuẩn và đánh giá khả năng gây ra chủng ngừa sau khi sử dụng cấu trúc thu
được dưới dạng vắc-xin DNA ở chuột BALB/c

2. Nguyên liệu và phương pháp

a. Nguyên liệu: Chủng Acinetobacter baumannii và Escherichia coliTOP10F
b. Phương pháp:
-Trích xuất DNA và khuếch đại gen
+Mục đích: thu được đoạn gen mục tiêu
+Phương pháp: dùng một bộ kit đã có sẵn trên thị trường để thu nhận và
kiểm tra tại bằng phương pháp điện di và đo quang phổ. Sau đó dùng một phần
mềm có sẵn để thiết kế mồi và chạy PCR và cuối cùng là chạy điện di thì mình
xác định được đoạn DNA đã tác chiết có kích thước 867bp
-Xây dựng plasmid tái tổ hợp:
+Mục đích: xây dựng vector plamid biểu hiện gen NlpA
+Phương pháp:
-Chuyển pEGFP-C2-nlpA vào tế bào HDF:
+Mục đích: chuyển plasmid vào tế bào HDF
+Phương pháp:

-RT-PCR:
+Mục đích: Kiểm tra mức biểu hiện của gen ở mức phiên mã
+Phương pháp:
-Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch:
 +Mục đích: Nghiên cứu hiệu quả gây đáp ứng miễn dịch của plasmid chứa
gen NlpA
+Phương pháp:
IgM là kháng thể đầu tiên được hình thành sau khi tiếp xúc với kháng nguyên
mới

IgG là Yg đầu tiên được sản sinh sau khi tiếp xúc với kháng nguyên (phản ứng
miễn dịch thứ phát) và là isotype nổi bật chứa trong các sản phẩm game-
globulin thương mại. IgG bảo vệ chống lại vi khuẩn, virut và chất độc

Cytokine là những protein nhỏ rất quan trọng trong việc kiểm soát sự tăng
trưởng và hoạt động của các tế bào hệ thống miễn dịch và tế bào máu khác.
Khi được phát hành, họ báo hiệu hệ thống miễn dịch để thực hiện công việc
của mình. Các cytokine ảnh hưởng đến sự phát triển của tất cả các tế bào máu
và các tế bào khác giúp các phản ứng miễn dịch và viêm của cơ thể

tế bào bạch cầu giải phóng quá mức Cytokine khi có vi sinh vật xâm nhập vào
cơ thể, dẫn tới các phản ứng viêm toàn thân. Khi tiết ra quá nhiều Cytokine thì
càng huy động nhiều bạch cầu đến và Cytokine lại càng được tiết ra nhiều; làm
cho các tế bào bạch cầu không thể nhận diện được tế bào lành và tế bào bị tấn
công; vì thế tiêu diệt luôn cả tế bào lành làm cơ thể bị tổn thương rất nhanh

3. Thảo luận
Ưu điểm:
-Tăng khả năng sống sót và giảm mức độ cytokine do tiêm chủng bằng protein
Omp22
-Vaccin có khả năng kích thích hệ thống miễn dịch của vật chủ
-Tạo đáp ứng miễn dịch 2 phía
-An toàn và ổn định ở nhiệt độ khác nhau và quy trình sản xuất đơn giản
Nhược điểm:
-Bị giới hạn bởi các quy định về an toàn, các khàng nguyên này không nhắm
đến mục tiêu trực tiếp của tính trạng kháng kháng sinh
4. Kết luận
Cấu trúc pEGFP-C2-nlpA được tạo ra trong nghiên cứu này có thể biểu hiện
gen A. baumannii nlpA trong các tế bào HDF. Hiện tạikhông có vắc-xin được
cấp phép chống lại A. baumannii. Sự biểu hiện thành công của gen nlpA có thể
được coi là một chiến lược vắc-xin tái tổ hợp mới để sử dụng trên mô hình
động vật. Cấu trúc tái tổ hợp thu được gây ra sự bài tiết của IgG, IgM, INF-γ, IL-
2, IL-4 và IL-12. Mặc dù những phát hiện của chúng tôi rất hứa hẹn, nhưng cần
có thêm các thí nghiệm để xác nhận nó là vắc-xin DNA. Đây là nghiên cứu đầu
tiên tạo ra gen A. baumannii nlpA dựa trên cấu trúc tái tổ hợp để trở thành vắc-
xin DNA