显微镜有关技术大杂烩

1、普通复式光学显微镜：分辨率最高达 0.2μm，无特殊之处。
2、相差显微镜：比普通复式光学显微镜多两个元件（1.环状光阑 2.相差板），相差显微镜
可以观察活细胞。
利用了光的相位差：相位差人眼不可见。
光透过密度不同的区域会产生相位差，相差显微镜可以将相位差转变为正负差，便于观
察。
微分干涉显微镜原理同相差显微镜，只是微分干涉显微镜的光源为平面偏振光（也可观
察活细胞）。
3、荧光显微镜 激发光滤片 目镜
示意图： 阻断滤光片：二次滤过确保透过的光是荧光

光源
双分镜：让短波的激发光反射，并可透过长波
的荧光。

物镜

样品

荧光分子标记：由于我们观察的对象不一定发荧光（或者荧光很微弱）
在操作前需用荧光分子标记
荧光分子：用于指示特定分子或离子，可产生荧光的分子。
常用的荧光分子：标记蛋白质：罗丹明
2+：
标记 Ca FURA-2
标记 DNA：DAPI
绿色荧光蛋白（GFP） （常用常考）
免疫荧光术：利用抗原抗体的特异性结合来进行标记 1、直接标记 2、二抗标记

一抗 二抗

抗原

荧光蛋白标记：可观察活细胞内的蛋白质活动
最常用：GFP（绿色荧光蛋白）可通过基因工程的方法，使 GFP 基因与目的
基因结合，从而动态观察蛋白质的活动。
紫光
可用于研究蛋白质的相互作用： 蓝光
1、 紫光 蓝光 2、 红光
红光

A
B

A B
如图，当其未相互作用时（如图 1）：用紫光照射，发出蓝光，用蓝光照射发出红光
当其相互作用时（如图 2）
：用紫光照射发出红光
4. 激光扫描显微镜
如图所示

检测器

共焦小孔

激光 双色镜

物镜

样品（可上下移动）

可以调节样品上下移动，激光的聚焦点不变
可在显示器上显示 3D 结构
5、电子显微镜：用电子束代表光束，通过电磁透镜成像
超薄切片技术：取材——固定——包埋——切片——染色——观察
（一个动物细胞要切成 100 片）
固定：用醛类，常用甲醛
包埋：用环氧树脂
切片：用石蜡支撑后，用石蜡切片器
染色：核酸：醋酸双氧铀
蛋白：柠檬酸铅
脂质：锇酸
负染色技术：用重金属染色，使待观察物的四周染色（本体不染色）
冷冻蚀刻技术：将样品放入液氮中冷冻，再用小刀撬开（冰冻断裂）
后温度升高使其表面一些物质升华（蚀刻）
再用重金属以一定角度斜喷在样品上，再用碳垂直喷在样品上（复形）
抗原抗体标记：与光镜的荧光标记类似，只是用的不是荧光分子，而是电子致密物（常用
胶体金）
放射性显影：利用放射性同位素的电离射线对乳胶（寒含 AgCl 或 AgBr）的感光作用，
对细胞内生物大分子进行定性定位与定量研究，分两步
1、同位素标记的生物大分子前体的渗入
2、细胞内同位素的显示（H3 标记法就属于此类）
6、扫描电子显微镜：电子通过电磁透镜汇聚并轰击在样品产生二次电子控制成像
保持细胞形态：当 CO2 在 31℃，72.8 个大气压的情况下干燥细胞，可保持细胞形态。
镀金：增强产生二次电子的能力。