Isolation of Listeria monocytogenes from ices

Isolating Listeria monocytogenes from ice cream requires a series of

microbiological techniques and procedures. Here are general steps that can
be followed:

1- Sample collection: Collect a sample of the ice cream suspected to be

contaminated with Listeria monocytogenes using a sterile spatula or
scoop.

2- Pre-enrichment: Transfer the sample to a sterile container with a pre-

enrichment broth such as Half-Fraser broth or Buffered Listeria
Enrichment Broth (BLEB), and incubate at 30-37°C for 24 hours.

3- Enrichment: Transfer a portion of the pre-enriched broth into a

selective enrichment broth such as Fraser broth or Modified Oxford
broth, and incubate at 30-37°C for 24-48 hours.

4- Plating: Plate the enriched broth onto selective agar plates such as
Oxford agar or PALCAM agar, and incubate at 30-37°C for 24-48
hours.

5- Confirmation: Perform biochemical tests or molecular tests to

confirm the identity of the isolated bacteria as Listeria
monocytogenes.
‫‪It is important to note that working with Listeria monocytogenes requires‬‬
‫‪strict adherence to safety guidelines and proper laboratory practices to‬‬
‫‪prevent contamination and ensure accurate results.‬‬

‫عزل ‪ Listeria monocytogenes‬من المثلجات‬

‫تعتمد عملية عزل ‪ Listeria monocytogenes‬من اآليس كريم على سلسلة من التقنيات واإلجراءات‬
‫الميكروبيولوجية‪ .‬وفيما‪ #‬يلي الخطوات العامة التي يمكن اتباعها‪:‬‬

‫جمع العينة‪ :‬قم بجمع عينة من اآليس كريم المشتبه فيها بواسطة ملعقة أو مجرفة معقمة‪.‬‬ ‫‪-1‬‬

‫اإلثراء األولي‪ :‬انقل العينة إلى حاوية معقمة تحتوي على محلول إثراء أولي مثل ‪Half-Fraser‬‬ ‫‪-2‬‬
‫ضر‪ #‬المحلول عند‬
‫‪ broth‬أو )‪ Buffered Listeria Enrichment Broth (BLEB‬وح ّ‬
‫درجة حرارة ‪ C°37-30‬لمدة ‪ 24‬ساعة‪.‬‬

‫اإلثراء الثانوي‪ :‬انتقل بجزء من المحلول المث ّر في الخطوة السابقة إلى محلول إثراء ثانوي انتقائي‬ ‫‪-3‬‬
‫ضر‪ #‬المحلول عند درجة حرارة‬ ‫مثل ‪ Fraser broth‬أو ‪ Modified Oxford broth‬وح ّ‬
‫‪ C°37-30‬لمدة ‪ 48-24‬ساعة‪.‬‬

‫الزرع‪ :‬قم بزرع‪ #‬المحلول المثرّ على أطباق اختيارية مثل ‪ Oxford agar‬أو ‪PALCAM‬‬ ‫‪-4‬‬
‫‪ agar‬وحضّر المحاليل عند درجة حرارة ‪ C°37-30‬لمدة ‪ 48-24‬ساعة‪.‬‬

‫التأكيد‪ :‬قم بإجراء اختبارات كيميائية أو جزيئية لتأكيد هوية البكتيريا‪ #‬المعزولة على أنها ‪Listeria‬‬ ‫‪-5‬‬
‫‪.monocytogenes‬‬

‫من المهم مالحظة أن العمل مع ‪ Listeria monocytogenes‬يتطلب االلتزام الصارم‪ #‬بإرشادات السالمة‬
‫والممارسات‪ #‬المخبرية الصحيحة لمنع التلوث وضمان النتائج الدقيقة‪.‬‬
To inoculate ice cream on Half Fraser broth and to count Listeria
monocytogenes, follow these steps:

1- Prepare Half Fraser broth according to the manufacturer's

instructions and sterilize it by autoclaving.

2- Take a sterile spatula or scoop and transfer a known amount of the

ice cream sample onto the surface of the broth. The amount will
depend on the desired level of sensitivity and should be determined
based on the expected contamination level.

3- Use a sterile pipette to mix the ice cream sample with the broth by
pipetting up and down several times.

4- Dilute the mixture using a serial dilution technique to obtain a

dilution series with appropriate dilution factors depending on the
expected contamination level.

("Transfer 1 gram or 1 ml of ice cream to a tube containing 9 ml of sterile

distilled water, mix well, and this will result in a dilution of 10-1. Then,
transfer 1 ml from tube 1 to tube 2 to obtain a dilution of 10-2."

5- Plate the dilutions onto selective agar plates such as Oxford agar or
PALCAM agar and incubate at 30-37°C for 24-48 hours.

6- Count the colonies on the plates and calculate the number of Listeria
monocytogenes per gram or per milliliter of ice cream.
 ‫كيفية التلقيح ب عينات اآليس كريم على محلول ‪ Half Fraser‬وعد عدد خاليا ‪Listeria‬‬
‫‪ ، monocytogenes‬يرجى اتباع الخطوات التالية‪:‬‬

‫حضّر محلول ‪ Half Fraser‬وفقا ً لتعليمات المصنع واعقمه باألوتوكالف‪.#‬‬ ‫‪-1‬‬

‫اختر أداة ملعقة أو مجرفة معقمة وانتقل بكمية معروفة من عينة اآليس كريم إلى سطح المحلول‪.‬‬ ‫‪-2‬‬
‫تعتمد الكمية على المستوى‪ #‬المطلوب من الحساسية ويجب تحديدها‪ #‬بنا ًء على مستوى التلوث‬
‫المتوقع‪.‬‬

‫استخدم محقنة معقمة لخلط عينة اآليس كريم مع المحلول عن طريق‪ #‬التحريك بالمحقنة لألعلى‬ ‫‪-3‬‬
‫واألسفل عدة مرات‪.‬‬

‫قم بتخفيف المزيج باستخدام تقنية التخفيف المتسلسل للحصول على سلسلة تخفيفات بعوامل تخفيف‬ ‫‪-4‬‬
‫مناسبة تعتمد على مستوى التلوث المتوقع (‪.)from 10-1 to 10-4‬‬
‫(نقل ‪ 1‬جرام او ا مل من المثلجات الى انبوبة تحتوي على ‪ 9‬ملي ماء مقطر معقم ثم خلطها جيدا وهنا‬
‫‪2-‬‬
‫يصبح التخفيف ‪ )1-10‬يتم نقل ‪ 1‬مل من االنبوبة رقم ‪ 1‬الى انبوة رقم ‪ 2‬ليصبح التخفيف ‪10‬‬
‫تلقيح ‪ 0.1‬ملي من التخفيفات على أطباق اختيارية مثل ‪ Oxford agar‬أو ‪PALCAM agar‬‬ ‫‪-5‬‬
‫وحضن االطباق‪ #‬عند درجة حرارة ‪ C°37-30‬لمدة ‪ 48-24‬ساعة‪.‬‬

‫عد المستعمرات على األطباق وحسب عدد خاليا ‪ Listeria monocytogenes‬لكل غرام أو لكل‬ ‫‪-6‬‬
‫مل من اآليس كريم‪.‬‬