.

* QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT

Phân vào trong GTE
- Glucose: Duy trì áp suất thẩm thấu, cân bằng nồng độ bên trong và ngoài TB -> giúp
TB không bị đóng vón, không bị vỡ khi phân tán.
- Tris base: Nhằm ổn định độ pH, bảo vệ DNA được giải phóng ở bước sau
- EDTA: bất hoạt DNAse do cạnh tranh tạo phức với Mg2+, Ca2+ -> Bảo vệ DNA
-> Tạo dịch đục
Trộn với SDS – kiềm:
- SDS: Phá màng TB, biến tính protein ( SDS – Ptan )
- Kiềm: biến tính DNA ( loại tạp protein và ADN NST )
-> Dung dịch trong vì tế bào bị vỡ, độ nhớt tăng do TB ly giải
Trộn với KOAC – pH 5,5
- Hồi tính plasmid -> Làm cho tan, DNA NST không thể hồi tính -> Kết tủa
- K+ + SDS: Tạo phức KDS tủa -> Kéo theo ADN bộ gen và protein tủa
- K+: tăng hiệu suất tủa ADN plasmid
-> Dịch đục kèm theo nhiều tủa trắng
Ethanol tuyệt đối lạnh
Vì Ethanol hoặc Isopropanol là có ái lực với nước mạnh hơn DNA/RNA, do đó nó
phá vỡ mối tương tác giữa nước và nucleic và DNA/RNA sẽ kết tủa lại.
Ethanol 70°: làm sạch ADN ( loại bỏ muối thừa )
- Vì cồn 70° là 30% H2O, 70% cồn nên H2O hòa tan muối -> loại bỏ được muối
khoáng
- Không sử dụng cồn thấp độ hơn được vì để giữ ADN ở trạng thái tủa, nhiều H2O sẽ
làm ADN tan trong nước.
TE 1X-pH 8 bao gồm 10 mM Tris và 1 mM EDTA được điều chỉnh tới pH 8.
EDTA đóng vai trò như chất chelate hóa, ngăn cản sự phân hủy của ADN và ARN bởi
bắt giữ các ion kim loại hóa trị hai, là tác nhân cần thiết cho hoạt động của các
enzyme nuclease.

*QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT

Gel Agarosa
Agarose phân giải mạnh các đoạn DNA và RNA từ 100 bp đến 40 kb
GelRed
Không có khả năng xâm nhập tế bào -> không gây hại, bền với nhiệt độ, nhạy hơn,
phù hợp với tất cả các thiết bị, không gây độc cho các loại vi khuẩn.