‫به نام خدا‬

‫و گیرنده آن در لنفوسیت های ‪ IL-21‬بررسی بیان‬

‫استخراج شده از غدد لنفاوی درناژ کننده ‪ B‬و ‪T‬‬
‫بیماران مبتال به سرطان پستان‬

‫سارا محمدصادقی‬

‫‪:‬اساتید راهنما‬
‫پروفسورعباس قادری‬ ‫دکتر فرشته مهدی پور‬
 ‫مقدمه‬
‫‪.‬سرطان پستان شایعترین تومور بدخیم در زنان می باشد‬

‫سرطان پستان یک بیماری مولتی فاکتولایر‪ ،‬با سیر بالینی و ویژگی‬

‫‪.‬های مولکولی و پاتولوژیک متنوع می باشد‬

‫مطالعات موید این مطلب است که سیتوکین های التهابی در ریز‬

‫محیط تومور می توانند در پاتوژنز‪ ،‬سرکوب یا پیشرفت این‬
‫‪.‬سرطان نقش داشته باشند‬
 ‫‪IL-21‬‬

‫یک سیتوکین پلئوتروپیک با اثر بر روی هر دو رده سلول های ‪IL-21‬‬

‫‪.‬میلوئیدی و لنفوئیدی می باشد‬

‫فعالیت هر دو پاسخ ایمنی ذاتی و اکتسابی را تنظیم می کند و عمدتا ‪IL-21‬‬

‫‪.‬فعال‪ ،‬تولید می شود ‪ CD4+T‬توسط سلول های‬

‫‪.‬می شود ‪ NK‬و ‪ CD8+T‬موجب افزایش فعالیت سیتولیتیک سلول های ‪IL-21‬‬

‫را مهار می کند بنابراین ‪ FOXP3‬را القا و بیان ‪ TH17‬تمایز سلولهای ‪IL-21‬‬
‫‪.‬تاثیر می گذارد ‪ Treg‬و ‪ TH17‬بر روی تعادل سلول‬

‫‪ B،‬را تحریک می کند و در فعالیت و تکثیر سلول ‪ B‬تمایز سلول های ‪IL-21‬‬
‫تغییر کالس آنتی بادی‪ ،‬تمایز به پالسماسل و تولید آنتی بادی در طی پاسخ های‬
‫‪.‬نقش دارد ‪ CD4+T‬وابسته به سلول‬
 ‫‪IL-21R‬‬

‫و زنجیره مشترک گاما که در ‪ IL-21R‬یک هترودایمر شامل ‪IL-21R‬‬

‫وجود ‪IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-13, IL-15‬گیرنده سیتوکین هایی شامل‬
‫‪.‬دارد‪ ،‬است‬
‫عمدتا بر سطح سلول های بافت های لنفوئیدی طحال‪ ،‬تیموس و ‪IL-21R‬‬
‫ماکروفاژ‪ ،‬منوسیت و ‪ B، CD4+T، NK،‬غدد لنفاوی از جمله سلول های‬
‫‪.‬سلولهای دندریتیک بیان می شود‬
INTERLEUKIN-21:A DOUBLE-EDGED SWORD WITH THERAPEUTIC POTENTIAL BY ROSANNE SPOLSKI AND
WARREN J. LEONARD
 ‫‪IL-21‬در سرطان‬

‫در بیماریهای انسانی همچون بیماریهای خود ایمنی‪ ،‬پوستی‪ ،‬گوارشی‪ IL-21 ،‬نقش‬
‫‪.‬عفونت های ویروسی و بدخیمی ها مورد بررسی قرار گرفته است (‪1‬و‪)2‬‬

‫در برخی بیمایهای خودایمنی از جمله لوپوس‪ ،‬آرتریت ‪ IL-21‬افزایش سطح سرمی‬
‫‪.‬روماتوئید و دیابت تایپ یک نشان داده شده است (‪3‬و‪)4‬‬

‫را بعنوان یک عامل ایمنوتراپی برای بدخیمی های ‪ IL-21‬مطالعات اخیر‪ ،‬پتانسیل‬
‫هماتولوژیک براساس توانایی آن درالقای آپوپتوز در سلول های توموری مطرح‬
‫‪.‬کرده اند (‪5‬و‪)6‬‬

‫منجر به ‪ NK‬و ‪ CD8+T‬در افزایش فعالیت سیتولیتیک سلول های ‪ IL-21‬توانایی‬

‫ورود آن به کارآزمایی های بالینی در بیماران مبتال به مالنومای متاستاتیک و‬
‫‪.‬کارسینومای سلول کلیوی شده است (‪5‬و‪)6‬‬
 ‫‪IL-21‬در سرطان‬

‫و رسپتور آن در پرولیفراسیون‪ ،‬مهاجرت و ‪ IL-21‬و همکاران نقش ‪ Wang‬در مطالعه‬

‫‪.‬تهاجم سرطان پستان نشان داده شده است (‪)7‬‬

‫‪ B‬در سلولهای ‪ B‬در تولید گرانزیم ‪ IL-21‬نقش‬

‫‪ IL-21‬به دنبال تحریک به وسیله ‪ B‬و همکارانش نشان دادند که سلول های‪Lindnere‬‬
‫تولید کننده گرانزیم با ‪ B‬تولید می­کنند و سلول های ‪ B‬گرانزیم ‪ BCR )،‬با یا بدون تحریک(‬
‫میشوند‪ T .‬و تخریب آن ‪ ،‬باعث کاهش تکثیر سلول های ‪ ζ TCR‬اثر بر روی زنجیره‬ ‫­‬
‫را نیز بیان می ‪ CD25‬نیز بوده و ‪ IDO‬و ‪ IL-10‬بعالوه این سلول ها قادر به تولید‬
‫تنظیمی که قبًال گزارش شده اند نیز وجود ‪ B‬کردند که این سه مشخصه در سلول های‬
‫‪.‬دارند‬
‫می ‪ B‬تولید کننده گرانزیم ‪ B‬بنابراین نویسندگان این مقاله نتیجه گرفتند که سلول های‬
‫‪ .‬توانند در ریز محیط سرطان ها نقش سرکوبگر و یا تنظیمی داشته باشند (‪)9‬‬
‫می توانند مستقیما سلولهای ‪ B‬تولیدکننده گرانزیم ‪ B‬مطالعه دیگری نشان داد که سلولهای‬
‫‪ .‬توموری را از بین ببرند و بنابراین نقش مثبت در ایمنی علیه تومور دارند (‪)10‬‬
 ‫‪:‬مطالعات انجام شده درمرکز تحقيقات سرطان شناسي شیراز‬

‫دریکی از مطالعات مشاهده شد که در بیماران مبتال به سرطان پستان که نوع‬

‫تشخیص داده شده بود‪ ،‬در )‪ IDC (Invasive Ductal Carcinoma‬تومور آنها‬
‫تولید ‪ B‬غدد لنفاوی درگیر نسبت به غدد لنفاوی غیردرگیر‪ ،‬فراوانی سلول های‬
‫به طور معناداری کاهش یافته است (داده های آن هنوز منتشر ‪ B‬کننده گرانزیم‬
‫‪.‬نشده است)‬
‫فعال شده و حافظه و ‪ B‬همچنین مطالعه دیگر نشان داده است که درصد سلولهای‬
‫که در آنها تغییر ایزوتایپ رخ داده است در غدد ‪ B‬همچنین درصد سلولهای‬
‫‪.‬لنفاوی درگیر نسبت به غیر درگیر کاهش یافته است (‪)11‬‬

‫‪ B، IL-‬توسط سلول های ‪ B‬از آنجا که مهمترین سایتوکاین برای تولید گرانزیم‬
‫نیز نقش دارد بنابراین ‪ B‬در تغییر ایزوتایپ سلول های ‪ IL-21‬می باشد و ‪21‬‬
‫و یا دیگر سلولهای ‪ TFH‬این فرضیه می تواند مطرح شود که درصد سلولهای‬
‫در ‪ IL-21R‬و یا بیان ‪ IL-21‬و یا توانایی آنها در تولید ‪ IL-21‬تولید کننده ‪T‬‬
‫و ‪ B‬درغدد لنفاوی درگیر کاهش یافته و به دنبال آن تولید گرانزیم ‪ B‬سلولهای‬
‫‪.‬کاهش پیدا می کند ‪ B‬یا تغییر ایزوتایپ در سلول های‬
 ‫هدف كلي‬

‫و سلولهای ‪ IL-21‬بیان کننده ‪ CD4+‬تعیین فراوانی سلولهای‬

‫در غدد لنفاوی بیماران مبتال به ‪ IL-21R‬بیان کننده ‪B‬‬
‫سرطان پستان و ارتباط آنها با پارامترهای بیماری‬
‫‪1.‬‬
‫اهداف اختصاصي‬
‫‪2.‬‬ ‫در غدد لنفاوی درگیر و غیر ‪ IL-21‬بیان کننده ‪ CD4+ T‬تعیین و مقایسه فراوانی سلولهای‬
‫درگیر بیماران مبتال به سرطان پستان‬

‫‪3.‬‬ ‫و ‪LN+‬در غدد لنفاوی بیماران ‪ IL-21‬بیان کننده ‪ CD4+ T‬تعیین و مقایسه فراوانی سلولهای‬
‫مبتال به سرطان پستان ‪LN-‬‬

‫‪4.‬‬ ‫در غدد لنفاوی درگیر و غیر درگیر ‪ IL-21R‬بیان کننده ‪B‬تعیین و مقایسه فراوانی سلولهای‬
‫بیماران مبتال به سرطان پستان‬

‫‪5.‬‬ ‫‪ LN-‬و ‪LN+‬در غدد لنفاوی بیماران ‪ IL-21R‬بیان کننده ‪ B‬تعیین و مقایسه فراوانی سلولهای‬
‫مبتال به سرطان پستان‬

‫‪6.‬‬ ‫درغدد لنفاوی بیماران مبتال به ‪ IL-21‬بیان کننده ‪ CD4+ T‬بررسی ارتباط فراوانی سلولهای‬
‫‪ grade‬سرطان پستان با پارامترهای بالینی و پاتولوؤیک مانند مرحله بیماری‪ ،‬سایز تومور و‬
‫تومور‬

‫‪7.‬‬ ‫درغدد لنفاوی بیماران مبتال به سرطان ‪ IL-21R‬بیان کننده ‪ B‬بررسی ارتباط فراوانی سلولهای‬
‫تومور ‪ grade‬پستان با پارامترهای بالینی و پاتولوؤیک مانند مرحله بیماری‪ ،‬سایز تومور و‬
 ‫هدف كاربردي‬

‫است ‪ T‬و ‪ B‬یک سیتوکین کلیدی در تنظیم پاسخ های سلول ‪IL-21‬‬
‫و افزایش دانش ما از بیان و عملکرد آن در ریز محیط تومور می‬
‫‪.‬تواند به ما در طراحی ایمونوتراپی های هدفمند کمک کند‬
 ‫فرضيات يا سواالت پژوهشي‬
‫‪1.‬‬ ‫درغدد لنفاوی درگیر و ‪ B‬در جمعیت لنفوسیت های ‪ IL-21R‬فراوانی سلولهای بیان کننده‬
‫غیر درگیردر بیماران مبتال به سرطان پستان چقدر است؟‬

‫‪2.‬‬ ‫در غدد لنفاوی ‪ CD4+ T‬در جمعیت لنفوسیت های ‪ IL-21‬فراوانی سلولهای بیان کننده‬
‫درگیر و غیردرگیر در بیماران مبتال به سرطان پستان چقدر است؟‬

‫‪3.‬‬ ‫در غدد لنفاوی درگیر و ‪ T‬در جمعیت لنفوسیت های ‪ IL-21‬آیا فراوانی سلولهای بیان کننده‬
‫غیردرگیر با هم متفاوت است؟‬

‫‪4.‬‬ ‫در غدد لنفاوی درگیر و ‪ B‬در جمعیت لنفوسیت های ‪ IL-21R‬آیا فراوانی سلولهای بیان کننده‬
‫غیردرگیر با هم متفاوت است؟‬

‫‪5.‬‬ ‫در غدد لنفاوی بیماران مبتال به سرطان‪ IL-21‬بیان کننده‪ T‬آیا ارتباطی بین فراوانی سلولهای‬
‫تومور وجود دارد؟ ‪ grade‬پستان با پارامترهای بالینی مانند مرحله بیماری‪ ،‬سایز تومور و‬

‫‪6.‬‬ ‫در غدد لنفاوی بیماران مبتال به سرطان ‪ IL-21R‬بیان کننده‪ B‬آیا ارتباطی بین فراوانی سلولهای‬
‫تومور وجود دارد؟ ‪ grade‬پستان با پارامترهای بالینی مانند مرحله بیماری‪ ،‬سایز تومور و‬
‫روش اجراي طرح‬
‫روش جمع آوری نمونه‬

‫نمونه غدد لنفاوی اگزیالری‪ 30‬بیمار مبتال به سرطان پستان که سابقه قبلی‬
‫دریافت شیمی درمانی و رادیوتراپی را نداشته اند و مورد جراحی قرار گرفته و‬
‫از آنها غدد لنفاوی جدا شده است مورد مطالعه قرار خواهند گرفت‪ .‬اطالعات‬
‫بیماران با استفاده از پرونده های پزشکی آنان جمع آوری خواهد شد‪ .‬نمونه غدد‬
‫‪.‬استفاده می گردد )‪ (fresh‬لنفاوی بصورت تازه‬
‫تهیه سوسپانسيون سلولي‪ :‬نمونه هاي غدد لنفاوی توسط روش مكانيكي به قطعات‬
‫بسیار ریز خرد می شوند‪ .‬بعد از عبور سوسپانسيون سلولي از فيلتر سلولی‪،‬‬
‫‪.‬جداسازی سلول های تک هسته ای توسط روش گرادیان فایکول انجام می شود‬

‫‪ IL-21R‬و ‪ IL-21‬بررسی بیان‬

‫سلولهاي تك هسته اي جدا شده از غدد ‪T ،‬در سلول ‪ IL-21‬جهت بررسی بیان‬
‫توسط ‪ Berefeldin A‬بهمراه یونومایسین و ‪ PMA‬لنفاوی پس از تحریک با‬
‫رنگ آمیزی شده و‪ CD4‬شستشو داده میشود و با آنتی بادیهای سطحی‪ PBS‬بافر‬
‫‪ IL-21‬پس از فیکس و نفوذپذیر شدن‪ ،‬سلول ها با آنتی بادی علیه سیتوکین‬
‫‪.‬رنگ آمیزی خواهند شد‬
‫لنفوسیت ها در شرایط بدون تحریک ‪B ،‬در سلول ‪ IL-21R‬جهت بررسی بیان‬
‫‪.‬رنگ آمیزی می شوند ‪IL-21R , CD19‬با آنتی بادیهای سطحی‬
‫در نهایت سلول‌ها با دستگاه فلوسایتومتری مورد بررسی قرار می‌گیرند و‬
‫‪.‬آنالیز خواهند شد ‪ FlowJo‬داده‌های حاصل با نرم‌افزار‬
 ‫روش های آماری‬

‫ابتدا نرمالیتی داده‌ها چک خواهد شد‪ .‬در صورت نرمال بودن داده ها‪ ،‬از تستهای‬
‫‪.‬استفاده خواهد شد ‪ Student’s T-test‬و ‪ANOVA‬‬

‫‪ Mann Whitney U‬در صورت نرمال نبودن داده ها از تست‌های ناپارامتریک‬

‫‪.‬استفاده می‌شود ‪ Kruskal-wallis‬و ‪test‬‬

‫نیز برای آنالیز و رسم نمودار ‪ GraphPad Prism 6‬و ‪ SPSS 16‬نرم افزار‬
‫‪.‬استفاده خواهد شد‬
 ‫منابع‬
1. Spolski R, Leonard WJ. Interleukin-21: basic biology and implications for cancer and
autoimmunity. Annu Rev Immunol. 2008;26:57-79.
2. Ma S-W, Huang X, Li Y-Y, Tang L-B, Sun X-F, Jiang X-T, et al. High serum IL-21 levels after
12weeks of antiviral therapy predict HBeAg seroconversion in chronic hepatitis B.
Journal of hepatology. 2012;56(4):775-81
3. Arroyo-Villa I, Bautista-Caro M-B, Balsa A, Aguado-Acín P, Bonilla-Hernán M-G, Plasencia
C, et al. Constitutively altered frequencies of circulating follicullar helper T cell
counterparts and their subsets in rheumatoid arthritis. Arthritis research & therapy.
2014;16(6):500.
4. Xu X, Shi Y, Cai Y, Zhang Q, Yang F, Chen H, et al. Inhibition of increased circulating Tfh
cell by anti-CD20 monoclonal antibody in patients with type 1 diabetes. PLoS One.
2013;8(11):e79858.
5. Davis ID, Brady B, Kefford RF, Millward M, Cebon J, Skrumsager BK, et al. Clinical and
biological efficacy of recombinant human interleukin-21 in patients with stage IV
malignant melanoma without prior treatment: a phase IIa trial. Clinical Cancer Research.
2009;15(6):2123-9.
6. Davis ID, Brady B, Kefford RF, Millward M, Cebon J, Skrumsager BK, et al. Clinical and
biological efficacy of recombinant human interleukin-21 in patients with stage IV
malignant melanoma without prior treatment: a phase IIa trial. Clinical Cancer Research.
2009;15(6):2123-9.
 ‫منابع‬
1. Wang L-N, Cui Y-X, Ruge F, Jiang WG. Interleukin 21 and Its Receptor Play a Role in
Proliferation, Migration and Invasion of Breast Cancer Cells. Cancer Genomics-
Proteomics. 2015;12(5):211-21.
2. You Y, Deng J, Zheng J, Hu M, Li N, Wu H, et al. IL-21 gene polymorphism is
associated with the prognosis of breast cancer in Chinese populations. Breast
cancer research and treatment. 2013;137(3):893-901.
3. Lindner S, Dahlke K, Sontheimer K, Hagn M, Kaltenmeier C, Barth TF, et al.
Interleukin 21–Induced Granzyme B–Expressing B Cells Infiltrate Tumors and
Regulate T Cells. Cancer research. 2013; 73:2468-2479.
4. M. Hagn, K. Sontheimer, K. Dahlke, S. Brueggemann, C. Kaltenmeier, T. Beyer,
et al. Human B cells differentiate into granzyme B-secreting cytotoxic B
lymphocytes upon incomplete T-cell help. Immunol Cell Biol. 2012; 90:457-
467
5. Mehdipour F, Razmkhah M, Hosseini A, Bagheri M, Safaei A, Talei AR, et al.
Increased B Regulatory Phenotype in Non‐Metastatic Lymph Nodes of Node‐
Positive Breast Cancer Patients. Scandinavian journal of immunology.
2016;83(3):195-202.
‫با سپاس از توجه شما‬
‫جلسه دفاع از پروپوزال‬