Biotech maj 2016

1)E. coli jako system ekspresyjny wykorzystywany do produkcji białek

2)Parametry wpływające na zwiększenie produkcji-wymień i scharakteryzuj

3)Omów strategię ADEPT

4)Co to są aptamery

5)Antysensowne DNA

6) Porównaj przeciwciała mono- i poliklonalne

7)Scharakteryzuj bakterie mlekowe ....jak macie pyt z 2. gr to piszcie ?

1. Komórki eukariotyczne jako systemy ekspresyjne.

2. Interferony
3. Co to jest Master Cell Bank i Working Cell Bank?
4. Enzybiotyki
5. Terapia genowa - definicja, przykłady preparatów
6. Immobilizacja
7. Porównać proces przepływowy i ciągły.

Pytania z ustnego

egzamin:

-wirus krowianki

- E. COLI!!!!!!!!!!!

-kw cytrynowy, glutaminian, asparaginian, lizyna

-penicylina i takie drugie co to go nie pamiętam (cefalosporyna)

- namok kukurydziany, melasa i jakieś trzecie coś

-dekstran ( można się nauczyć z gnozji)

-bełkotki i inne stafy do bioreaktorów

-rys historyczny 315

-biosynteza insuliny

-metabolity wtórne wytwarzane w komórkach roślinnych in-vitro

-korzenie transformowane

-wyklad o kulturach zwierzęcych in-vitro

biosynteze penicyliny, ktore czasteczki wykorzystywane w lecznictwie sa najmniejsze, jaka jest
jednostka ich wielkosci (Dalton),jesli chcemy zsyntetyzowac sztuczny gen to jak to mozna
przeprowadzic

1. pierwsze związki chemiczne produkowane przy pomocy biotechnologii (penicyliny, aminokwasy,

biofarmaceutyki).

2. otrzymywanie dekstranu kliincznego (wytrącanie odpwiedniej frakcji dekstranu przy pomocy

etanolu o odpowienim steżeniu).

3. budowa bioreaktorów oraz czy mieszanie zawsze musi byc mechaniczne.

4. podłoża - ogólnie, zawartość namoku kukurydzianego oraz samej kukurydzy i innych zbóż (białka a
nie aminokwasy)

pytal mnie o biofarmaceutyki

promieniowce i w ogole jakie drobnustroje wykorzystujemy

o glikolize i cykl Krebsa (jak działa tlen)

ktore bakterie moge zyc w warunkach tlenowych i beztlenowych - gatunek bakterii i grzyba

i od czego zaczela sie biotechnologia

czyli fermentacja i penicylina

choc jeszcze o szcepionki lubi

enzymy allosteryczne

dekstran

pierwszy lek uzyty w farmacji a wyprodukowany techniką biotechnologiczną- penicylina

pierwszy biofarmaceutyk- insulina

promieniowce - cechy i co produkują

cechy metabolitów wtórnych ( są produktem ubocznym, powstaja jako mieszanina)

jak ”sztucznie” mozna stworzyc gen

wektory stosowane w biotechnologii i przykład wirusowego np . wirus krowianki - opisac jak sie
wprowadza ten gen obcy do wirusa (tzreba pamietac ze wirus nie ma komórki wiec juz utworzony
genom na plazmidzie namnaża sie w komórce eukariotycznej ssaków)

Wirus krowianki-dlaczego jest używany?

Wektory-po co są markery? Dlaczego lepiej gdy jest więcej markerów niż jeden, dlaczego gdy drugi
marker jest cięty przez endonukleazę jest to dobra reakcja?
Dekstran-powstawanie, jaki używany jest w lecznictwie, jak wielkocząsteczkowy zamienić w mniejszy,
hydroliza kwasowa, enzymatyczna. Dlaczego tak naprawdę nie zastępuje krwi?

Jakie procesy wykorzystuje się częściej w biotechnologii, dlaczego?(tlenowe, większy zysk

energetyczny).Jaki proces beztlenowy

wykorzystywany jest w przemyśle farm- produkcja dekstranu. Bakteria, wykorzystywana w

biotechnologii najczęściej(E.coli) Pytania raczej wymagają więcej wymyślania i kombinowania niż
wiedzy:p

Glikoliza- że jest to proces beztlenowy,

Fosforylacja substratowa to przeniesienie reszty fosforanowej na jakąś czasteczkę - m.in powstanie

fosfoenolopirogronianu

zysk energetyczny z oddychania tlenowego - 38 ATP (4 ATP z glikolizy (w tym dwa zużye na rekację
fosforylacji glukozy w pierwszym etapie, czyli zyk glikolizy = 2ATP i z daszych przemian zyks 36 ATP co
w sumie daje neeto 38 ATP), zysk energetyczny oddychania beztlenowego (4ATP brutto, 2 ATP netto)

który proces jest bardziej wydajny i używany w biotechnologii - tlenowy, bo dostarcza większej ilość
energii i jest większy przyrost biomasy,

Co to jest fermentacja - z mikrobiologicznego punktu widzenia - oddychanie beztlenowe, a z

biotechnologicznego puktu widzenia fermentacja to procesy beztlenowe i tlenowe, bo Fermetory to
= bioreaktory,

Proces beztlenowy z mikrobiologicznego i biotechnologicznego puktu widzenia to synteza dekstranu,

chociaż obecność tlenu L. mesenteroides nie przeszkadza, ale jest to proces beztlenowy.

Dekstran- substancja uzupełniająca objętośc krwi. Błędnie nazywany środkiem kriozastępczym,

ponieważ nie ma składu krwi, nie ma m.in czerwinych krwinek, które służą do transportu tlenu.

Dekstran - stącamy etanolem, a nie ekstrahujemy , ponieważ etanol jako rozpuszczalnik organiczny
polarny rozpuszcza się w wodzie i rozpuszczalnej w wodzie substancji etanolem nie wyekstrahujemy.

To wszystko co pamiętam.

Pytałam ludzi z roku wyżej, pytał ich o aminokwasy np. dokładnie wszystko o leucynie

Pyta na myslenie ale nie znaczxy to ze nie mozna przyjsc na betona

bo pyta np o nadprodukcje aminokwasow

lub produkcje antybiotykow

wiec trzeba znac konkret

Mnie pytal o bioreaktory

czyli :

budowe podzial

ze jest z kwasoodpornej stali lub szkla

ze trza sterylizowac

ze moze byc mieszadlo ale nie musi

bo moze byc tylko belkotka

pyta co to belkotka

do doprowadzania tlenu i mieszania

pytal mnie o rodzaje podlozy w farmacji

Tak

Czemu w mikrobiologii sa inne a w farmacji inne

ze codzi o koszty

ze podloza kompleksowe to sa odpady przemyslu spozywczego

pytal tez o dekstran

o to co sie dodaje do biorekatora

i jakie warunki musza byc w bioreaktorze

inyhc ldiz z tego dnia pytal o frakcjonowanie dekstranu

o to czemu czyli do czego uzywa sie etanolu w produkcji dekstrranu

nie martw sie zawsze mozna sie wybronic

ale naucz sie o nadprodukcji i antybiotykah zebyc cokolwiek powiedzial

w sensie o antybiotykach tylko produkcja penicyliny i cefalosporyny?

dekstran i bioreaktory i zdasz

Jakie drobnoustroje zaczęto wykorzystywać dzięki inżynierii genetycznej a wcześniej nie

wykorzystywano, jaki szczep E. Coli jest najpopularniejszy i najważniejszy(chodziło mu o K12), czy E.
Coli sa zawsze niezjadliwe (zaczął sie w mikrobiologie zaglębiać), synteza lizyny(każdego o to dziś
pytał), synteza insuliny-do jakich organizmów wprowadzamy gen. co to jest inżynieria genetyczna i co
dzięki niej możemy osiągnąć. coś o regulacji, omijaniu sprzężenia zwrotnego - o enzymach
allosterycznych i ich budowie i szczegółowo o mutantach regulatorowych bo to ma z tym związek...
pytał strasznie pokrętnie że nie wiedziałam o co mu chodzi w ogóle. dziad :) ach, i jeszcze o syntezie
penicyliny, jakie warunki muszą być spełnione.

czorna kasia:

o pierwszą biosyntezę insuliny

o to jak się ją syntezuje, jakie wektory

o modyfikacje potransalcyjne

kasia2:

pytal - insulina, dekstran, historia biotech, rodzaje biofarmaceutykow

kolezanka - jak otrzymujemy geny - metody otrzymywania

chodzilo tu o - ze na podstawie mRNA mozna, ze sytenza chemiczna (unieruchomione startery itd), ze

badajac strukture bialka a potem mozna na jej podstawie stworzyc dna

mnie pytal o wektory - co to plazmid, plazmid - budowa, elementy plazmidu do klonowania

sa plazmidy do klonowania i do ekspresji

to co wiekszosc ma opisane w notatkach to sa eksrepsyjne

zwroc uwage na te 2 rodzaje

zaraz po egzaminach:

jesli chodzi o lizyne pytal o mutanty auksotroficzne=zywieniowe ich wzrost zalezy od homoseryny gdy
jej nie ma, nie moga prod tyrozyny,wiec nalezy dodac w malych stezeniach tyrozyne. mutanty
regulatorowe to takie ktore sa niewrazliwe nawrazliwe na wzrost stez lizyny,jak uzyskujemy takie
mutanty :wzrost na pozywce z ACE(analog lizyny) gdy obserujemy duzy wzrost koloni w miejscu gdzie
duze stez ACE tzn ze sa niewrazliwe na AEC a wiec i na lizyne. a i ze kinaza asparaginianowa to enzym
allosteryczny i ma 2 miejsca wiazania:centrum aktywne i centrum allosteryczne(tu przylacza sie lizyna
i hamuje enzym)

Budowa bioreaktorów, napowietrzanie (rodzaje napowietrzaczy - bełkotka,inżektor, eżektor), gdzie

napowietrzać i dlaczego (pod mieszadłem - bo lepsze rozproszenie powietrza, dłuższy kontakt
powietrza z hodowlą, bo mniejsze straty energii), rodzaje mieszadeł (smigłowe, tarczowo-łopatkowe),
ogólnie mieszanie i napowietrzanie.

L-lizyna - rodzaje mutantów (auksotroficzne, regulatorowe - z opisem), rodzaje enzymów,

allosteryczność kinazy asparaginianowej - na czym polega, inhibicja produktami, zastosowanie AEC w
selekcjonowaniu mutantów.

Procesy tlenowe czy beztlenowe i dlaczego tlenowe?

jak chłodzić bioreaktory - że kiedyś stosowano chłodnice, a dziś jakiś płaszcz wodny. i w ogóle
dlaczego je chłodzimy - bo podczas procesóww biologicznych są straty energetyczne w postaci ciepła.
pytał w jakim momencie powstaje woda w procesach biologicznych - że w oddychaniu tlenowym z
wodoru i tlenu. o to jakie konkretnie drobnoustroje produkują lizynę i nie wystarczyło mu że
Corynebacterium tylko konkretnie chciał. i zapytał co jeszcze Corynebacterium wytwarza - kwas
glutaminowy. jak zmusić bakterie do nadprodukcji?
skad bierzemy geny? (przepisanie mRNA na DNA, izolacja DNA i cięcie restryktazami - ale to wg niego
niefajna metoda, PCR! rzuca sie duuuuzy DNA na pcr, daje odpowiedni starter!!! = primer -> ale to
nie po polsku... syteza chemiczna DNA (syntetyzery chemiczne - podobno bardzo fajne...)

otrzymywanie insuliny.

wektory, jakie są rodzaje, a potem bardziej szczegółowo o plazmidy i bakteriofagi, skąd pozyskujemy
szczepy, o licencje na drobnoustroje, jak wyizolować czysty szczep, o penicillium chrysogenum.
Oprócz tego, że czepiał się użytych sformułowań, że są nieprecyzyjne itp, to zadawał mnóstwo pytań
dodatkowych.

miała powiedzieć o regulacji biosyntezy lizyny, powiedziała wyczrpująco o mutantach

auksotroficznych i regulatorowych i też jej dalej już nie pytał, cały egz trwał z 10 min, jak widzi że ktoś
porządnie umie to odrazu zalicza, a na punkcie tej lizyny to ma bzika:)

Skąd pozyskuje się drobnoustroje - chodzi mu o to skąd poza źródłami naturalnymi, czyli że w
placówkach dydaktycznych są banki drobnoustrojów, z których można wykupić LICENCJĘ na dany
drobnoustrój co jest łatwym ale kosztownym sposobem pozyskiwania

i jeszcze czym różnią się wektory wirusowe od plazmidowych

1) podloza - skldaniki, co jak, jakie cukry, podloza kompleksowe omowic (melasa, namok, serwatka)

2) jaki proces moze byc i w war tlenowych i beztlenowych - synteza dekstranu... no i popłynął

3) dekstran - wszytko co mozliwe:P co syntetyzuje, jaki enzym, jakie bakterie substraty itp. jaka masa
czasteczkowa powstaje piewrwotnie (kilka milionow Daltonow), jaka chcemy miec by byl uzyteczny -
kilka - kilkadziesiatt tys Daltonow. Jak to zrobic ? - hydroliza. Rodzaje. czemu enzymatyczna jest
lepsza od kwasowej. jaki enzym przeprowadzza ta hydrolize. jJak wyodrebnic dekstran - etanolem
wytracamy. nie mozna ekstrakcji przeprowadzic bo nie bedzie rozdzialu faz bo woda i etanol sie
mieszają ze sobą. dlaczego małoczząsteczkowy dekstran moze posluzyc jako substrat - bo ma
powinowacto dobre do niego enzym.

4) sposoby regulacji enzymow..

5) penicylina - synteza, jak regulujemy cukrami by byla wydajna , tzn jak sie powninno przeprowadzac
synteze penicyliny by byla najwiekasz wydajnosc.

6) hmmm regulacja syntezy aminokwasow - podaj przykład... - L-Lizyna.... nadprodukcja L-Lizyny..

sposoby, jakie tam sa 2 rodzaje mutacji.. jakie drobnoustroje przeprowadzaja. jaki jesce inny
aminokwas syntetyzuja - kwas L-glutaminowy..
spytał o systemy ekspresji

w którym można otrzymać najwięcej białka - e .coli

który system będzie najlepszy z tego powodu, że zrobi obróbke potranslacyjną - komórki zwierzęce

więc ogólnie trzeba znać wady i zalety tych systemow

bakterie mlekowe

dekstran

jakie procesy są stosowane w farmacji, powidziałam ze tlenowe lepsze:P

więc pytał dlaczego tlenowe są lepsze, czyli ten zysk glikolizy i krebsa

trzeba wiedzieć co to derepresja (chyba chodzi o waline i izoleucyne w syntezie lizyny), że dodajemy
biotyny w syntezie lizyny żeby bakterie nie produkowały glutaminianu, bo małe stężenie biotyny
sprzyja wytworzeniu drobnoustrojów z ścianą komórkową która przepuszcza glutaminian czy coś

(sierpień)

pytał z cykli, o dekstran, jego nazwy, dlaczego maloczasteczkowy, że jest terminatorem jednej reakcji
i primerem następnej, czemu powstają małe czasteczki, chodzi o to że małocząsteczkowy ma
mniejsze powinowactwo, jak frakcjonujemy dekstran - metoda enzymatyczna i hydroliza kwasowa,
która jest lepsza, czemu,

o napowietrzenie też pytał, że jak napływ powietrza jest na samym dole kolumny (ona ma 3 wirniki
czy coś) czy czegoś to jest większe rozproszenie i rozdrobnienie, gdzie umieścimy napowietrzenie jak
są 3 wirniki (na samym dole) powstają mniejsze pęcherzyki powietrza, które mają większą
powierzchnie niż mniej większych pęcherzyków, dlatego tlen przechodzi z nich łatwiej do podłoża,
pytał o bakterie tlenowe i beztlenowe, czy są takie które są beztlenowe i używane są w procesach
tlenowych, który proces jest czesciej wykorzystywany w biotechnologii - tlenowy czy beztlenowy

Pisemny egzamin jak chmiel był chory/był na wakacjach:

1. Metabolizm wtórny, jego produkty.

2. Mutanty, mutacje, ich znaczenie w biosyntezie.

3. Sposoby ekspresji genów (wektor jako biorca, wady i zalety)

1.metabolity drobnoustrojów i ich wykorzystanie w lecznictwie

2. Biofarmaceutyki- def, przyklady i wytwarzanie

3.Screening - zastosowanie w biotechnologii

1. Składniki podłoża i inne parametry wpływające na proces biosyntezy.

2. Jak izolujemy geny do powstawania rekombinantów?

3. Typy bioreaktorów - różnice w budowie i sposobie mieszania.

1. Najważniejsze osiągnięcia biotechnologii(techniki, technologie, produkty)

2. Drobnoustroje wykorzystywane w biotechnologii

3. Coś o wektorach- jakie są dobre, które do czego służą.

Ćwiczenia:

1. etapy procesu biotechnologicznego

2. fuzja protoplastow

3. cechy E. coli ktore warunkują jej powszechne wykorzystanie w biotechnologii

4. mutageneza

amen. biotechnologia, dn. 23 lutego 2010 z Pania wysoka chuda ktora ma wade zgryzu i seplen

1. immobilizacja

2. cechy zajebistego wektora (8)

1. mikroorg ktore produkują kwas cytrynowy

2. co to jest antybiottyk