Biofarmacija arba Raudonoji biotechnologija:

faktai ir galimybės

LMA narys korespondentas prof. Vladas Algirdas Bumelis

Dr. Arūnas Vaitkevičius

2010 m. spalio 20 d. Konferencija “Biologijos kryptys ir naujovės”

 Biotechnologijos samprata

2
 Biotechnologijos apibrėžimas

Terminas biotechnologija yra sukurtas iš trijų graikų kalbos

žodžių: bios – gyvybė, techno – amatas, logos– mokslas.

Pirmas šį terminą pavartojo vengrų inžinierius Karl Ereky 1919 m.

Europos biotechnologijos federacija yra pateikusi tokį

apibrėžimą:

Biotechnologija – tai integruotas gamtos ir technikos mokslų

taikymas, kada, naudojant organizmus, ląsteles, jų dalis ar jų
molekulinius analogus, yra kuriami naudingi produktai ir
paslaugos.

arba paprasčiau:

Biotechnologija yra gyvosios gamtos objektų ar jų sudėtinių dalių

panaudojimas praktiniais tikslais
3
 Biotechnologijų įvairovė

Biotechnologijos “vėliava”
Raudona Biofarmacija (biologinių vaistų paieška ir gamyba, diagnostika)
Žalia Augalų genetinis modifikavimas ir auginimas
Balta Industrinių cheminių medžiagų biosintezė, biokuras, aplinkosauga
Mėlyna Biologiškai aktyvūs produktai iš jūros ir ežerų organizmų
Geltona Biologiškai specifinio veikimo maistas, maisto papildai
Pilka Klasikinė fermentacija ir produktai (pav. alus, mielės)
Auksinė Bioinformatika, genomika, proteomika
Violetinė Intelektinė nuosavybė (patentai, išradimai, technologijos)
Juoda Biologinis ginklas, toksinai, bioinsekticidai

EuropaBio (European Associate of Bioindustries) biotechnologiją skirsto tik į Raudonąją, Žaliąją, Baltąją ir
Mėlynąją.

4
 Biotechnologijos istorija


Primityvioji biotechnologija (9-10 tūkst. metų): alus, vynas, actas,
pieno rauginimas, duona, linų rauginimas


Nesterili gamyba (100-150 metų): mielių gamyba, acetono gamyba
(I pasaulinio karo metais)

 Sterili biotechnologija (60 metų): antibiotikai 1943 m (Flemingas)


Modernioji biotechnologija (30 metų): rekombinantinių DNR
pagrindu gaunami preparatai – žmogaus insulinas 1978 m.

5
Biotechnologiniai procesai prieš 100 metų

6
 Biotechnologiniai procesai dabar

7
 Moderniosios biotechnologijos
pagrindas - DNR rekombinacija

Modernioji biotechnologija – tai

technologijos, grindžiamos
molekulinės biologijos žiniomis. Tokios
technologijos pagrindas yra
paveldimumo substrato – DNR –
cheminis keitimas (rekombinacija).

8
 Biofarmacija arba raudonoji biotechnologija

9
 Biofarmacija

 Biofarmacija – mokslo ir gamybos sritis, kuri genų

inžinerijos metodais sukurtus biologinius objektus ar jų
sintezuojamus produktus pritaiko žmonių sveikatos
apsaugai (gydymui, ligų diagnostikai ir profilaktikai)

 Biofarmacija yra neatsiejama nuo moderniosios

biotechnologijos, t.y. DNR rekombinacijos technologijos

10
 Biofarmacija

 XX amžiaus 80-90 metais biofarmacija buvo

siejama su genetiškai modifikuotais
mikroorganizmais arba žinduolių audinių
ląstelėmis

 Paskutiniajame praeito amžiaus dešimtmetyje

biofarmacija jau siejama ir su genetiškai
modifikuotais augalais bei gyvūnais

11
Raudonosios biotechnologijos gimimas ir
dabartis

1953 Watson ir Crick paskelbė DNR struktūrą

1973 Boyer ir Cohen sukūrė rekombinantinės DNR
metodologiją

1978 Eli Lilly kompanija pradėjo gaminti pirmą

genoinžinerinį produktą – Humulin ® (žmogaus
insulinas)
1985 Genentech pradėjo gaminti Protropin ® (žmogaus
augimo hormonas)
1989 Pradėtas gaminti Epogen® (Eritropoetinas)
1993 Chiron’o Betaseron ® (beta-interferonas)
patvirtintas išsėtinės sklerozės gydymui.
2000 Žmogaus genomo sekos nustatymas.
Prasideda post genominė era: galimybė
sukurti apie pusę milijono žmogaus
baltymų
2010 Pasaulyje gaminama virš 300 biofarmacinių
vaistų, sukurtų naudojant rekombinantinės DNR
metodologiją, dar keturi šimtai yra III fazės klinikinių
tyrimų stadijoje

12
 Biofarmaciniai preparatai

 I kartos biofarmaciniai preparatai –

klasikiniai biofarmaciniai preparatai
(interferonas, filgrastimas, insulinas)

 II kartos biofarmaciniai preparatai -

prailginto veikimo biofarmaciniai
preparatai (PEG-interferonas)

13
Biofarmacinių preparatų ypatumai

- Naudojant šiuolaikinius molekulinės biologijos ir

biotechnologijos metodus galima pagaminti “žmogiškus”
biologiškai aktyvius vaistinius preparatus, kurių
organizmas dėl įvairių priežasčių (ligos, genetiniai
pažeidimai ir pan.) negali pats susintetinti (citokinai,
hormonai, monokloniniai antikūnai, fermentai ir kt.)

- Nėra alternatyvos biologiniams vaistams

- Biofarmaciniai preparatai sintetinami tik gyvuose

genetiškai modifikuotuose organizmuose

- Biofarmacinių preparatų gamybos augimas yra spartesnis

už tradicinių vaistų gamybos augimą, jų dalis per
artimiausius 5 metus padidės nuo 20% iki 25-27%

14
Kuo biofarmaciniai preparatai skiriasi
nuo tradicinių cheminių vaistų?
• Daug kartų didesnė molekulinė masė (nuo keliasdešimt tūkstančių iki kelių
šimtų tūkstančių daltonų)

• Kompleksinė erdvinė struktūra

• Sintetina gyvi organizmai, todėl struktūra dažnai nevienalytė

• Sudėtingas ir brangus gamybos procesas

Penicillin Interferon alfa-

• Sudėtingi analitiniai charakterizavimo metodai, tame tarpe biologinis
aktyvumo nustatymas 2b

• Aukštas veikimo selektyvumas

• Santykinai nestabilios molekulės: pH, druskos, šiluma iššaukia baltymų

oksidinimo, deamidinimo ir agregacijos procesus

15
 Biofarmacinių produktų kelias nuo
tyrimų iki gamybos

Visa trukmė nuo genetinės konstrukcijos iki vaisto registravimo 7-10 metų

16
 Biofarmacinio preparato kelias

Sėkmė iki 20%

Išlaidos iki kelių šimtų mln. EUR

17
 Biofarmacinių preparatų tyrimai ir
gamyba

18
 Biofarmacinių preparatų sintezė
Sintezės šaltiniai Privalumai
Greitai dauginasi, lengvai
valdomi, lengvai įdiegimai
Mikrooganizmai
gamyboje, didelė tikslinio
baltymo ekspresija
Žinduolių audinių Sintetinami glikozilinti
ląstelės baltymai
Pastovus tikslinio baltymo
Augalai ir gyvūnai gamybos šaltinis, mažos
investicijos į sintezės gamybą
19
Trūkumai
Nesintetinami glikozilinti
baltymai
Lėtas ląstelių
dauginimasis, sunkiau
valdomas procesas,
ląstelės jautrios aplinkos
poviekui
Neizoliuotas procesas,
sunkiai kontroliuojamas,
brangus transgeninio
augalo arba gyvūno
pagaminimas
 Biofarmacinių preparatų sintezė

 Mikrooganizmams ar žinduolių audinių ląstelėms

yra reikalinga:

Optimali aplinkos temperatūra

Optimalus aplinkos pH

Optimalus deguonies kiekis

Maisto medžiagos: anglies, azoto, fosforo, mikroelementų
bei vitaminų šaltiniai

20
 Biofarmacinių preparatų sintezė

 Biofarmacinių preparatų sintezė yra vykdoma

bioreaktoriuose, kurių tūris nuo 10 L iki 20 tūkst
litrų

21
 Biofarmacinių preparatų gryninimas

 Biofarmacinių preparatų gryninimas atliekamas

panaudojant chromatografinius metodus:

Iš 10,000 baltymų esančių ląstelėje yra reikalinga
išgryninti tik vieną tikslinį baltymą

Ląstelės šeiminkės baltymų lygis po gryninimo negali būti
daugiau kaip 0,01%

DNR lygis po gryninimo ne daugiau 0,00001%

suardžius ląsteles galutiniame produkte

Baltymų Baltymų
prieš po gryninimo
elektroforezė chromatogarfija

22
Biofarmacinių preparatų gryninimas

 Biofarmacinių preparatų gryninimas vykdomas

pramoninėmis chromatografijos sistemomis

23
 Biofarmacinių preparatų analizė

 Grynumo tyrimai – nustatyti baltymo grynumą ir

jo priemaišų kiekį (naudojami metodai SDS-
PAGE, RP-HPLC, SE-HPLC, IEX-HPLC)

24
 Biofarmacinių preparatų analizė

 Identiškumo tyrimuose – baltymo identiškumas

gamtiniam prototipui - naudojami metodai:
peptidinis žemėlapis (“baltymo pirštų
antspaudai”), masių spektrometrija

Neugranin IAA 24h Glu-C 0.3ug 09-May-2008

TBU_IAA_GLUC24H_20080430_03A Sm (SG, 2x4) TOF MS ES+ TBU_Intact_02 308 (18.979) M1 [Ev-90452,It25] (Gs,0.362,1076:1718,0.50,L33,R33); Cm (296:358) TOF MS ES+
100
696.7 BPI 100
85089.38;1.48 8.82e4
1.02e3

381.2

521.2
434.2 517.2

%
%

784.3
438.6
599.3
416.9

842.7

525.7 656.0 646.1

402.2

320.4 516.7
507.6 569.3
276.5
792.4 1007.8
463.2 568.2

702.8 385.8 835.2

549.8 716.9

408.2 725.6 834.9 602.0 85061.34 85115.55

600.9 505.8 1261.6 -26.56 27.65 85413.84
917.4 325.94
1265.9

-0 Time 0 mass
10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 84200 84400 84600 84800 85000 85200 85400 85600 85800 86000

25
 Biofarmacinių preparatų analizė

 Struktūros tyrimai – nustatyti baltymo struktūros

korektiškumą (kristalografija, masių
spektrometrija)

26
 Biofarmacinių vaistų gamyba pasaulyje

500
Biologiniai vaistai

Kiti vaistai
400
Pardavimai. Milijardai JAV $

300

200

100

2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

2010 metais apie 23% visų vaistų sudarys biologiniai vaistai

27
Biofarmacinių medžiagų gamyba pasaulyje

Viso šių novatoriškų biofarmacinių medžiagų, gautų genų

technologijos metodais – apie keturios tonos per metus

Šaltiniai: Metinės gamybos apimtys: Annual Reports. Kaina vaistinėse: Arzneimittelkompendium, (Šveic.), MediMedia Gelbe Liste,
Pharmaindex (Vok.), RxUSA.com Pharmacy (JAV)

28
 Biofarmacijos perspektyvos

29
 Kas yra progresas?

30
 Virš tūkstantis baltymų jau identifikuoti
baltymotyros metodais kaip potencialūs
vaistai

Gaminama apie 300 biologinių vaistų, dar apie 400 yra įvairiose klinikinių tyrimų stadijose

Veiklos yra!
31 Lit.: The Pharmaceutical Market Outlook, Business Insights, 2009
Rekombinantinių baltymų sintezė gyvuliuose
(karvių pieno liaukose)

ŽMOGAUS DNR

KARVĖS DNR

Rekombinantinė DNR
KARVĖS LĄSTELĖ
patalpinama gyvulio
kiaušialąstėje

Po 278 dienų

32
Pirma klonuota transgeninė karvė Argentinoje

10 l pieno per dieną

70 g žmogaus augimo hormono per dieną
33 (5000 somatropino vaistinių33dozių)
Na, ir pabaigai apie biotechnologijas...

34
 SICOR Biotech – biofarmacijos lyderis Lietuvoje

35
 Sicor Biotech UAB

 Vienintelė genų inžinerijos būdu kuriamų vaistų

gamintoja Centrinėje ir Rytų Europoje
 Ne tik sėkmingai pardavinėja savo vaistus
Centrinėje ir Rytų Europoje, bet įgyvendinusi
visus ES ir JAV GGP reikalavimus, yra
užregistravusi vieną preparatą ES ir veržiasi
į JAV rinką

36
 Sicor Biotech Istorija

37
 Sicor Biotech produktai

38
Žinios ir patirtis – sekmės pagrindas

 Iš 180 įmonės darbuotojų (Administracija, Moksliniai tyrimai, Gamyba ir Marketingas)

18 darbuotojų yra mokslo daktarai chemijos, biochemijos ir pan. srityse
 Daugiau nei 80% visų darbuotojų turi aukštąjį universitetinį išsilavinimą
bioinžinerijos, molekulinės biologijos, biochemijos, biologijos, medicinos ir pan.
srityse
 Pagrindinis personalas, dirbantis gamybos, mokslo ir kokybės padaliniuose, turi
didesnę nei 10 metų patirtį biofarmacijoje

39
SICOR Biotech – veiksmingas mokslo
ir gamybos aljansas

 Sicor Biotech turi šiuolaikinį

Mokslinių tyrimų ir
eksperimentinės plėtros centrą
 Centras pilnai sukomplektuotas
reikalinga modernia įranga

 Turime:
 Įvairios paskirties laboratorijas (mikrobiologinės biosintezės, rekombinantinių
baltymų išskyrimo ir gryninimo, analitinių metodų, vaistinių formų ruošimo ir tyrimo ir
kt.)
 Bandomoji linija (atitinka Geros Gamybos Praktikos reikalavimus, 100 kv.m. švariųjų
patalpų)
 Gamybinės skalės technologinė linija (iki 1000 l fermenatacijos apimtis)
 Kasmet skiriame 10-15 milijonų litų naujų technologijų bei vaistinių preparatų
kūrimui ir įdiegimui į gamybą
40
 Gamybos centras

 Sicor Biotech turi šiuolaikinę

rekombinantinių baltymų gamyklą
 Gamykla atitinka ES ir JAV GGP
reikalavimus
 Visų gaminamų produktų
technologijos paruoštos savane
mokslo centre
 Turime:
 Gamybos linija (mikrobinės biosintezės, išskyrimo, gryninimo, substancijos išpilstymo)
 Kokybės kontrolės laboratorijos (cheminė, biocheminė, biologinio testavimo)
 Kokybės užtikrinimo padalinys
 Pagalbinės sistemos (sandėliai, švaraus vandens/garo gamyba, švariosios gamybos
patalpos su reikalinga ventiliacija ir kt.)
 Dirbame 24/7 darbo režimu visus metus, statoma nauja gamybos linija, kuri padidins
gamybos apimtį 2 kartus kitais metais

41
 Keletas nuotraukų iš gamybos

42
Pagrindiniai biofarmaciniai produktai yra
Sicor Biotech asortimente

1.Rekombinantinis žmogaus interferonas alfa-2b:

Realdiron®
Realdiron Set®

Indikacijos: Ūminis hepatitas B;

Lėtinis hepatitas C;
Onkologinės ligos

2. Rekombinantinis žmogaus augimo hormonas:

Biosoma®
Indikacijos: Vaikų augimo sutrikimai
dėl augimo hormonų trūkumo;

3. Filgrastimas (r-metHuG-CSF):
Grasalva ™
Tevagrastim ®
Indikacijos: baltųjų kraujo kūnelių
gamybos atstatymui gydyti po
chemoterapijos arba persodinant kaulų
čiulpus

43
SICOR Biotech vaistų rinka

ES, Šveicarija,
Serbija Rusija
Rusija
Kazachstanas
Kazachstanas
Moldova
Uzbekistanas
Uzbekistanas
Pakistanas
Pakistanas

Alžyras
Alžyras
Meksika
Meksika &
Centrinė
Centrinė
Amerika
Izraelis

Brazilija
Brazilija

European Union

Russia, Kazakstan, Moldova, Uzbekistan and Pakistan

Mexico and Central America countries

Algeria

44
SICOR Biotech produktų pranašumai

 Įmonės gaminami vaistai savo kokybe konkuruoja su analogiškais

preparatais, gaminamais garsiausių užsienio farmacinių
kompanijų
 “Sicor Biotech” sukurti ir gaminami vaistai yra 1,5–2 kartus
pigesni už pasaulyje gaminamus analogus
 “Sicor Biotech” vaistai – reali galimybė valstybės lėšoms
taupyti, aprūpinant Lietuvos gyventojus pačiais moderniausiais
ir efektyviausiais vaistais
 “Sicor Biotech” parduodamos Lietuvoje produkcijos dėka vien per
pastaruosius penkis metus valstybės biudžetas sutaupė apie
30 mln. litų

45
Verslo ir mokymo bendradarbiavimas

 Sicor Biotech iniciatyva 1994m. VGTU įkurta

Bioinžinerijos katedra
 VGTU studentai baigiamuosius darbus ruošia
naudodamiesi Sicor Biotech moksline baze
 Bendrovė kiekvienais metais paremia VGTU ir VU
laboratorijas įranga bei reagentais
 Kasmet Sicor Biotech įdarbina VGTU Bioinžinerijos
katedros absolventus

46
 Ačiū už dėmesį

47