Metode za odreivanje koncentracije glukoze u krvi

Metode koje koriste reduktivnu sposobnost glukoze

1) Hagerdon-Jensen
2) Folin Wu
Kolorimetrijske metode s aromatskim aminima (anilin, o-toluidin)
- reakcija preko aldehidne skupine kojom nastaje Schiffova baza plave boje
- potrebna octeno-kisela sredina i poviena temperatura
- nespecifina, komplicirana metoda s otrim reagensom
Enzimatske metode
1) Metode s glukoza-oksidazom (GOD)
glukoza reagira s kisikom i vodom uz GOD pri emu nastaju vodikov peroksid i
glukonska
kiselina
a) vodikov peroksid uz peroksidazu i akceptor kisika oksidira bezbojni
kromogen
obojeni spoj (kromogeni - ABTS, o-toluidin, o-dijanizidin)
b) kisikova elektroda biljei utroak kisika u reakciji glukoze uz GOD
2) Metode s glukoza-dehidrogenazom
2.1. beta-D-glukoza u reakciji sa NAD uz pomo enzima G-DH prelazi u Dglukozu-2 laktozu sa NADH2
2.2. alfa-D-glukoza uz pomo mutarotaze prelazi u beta-D-glukozu
3) Metoda s heksokinazom
- glukoza reagira sa ATP-om pri emu nastaje glukoza-6-fosfat i ADP
- nadalje, glukoza-6-fosfat reagira sa NADP uz djelovanje enzima G-6-PDH te
nastaje 6-fosfoglukonat sa NADPH2
- ovo je apsolutno specifina, tona, jednostavna i skupa metoda
Dokazivanje glukoze u urinu
- testovi koji se baziraju na reduktivnom svojstvu glukoze i drugih eera te
testovi test trakom
1) glukoza reagira s kisikom uz djelovanje glukoza oksidaze te nastaju
glukonska kiselina i vodikov peroksid koji e dalje uz peroksidazu oksidirati
reducirani kromogen
- kromogeni su aromatski amin (o-toluidin) i ABS
Testovi za dokazivanje ketonskih spojeva
- veina se bazira na reakciji natrijevog nitroprusida koji u alkalnoj sredini
reagira s acetonom i acetooctenom te stvara crveni kondenzacioni spoj
1) test po Legalu

2) test po Rotheri
3) test na acetooctenu po Gerhardtu (acetooctena sa ferikoloridom stvara
enolat)
4) test trake impregnirane natrijevim nitroprusidom
Dokazivanje bilirubina
1)Test po Rosinu - bilirunbin se s jodom oksidira u zeleni bilverdini plavi
bilicijanin
2) Test po Fouchetu - bilirubin se adsorbira na barijev fosfat i ukoncentrira te
se oksidira ferikloridom u biliverdin i bilicijanin
3) Test po Gmelinu - bilirubin se s HNO3 oskidira u obojene spojeve
4) Test trake - bilirubin sa diazoanilinom stvara azokompleks smee boje, a
test traka je impregnirana mjeavinom pufera i diazotiranog 2,4-dikloranilina
Dokazivanje urobilinogena
1) Reakcija po Ehrlichu - p-dimetilaminobenaldehid s urobilinogenom daje
crveno obojeni kondenzacioni spoj
2) test traka
Metode za odreivanje koncentracije ureje u serumu
1) reakcija ureje sa alfa-diketonima i njihovim oksimima (reagens -diacetilmonoksim)
2) Berthelotova reakcija - odreivanje amonijaka nakon hidrolize ureje
ureazom
2.1. klasina reakcija u kojoj amonijak reagira sa fenolom i hipkoloritom u
prisutnosti Na-nitroprusida te nastaje modri indofenol koji se mjeri
fotometrijski
2.2. modifikacija upotrebom Na-salicilata umjesto fenola
2.3. potpuno enzimatska reakcija
Metode za odreivanje koncentracije kreatinina
1) Kinetika metoda
- bazira se na Jaffeovoj reakciji (kreatinin u alkalnoj sredini daje crvenonaranasti kompleks iji se intenzitet mjeri fotometrijski)
- reakciju kreatinina mjerimo od 20. do 80. sekunde reakcije
2) Enzimatska metoda
Metode za odreivanje koncentracije mokrane kiseline u serumu
1) Reduktivne metode - mokrana kiselina se oksidira u alantion, a
fosfowolframat se reducira u plavo obojeni spoj
2) Enzimatske metode - pomou enzima urikaze mokrana kiselina prelazi u
alantoin i vodikov peroksid
Metode za odreivanje koncentracije amonijaka
2 oksiglutarat + NH4 + NADPH2 uz djelovanje GLDH dobivamo alfa glutarat

+ NADP + H2O

Odreivanje koncentracije bjelanevina plazme

1) metode u kojima se odreuje proteinski duik - KJELDAHL
2) fotometrijske metode - na bazi biuretske reakcije (u alkalnoj sredini
bakrovi ioni reagiraju s peptidnom vezom i daju plavo obojenje koje se mjeri
fotometrijski)
Odreivanje koncentracije fibrinogena u plazmi
1) fibrinogen se od ostalih proteina plazme izdvoji dodavanjem kalcijevih
iona i moe se odrediti:
1.1.) gravimetrijski
1.2.) po biuretu
1.3.) po Kjeldahlu
2) turbidimetrijske metode
Odreivanje koncentracije albumina u serumu
1) po Kjeldahlu
2) po biuretu
[u prvoj i drugoj metodi najprije se moraju isoliti globulini]
3) indikatorom
4) elektroforetske metode
5) imunokemijske metode
Referentne vrijednosti
ZA PROTEINE - serum zdrava ovjeka sadri 60-85 g/L
- 35 - 55 g/L albumina i 15-32 g/L globulina
- 2-4 g/L fibrinogena
ZA UREJU - serum sadri 3-8 mmol/L
- urin 330-420 mmol/L
ZA KREATININ - kod enskih osoba 44-97 mikromol/L
- kod mukih osoba 53-106 mikromol/L
ZA MOKRANU KISELINU - kod mukih osoba u serumu 200-400 mikromol/L
- kod enskih osoba u serumu 140 - 340 mikromol/L
- u urinu oko 4,76 mmol/dan
ZA AMONIJAK - kod mukih osoba do 48 mikromol/L
- kod enskih osoba do 38 mikromol/L
ZA BILIRUBIN - ukupni do 20 mikromol/L

ZA URINOBILINOGEN - 0,5 - 5,0 mikromol/24h u urinu

ZA GLUKOZU - 3,4 - 5,5 mmol/L u krvi
ZA KETONSKE SPOJEVE - 1,96 - 4,9 mmol/L u urinu