Đểm các khuẩn lạc điển hình B.

cereus

- Khuẩn lạc B.cereus điển hình trên môi trường thạch MYP: dẹt, đường kính
2 – 3 mm, bờ hình răng cưa, màu đỏ hồng, xung quanh có vùng đục.
- Chọn các đĩa ở hai đậm độ pha loãng liên tiếp, đếm các khuẩn lạc điển hình
ở các đĩa này.

Tăng sinh thuần chủng

- Chọn ít nhất 5 khuẩn lạc điển hình từ đĩa thạch MYP cấy sang môi trường
thạch nghiêng dinh dưỡng.
Ủ ấm 300C/ 24h.

Xác định

- Nhuộm Gram : cấy ria các khuẩn lạc từ ống thạch dinh dưỡng
Nhuộm gram, quan sát dưới kính hiển vi.
- Sau khi thực hiện xong quy trình nhuộm, quan sát màu nhuộm của tế bào
bằng vật kính 100x. B.cereus là trực khuẩn lớn, Gram dương, thường kết
hợp với nhau tạo thành dạng chuỗi. Bào tử hình bầu dục, không có dạng
nang bào tử.
- Thử nghiệm khả năng tan máu: cấy các khuẩn lên môi trường thạch máu. Ủ
ở 300C trong 24 giờ. B. cereus làm tan máu mạnh và tạo vùng tan máu hoàn
toàn (β), đường kính 2-4 mm xung quanh vùng phát triển.

Đọc kết quả

Khuẩn lạc của B. cereus môi trường thạch MYP: dẹt, đường kính 2 – 3 mm,
bờ hình răng cưa, màu đỏ hồng, xung quanh có vùng đục; tan máu β.
 Hình 1: B. cereus trên thạch MYP

Hình 2: Tan máu β của B. cereus

Tính kết quả

- Tính số lượng a của B. cereus đã được khẳng định trên mỗi đĩa, theo công
thức:
b
a =------------------- x c
A
Trong đó:
A: là số lượng khuẩn lạc nghi ngờ mang đi thử TCSVHH
b: số lượng khuẩn lạc dương tính đã khẳng định bằng tcsvhh
c: là tổng số khuẩn lạc nghi ngờ đếm được trên đĩa
- Tính số lượng N B. cereus đã được khẳng định có mặt trong mẫu thử.
Tính số lượng N B. cereus đã được khẳng định có mặt trong mẫu thử, là
trung bình của hai đậm độ pha loãng liên tiếp bằng công thức sau:

∑a
N =----------------------
V (n1+ 0,1 n2) d

Trong đó:
∑a là tổng số khuẩn lạc B. cereus đã được nhận dạng ở các đĩa của 2 đậm độ
pha loãng liên tiếp được giữ lại.
V là thể tích của chất cấy trên mỗi đĩa, tính bằng ml
n1 là số đĩa đã được chọn ở độ pha loãng thứ nhất
n2 là số đĩa đã được chọn ở độ pha loãng thứ hai
d là độ pha loãng tương ứng với dung dịch pha loãng thứ nhất được giữ lại.
- Làm tròn kết quả đã tính đến hai chữ số có nghĩa
- Báo cáo kết quả theo số B. cereus có trong một ml hoặc một gam sản
phẩm, được biểu thị theo số từ 1,0 đến 9,9 nhân 10x, trong đó x là luỹ thừa
tương ứng của 10.