HEMOGLOBINOMETRY.

Dr Ghazi RAMADAN

2021-12-15

Hemoglobin (Hb)

Hb contains two pairs of polypeptide chains α2 β2 and four

haem groups each having an atom of ferrous iron (Fe+2).
Hb is the main component of RBCs and accounts for
approximately 34% of the RBCs by weight.

Iron content of Hb is 0.347 mg/100 g

(Hb)‫الهيموغلوبين‬

‫ وأربع‬α2 β2 ‫يحتوي الهيموغلوبين على زوجين من سالسل عديد الببتيد‬

(Fe + 2).‫مجموعات هيم تحتوي كل منها على ذرة من الحديدوز‬

‫ من‬٪ 34 ‫ هو المكون الرئيسي لكرات الدم الحمراء ويمثل ما يقرب من‬Hb

.‫كرات الدم الحمراء من حيث الوزن‬

‫ جم‬100 / ‫ مجم‬Hb 0.347 ‫محتوى الحديد من‬

Various forms of Hb

i. Oxyhemoglobin (Hb O2)

ii. Carboxy hemoglobin (Hb CO)

iii. Sulfhemoglobin (SHb) iv. Methaemoglobin

‫أشكال مختلفة من الهيموغلوبين‬

(Hb O2)‫ أوكسي هيموغلوبين‬.‫أنا‬

(Hb CO)‫ الهيموغلوبين الكربوكسي‬.‫ثانيا‬

‫ ميثيموجلوبين‬.‫( راب ًعا‬SHb) ‫ سولفيموجلوبين‬.‫ثالثا‬

Variants of Hb Normal: Hb A, Hb F, Hb A2
: HbS, HbC, HbD & HbE

The measurement of concentration of Hb in the blood is

known as HEMOGLOBINOMETRY.

.‫يُعرف قياس تركيز الهيموغلوبين في الدم باسم قياس الهيموغلوبين‬

Samples used for Hb estimation

I. Capillary blood from finger prick

. II. Intravenous sample: It should be well anticoagulated,

preferably in EDTA.

‫العينات المستخدمة لتقدير الهيموغلوبين‬

‫ الدم الشعري من وخز اإلصبع‬. ‫أوال‬
‫ ويفضل أن تكون‬، ‫ يجب أن تكون مانعة للتخثر بشكل جيد‬:‫ العينة في الوريد‬.‫ثانيًا‬
EDTA.‫في‬

Liquid anticoagulants should not be used at all as these dilute

and decrease Hb concentration.

‫يجب عدم استخدام مضادات التخثر السائلة على اإلطالق ألنها تخفف وتقلل من‬
.‫تركيز الهيموجلوبين‬

Indications for Hb Estimation

➢ To determine presence and severity of Anemia.

➢ screening for polycythemia.
➢ To assess the response to a specific therapy in
anemia.
 ➢ Estimation of Red Cell Indices
➢ Selection of blood donor

‫مؤشرات لتقدير الهيموغلوبين‬

.‫لتحديد وجود وشدة فقر الدم‬ •
.‫فحص كثرة الحمر‬ •
.‫لتقييم االستجابة لعالج معين في فقر الدم‬ •
‫تقدير مؤشرات الخاليا الحمراء‬ •
‫اختيار المتبرع بالدم‬ •

Methods of Measurement
➢ Gasometrical Method or Measurement of O2 carrying
capacity of Hb: Measurement of O2 carrying capacity of
Hb cannot be used for mass screening but is used in
referral or research laboratories only.
➢ Chemical Method or Measurement of iron content of Hb:
Measurement of iron content of Hb is used only for
research purpose

‫طرق القياس‬
‫ ال يمكن‬Hb: ‫ لـ‬O2 ‫➢ طريقة قياس الغازات أو قياس القدرة االستيعابية لـ‬
‫ للفحص الشامل ولكن يتم‬Hb ‫ لـ‬O2 ‫استخدام قياس القدرة االستيعابية لـ‬
.‫استخدامه في مختبرات اإلحالة أو البحث فقط‬
‫ يستخدم قياس محتوى‬Hb: ‫➢ الطريقة الكيميائية أو قياس محتوى الحديد من‬
‫ فقط ألغراض البحث‬Hb ‫الحديد من‬

➢ Specific gravity method:

• It is a very rapid method and is useful for screening
blood donors for anemia in blood donation program.
• Normal specific gravity of blood ranges from 1.048-
1.066.
:‫➢ طريقة الثقل النوعي‬
 ‫• •إنها طريقة سريعة للغاية ومفيدة لفحص المتبرعين بالدم لفقر الدم في‬
.‫برنامج التبرع بالدم‬
.1.066-1.048 ‫• •يتراوح الثقل النوعي الطبيعي للدم بين‬

Commonly used methods Sahli’s Method

A Colour Based Method Principle:

➢ Hb is converted into acid hematin with the action of

dilute hydrochloric acid (N/10 HCl).
➢ The acid hematin is brown in colour and its intensity is
matched with a standard brown glass comparator in a
visual colorimeter called Sahli’s colorimeter.

‫الطرق الشائعة االستخدام طريقة السهلي‬

:‫مبدأ أسلوب قائم على اللون‬

‫ إلى حمض الهيماتين بتأثير حمض الهيدروكلوريك المخفف‬Hb ‫➢ يتحول‬

(N / 10 HCl).
‫➢ الهيماتين الحمضي لونه بني وتتطابق شدته مع مقارنة زجاجية بنية‬
.‫قياسية في مقياس ألوان مرئي يسمى مقياس ألوان سهلي‬

Sahli’s Method Procedure

➢ Fill Sahli’s Hb tube up to mark 2 with N/10 HCl.
➢ Deliver 20 μl (0.02 ml) of blood from a Hb pipette into it.
➢ Stir with a stirrer and wait for 10 minutes.
 ‫‪➢ Add distilled water drop by drop and stir till colour‬‬
‫‪matches with the comparator.‬‬
‫‪➢ Take the reading at upper meniscus.‬‬

‫إجراءات طريقة سهل‬

‫امأل أنبوب ‪ Hb‬الخاص بـ ‪ Sahli‬حتى عالمة ‪ 2‬بـ‪N / 10 HCl.‬‬ ‫➢‬
‫أدخل ‪ 20‬ميكرولتر (‪ 0.02‬مل) من الدم من ماصة خضاب الدم إلى داخلها‪.‬‬ ‫➢‬
‫حركي بواسطة محرض وانتظر لمدة ‪ 10‬دقائق‪.‬‬ ‫➢‬
‫أضف الماء المقطر قطرة بقطرة وحركه حتى يتطابق اللون مع المقارنة‪.‬‬ ‫➢‬
‫خذ القراءة من الغضروف المفصلي العلوي‪.‬‬ ‫➢‬

‫‪Equipment: a. Sahli’s Hemaglobinometer consisting of:‬‬

‫‪1. Graduated hemoglobin tube‬‬

‫‪2. Comparator with‬‬

‫‪a brown glass standard‬‬

‫‪b. Hb Pipette‬‬

‫‪c. Stirrer‬‬

‫)‪d. Dropper (dropping pipette‬‬

‫المعدات‪ :‬أ‪ .‬يتكون مقياس هيماتلوبين السهلي من‪:‬‬

‫‪1.‬أنبوب هيموجلوبين متدرج‬

‫‪ 2.‬المقارنة مع‬

‫معيار الزجاج البني‬

‫ب‪ .‬ماصة الهيموجلوبين‬
‫ج‪ .‬التحريك‬
‫د‪ .‬قطارة (إسقاط ماصة)‬
REAGENTS: a. N/10 HCl b. Distilled Water

Specimen: a. EDTA anticoagulated venous blood. b. Blood

obtained by skin puncture

‫ ماء مقطرة‬.‫حمض الهيدروكلوريك ب‬. N / 10 ‫ أ‬:‫الكواشف‬

‫ يتم الحصول على الدم عن‬.‫ ب‬.‫للدم الوريدي المضاد للتخثر‬. EDTA ‫ أ‬:‫العينة‬
‫طريق ثقب الجلد‬
ADVANTAGES:

➢ Simple bedside test.

➢ Reagents and apparatus are cheap.

:‫مزايا‬

.‫➢ اختبار بسيط بجانب السرير‬

.‫➢ الكواشف واألجهزة رخيصة‬

DISADVANTAGES

➢ There can be visual error

➢ Carboxy, met and sulfhemoglobins cannot be converted
to acid hematin.
➢ Comparator can fade over the years.
➢ Colour attainment of acid hematin takes long time and
also fades quickly.
➢ Source of light (day light or artificial) influences the
colour comparison.

‫سلبيات‬
‫➢ يمكن أن يكون هناك خطأ بصري‬
.‫➢ ال يمكن تحويل الكربوكسي والميت والسلفيموغلوبين إلى حمض الهيماتين‬
.‫➢ يمكن للمقارن أن يتالشى بمرور السنين‬
 ‫➢ يستغرق الحصول على لون الهيماتين الحمضي وقتًا طويالً ويتالشى أي ً‬
‫ضا‬
‫بسرعة‪.‬‬
‫➢ يؤثر مصدر الضوء (ضوء النهار أو االصطناعي) على مقارنة األلوان‪.‬‬

‫‪Normal Values of Hb‬‬

‫‪Men 15 ± 2 g/dl Women 13.5 ± 1.5 g/dl Infants 16.5 ± 3 g/dl‬‬

‫‪Critical Values Less than 7 gm/dl- Severe Anemia More than 20‬‬
‫‪gm/dl- Hperviscosity‬‬

‫القيم الطبيعية لـ‪Hb‬‬

‫الرجال ‪ 2 ± 15‬جم ‪ /‬ديسيلتر النساء ‪ 1.5 ± 13.5‬جم ‪ /‬ديسيلتر الرضع ‪± 16.5‬‬

‫‪ 3‬جم ‪ /‬ديسيلتر‬
‫القيم الحرجة أقل من ‪ 7‬جم ‪ /‬ديسيلتر‪ -‬فقر الدم الشديد أكثر من ‪ 20‬جم ‪ /‬ديسيلتر‪-‬‬
‫لزوجة الكبد‬

‫‪Videos‬‬
‫‪https://youtu.be/qMTJ05l855Q‬‬

‫‪https://youtu.be/amJAJeWk0NI‬‬