BIOLÓGIAI MOZGÁSOK

A biológiai mozgás
molekuláris Kollektív mozgás Szervezet mozgása (“Az évszázad ugrása”)

mechanizmusai

Szerv mozgás

BIOLÓGIAI MOZGÁSOK BIOLÓGIAI MOZGÁSOK

Ritmusosan összehúzódó szívizomsejt Osztódó sejt Tovakúszó keratinocita Kemotaxis

Sebgyógyulás modell - fibroblasztok Listeria baktériumok

Axon (neurit) növekedés Mozgó spermatociták
kollektív mozgása intracelluláris mozgása
 A citoszkeletális rendszer Polimerizáció
Alegységek összeállásának folyamata

A polimerizáció fázisai:
1. Lag fázis: nukleáció
2. Növekedés fázisa
3. Equilibrium (egyensúly) fázisa

Polimer
mennyiség Equilibrium

Aktin Vimentin Mikrotubulusok

(rodamin-phalloidin) (anti-vimentin) (GFP-tubulin) Növekedés

Lag Idő
1. Polimerizáció (“okos tégla” egységekből)
2. Mechanika (lásd következő előadás)

Erőkifejtés citoszkeletális filamentum

Polimerizációs egyensúlyok polimerizációjával

1. valódi equilibrium

Brown-féle kilincskerék
mechanizmus
2. dinamikus instabilitás: folyamatos, lassú
növekedést követő katasztrofikus depolimerizáció m

kbe
kki
F

3. Treadmilling: Diffúzió
taposómalom
 Az aktin monomer (G-aktin) Az aktin filamentum (F-aktin)

Az eukarióta sejtekben legnagyobb mennyiségben

előforduló fehérje (az összfehérje 5%-a) nukleotid
Koncentrációja a sejtben: 2-8 mg/ml (50-200 μM) 37 nm
[G-aktin oldat esetére ez 25 nm átlagot molekulák 4 2
közötti távolságot jelent]
“szöges” (+) vég

Alegység: globuláris (G-) aktin

MW: 43 kDa, 375 aminosav,
1 molekula kötött adenozin nukleotid (ATP vagy
ADP) ~7 nm vastag, hossza in vitro több 10 μm, in vivo 1-2 μm “hegyes” (-) vég

Szubdomének (4) 3 Jobbmenetes dupla helix. Szerkezetileg polarizált

Genetikai variabilitás: emlôsökben 6 különböző 1
aktin, három családban (α izomeredetű, β, γ nem- Szerkezeti polarizáció (“szöges”, “hegyes” vég)
izomeredetű)
Aszimmetriás polimerizáció: ATP sapka

ATP sapka

Aktin a sejtben Aktin-függő sejtmozgás

aktin-dús kéreg álláb szubsztrát

aktin polimerizáció és álláb
kitüremkedés
cortex (a sejt pereme)
"stress" rostok,
sejtnyúlványok (lamellipodia, filopodia, nem polimerizált aktin mozgása
microspikes, focal contacts, invagináció) álláb további
retrakció növekedése
mikrovillus
fokális kontaktusok

Stress rostok cortex filopodium

Aktin-függő sejtmozgás megnyilvánulásai Aktin dinamika a lamellipodiumban

Retrográd áramlás Filopodium képződési dinamika

Arp2/3

Citoplaszt (anukleáris sejtfragmentum)

Membrán fodrozódás
autonóm mozgása)

Intracelluláris patogének is Mikrotubuláris rendszer

kihasználják az aktin rendszert Eukarióta sejtek tubulinból
és kapcsolódó fehérjékből álló rendszere.

Listeria monocytogenes intracelluláris motilitása

A mikrotubulusok építőköve: tubulin A mikrotubulus
Alegység: tubulin
Idegszövetben az összfehérje 10-20%-a
MW: ~50 kD: α- és β-tubulin -> heterodimér
1 molekula kötött guanozin nukleotid (GTP vagy GDP);
 kicserélhető (β), illetve nem kicserélhető (α)
Szerkezeti polaritás
Genetikai variabilitás: legalább 6 különböző α illetve β tubulin

~25 nm vastag, üreges

13 protofilamentum
α β jobbmenetes rövidmenetű helix
balmenetes hosszúmenetű helix
Szerkezeti polarizáció:
 +vég: polimerizáció gyors, β-alegység által terminált
 -vég: polimerizáció lassú, α-alegység által terminált
GTP-sapka

Polimerizációs egyensúlyok
mikrotubulusokban Mikrotubuláris rendszer az eukarióta sejtben
Interfázisos sejt

Treadmilling Dinamikus instabilitás

Hol található az eukarióta sejtben?

Ciliáris sejt
interfázisos sejt cytoplasmája, axon, cilium,
flagellum, osztódó sejt húzóorsója.

Polaritás a sejten belül

centrosomában -vég, a periférián +vég. Osztódó sejt
Centrosoma: 2 centriolum, centrosoma matrix,
benne γ-tubulin
Sejt polaritás "fixálása" MT asszociált fehérjék
(capping protein) segítségével.

Idegsejt
 Mikrotubuláris rendszer fukciói Intermedier filamentális rendszer
1. Autópályák motorfehérjék számára
2. Érzékeli, monitorozza és megtalálja a sejt geometriai középpontját 8-10 nm átmérőjű szövetspecifikus, filamentális fehérjerendszer,
3. Motilitási funkciók (sejtosztódás) mely a legtöbb (de nem minden) állati sejtben megtalálható.
Alapvető szerep: mechanikai ellenállás biztosítása

Vimentin, Vic Small

Az intermedier filamentum alegysége: „coiled-coil” dimer

Intermedier filamentum építőkövek Heptád ismétlődés szerkezet, hidrofób aminosavak

Intermedier filamentum dimer:

Farok
Fej 1A 2A
1B 2B

-Kémiailag ellenálló (detergensek, magas ionerősség)

Tulajdonságok:
-Denaturáló szerekkel (pl. urea) extrahálható
-Fibrózus monomer (nem globuláris, mint az aktin vagy tubulin)
 -amino-terminális fej
 -centrális rúd (α-hélix, heptád ismétlődés)
 -carboxy-terminális farok
 -a szövetspecifikus monomérek egymástól a
 végeik szerkezetében különböznek

Vimentin dimer szalagdiagramja Vimentin dimer drótháló diagramja

 Intermedier filamentumok
Intermedier filamentumok csoportosítása polimerizációja
A sejtben teljesen polimerizált állapotban
Szövetspecificitás alapján (nem dinamikus egyensúly)
(Klasszikus csoportosítás)
Centrális rudak (α-hélix)
hidrofób-hidrofób kölcsönhatása
Szövet típus Intermedier filamentum
-> colied-coil dimer

Epithelium Keratinok
2 dimer -> tetramer
(antiparallel elrendeződés,
Izom Dezmin szerkezeti apolaritás)
protofilamentum

Mesenchyma Vimentin Tetramerek longitudinális sorozata

-> protofilamentum
Glialis fibrillaris savanyú fehérje
Glia
(GFAP)
8 protofilamentum -> filamentum filamentum
Neurofilamentum (NF-L, NF-M,
Ideg
NF-H)

Intemedier filamentumok szöveti funkciói Az intermedier filamentumok

Szöveti mechanikai stabilitás biztosítása
dinamikusabbak mint korábban sejtettük

Epiteliális (hám-) sejtekben:

• Pathologia: epidermolysis bullosa simplex. Dinamikus vimentin átrendeződés az élő sejtben
• Mutáció a keratin génben.
• Enyhe mechanikai hatásra (pl. dörzsölés)
fellépő hólyagos hámszétesés.

epidermis bazális sejtréteg

GFP-konjugált Egyedi filamentum

vimentin 3T3 sejtben turnover
lamina basalis defektív citokeratin
filamentum hálózat
hemidezmoszómák
 Prokarióta
citoszkeleton MOTORFEHÉRJÉK
FtsZ: tubulin homológ

• Z-gyűrű fő alkotóeleme
• Citokinezisben fontos szerep
• Dinamikus átrendeződés

1. Specifikus filamentumhoz kapcsolódnak.

MreB: aktin homológ
• Felfedezés szekvencia alapján
• Helikális filamentum a
sejthártya alatt 2. Elmozdulást és erőt generálnak.
• Kromoszóma szegregációban
fontos

3. Kémiai energiát használnak fel.

A motorfehérjék típusai Motorfehérjék munkaciklusa

1. Aktin alapú

δV
 Miozinok: Konvencionális (miozin II) és nem-konvencionális
 Miozin szupercsalád (I-XXIV osztályok). Plusz vég irányába mozognak. δ=munka- vagy lépéstávolság
“Duty ratio”: r= V=ATPáz sebesség
2. Mikrotubulus alapú v v=motilitási sebesség
 a. Dineinek: Ciliáris (flagelláris) és citoplazmáris dineinek. Munkaciklus
 A mikrotubulus mentén a minusz vég irányába mozognak.
 b. Kinezinek: Kinezin szupercsalád: konvencionális és nem-konvencionális.
 A mikrotubulus mentén a plusz vég irányába mozognak. Kapcsolt Processzív motor:  r->1
 c. Dinaminok: MT-függő GTPáz aktivitás
 Biológiai szerep: vakuoláris fehérjeválogatás (pinchase enzimek)?
τon  Pl. kinezin, DNS-, RNS-polimeráz.
 Munkaciklus nagy részében kapcsolt állapotban.
 Egymaga képes a terhét továbbítani.
3. DNS alapú mechanoenzimek
 DNS és RNS polimerázok, vírus kapszid csomagoló motor, kondenzinek
Szétkapcsolt
 A DNS fonal mentén haladnak és fejtenek ki erőt τoff Nonprocesszív motor: r->0
 Pl. miozin.
4. Rotációs motorok  Munkaciklus nagy részében szétkapcsolt állapotban
 F1F0-ATP szintetáz  Sokaság működik együtt.
 Bakteriális flagelláris motor
Egyetlen motorfehérje által kifejtett erő: néhány pN.
5. Mechanoenzim komplexek
Riboszóma
NEM-PROCESSZÍV MOTORFEHÉRJÉK
PROCESSZÍV MOTORFEHÉRJÉK
Miozin
A nem-processzív motorok sokaságban
dolgoznak. Kinezin Miozin V
Lépéstávolság: 8 nm (minden második tubulin
alegység közötti távolság)
Három-gyöngy próba
Mikorogyöngy
elmozdulás

Idő Knight et al, 2001.

Lépéstávolság: ~36 nm nm
(aktin filament hélix félmenet
emelkedés)

200 nm

Szintetikus vastag filamentum

Lépéstávolság: 5,5 nm
AFM felvétel A processzív motorok egyedül dolgoznak.
(szomszédos aktin alegységek közötti távolság)

Dinaminok DNS Motorok

Vakuoláris fehérjeválogatás
GTPázok
Processzív motorok

T7 DNS Polimeráz

“pinchase” funkció
RNS Polimeráz , Wang et al. 1998.
RNS Polimeráz
 Vírus portális motor ROTÁCIÓS MOTOROK I:
Különleges DNS motor F1F0-ATP SZINTETÁZ

20 nM ATP 200 nM ATP

Diszkrét 120˚ rotációs lépések

φ29 bakteriofág portális motor

Kinosita

ROTÁCIÓS MOTOROK II: Mechanoenzim komplex

Bakteriális flagellum motor Riboszóma

•2.7 nm-es lépések

(egy triplett)
•0.078 s
transzlokációs idő
•Transzlokációval
csatolt helikáz
aktivitás

Fordulatszám: > 20000 rpm

Fogyasztás: 10-16 W
Hatásfok: > 80%
Energiaforrás: protonok