M5 Microbiologia Clínica; Pràctiques

Laboratorio UF2: Identificació de fongs, paràsits

Cada alumne ha de preparar les mostres per visualitzar el microscopi

1. Visualització microscòpica de fongs levadurifomes

 Tinció simple de Hannaella luteola y Saccharomyces sp

A. Mostres
- Hannaella luteo  Cultiu sòlid
- Saccharomyces sp  cultiu liquido

B. Materials i reactius
- Encenedor Bunsen
- Portaobjectes
- Pipetes Pasteur
- Nansa de Kolle
- Colorants per a tinció simple (Cristall Violeta, Blau de Metilè o Safranina)
- Oli d’immersió

C. Procediment
- Resuspendre la mostra recollida amb la nansa de kolle en una gota d’aigua o
NaCl sobre un portaobjectes.
- Estendre lleugerament per a obtenir un frotis.
- Assecar la mostra amb la flama del bec Bunsen.
- Aplicar una gota de colorant sobre el frotis i 1 minut.
- Rentar l’excés de colorant amb aigua destil·lada.
- Deixar assecar (sense tornar a passar per la flama per evitar cremar la mostra).
-Observar al microscopi.

2. Visualització microscòpica de fongs filamentosos

 Tècnica d’scotch o cinta adhesiva

A. Mostres
- fongs filamentosos des de fruita, formatge i plaques d'agar

B. Materials i reactius
- Encenedor Bunsen
- Portaobjectes
- Pipetes Pasteur
- Scotch o cinta adhesiva
- Colorants per a tinció simple (Cristall Violeta, Blau de Metilè o Safranina)
 M5 Microbiologia Clínica; Pràctiques

- Oli d’immersió

C. Procediment
- Sobre un porta net i sec dipositarem 2 gotes de colorants
- Tallem un tros de cinta adhesiva i la enganexem als extrems de la nansa estèril (o
pinces esterils).
- Passarem l’extrem de la cinta adhesiva per la mostra
- Enganxarem la cinta adhesiva en el portaobjectes que té el colorant retirant amb
compte la nansa.
- Observarem al microscopi.

3. Visualització microscòpica de paràsits

A. Mostres
- frotis cervic uterí per a la identificacio de Trichomonas vaginalis
 M5 Microbiologia Clínica; Pràctiques

Pràctica 01: Qüestions a resoldre a la llibreta de laboratori per grup:

1. Per a cadascuna de les mostres incorpora una imatge (indicant l'augment utilitzat) o
representació gràfica, descripció i morfològica del que hi veus, tipus de tinció i
colorant emprat.
2. Quin tipus de reproducció tenen els fongs levaduriformes? Els fongs levaduriformes
presentan una estructura asexual, ja sigui, per bipartició o gemmació.
3. De les mostres de fongs filamentosos, quin tipus d'hifes visualitzes? Visualitzem
hifes segmentades.
4. Quines són les estructures formadores d'espores de tipus asexual? pots visualitzar a
les teves mostres? incorpora una imatge. Conidiofors i esporangis. Si, de tipus
esporangi, en la fotografia de la observació del fong a la ceba.

5. Trichomonas vaginalis, a quin tipus de paràsit correspon? quina és la seva

classificació taxonòmica? Pertany a protozou flagel·lat o mastigòfor.
6. Quina és la incidència a espanya de la infecció que genera aquest paràsit? Es de
3.285 casos l’any aproximadament.

1-
Mostra Imatge Augment Descripció Tinció

Saccharomyces 40X Estructures Blau de metile

sp unicel·lulars
particulars dels
llevats.
Observem la
reproducció
asexual per
bipartició.
Formació del
blastoconidi.
 M5 Microbiologia Clínica; Pràctiques

Hannaella luteola 40X Estructures Blau de metile

unicel·lulars
particulars dels
llevats.
Observem la
reproducció
asexual per
bipartició.
Formació del
blastoconidi.

Hongo en Fresa 40X Presencia de Fucsina

hifes septades o
segmentades

Hongo en Cebolla 40X Presenta miceli, Fucsina

hifes
segmentades i
estructures
reproductives
en forma de
esporangis.

Hongo en 40X Presenta hifes Eosina

Naranja mitjançant
aquesta tinció
no es
diferencien si
son septades o
no, veiem
estructures
reproductives
però no es
diferencien
entre
condiofors o
esporangis.

Trichomonas 40X Observem

vaginalis encerlat el
paràsit
trichomonas
vaginalis.
Presenta un
nucleo bien
marcado en el
centro, forma
en hoja
característica
de su
estructura de
trozofoito.