ИЗВЕШТАЈ ЗА ВАЛИДАЦИЈА НА АНАЛИТИЧКИ МЕТОД

Определување на содржина на нафазолин нитрат во НАФАЗОЛИН капки за нос 1mg/mL

1. Спецификациска граница
2. Методолошка постапка/подготовка на примероци
3. Параметри за валидација на метод
3.1 Опсег на метод
3.2 Специфичност/селективност
3.2 Линеарност
3.3 Прецизност
3.4 Точност
3.5 Лимит на детекција / Лимит на квантификација
4. Параметри на соодветност на системот
5. Пресметки
6. Заклучок

1. Спецификациска граница
Параметар Метод Граници
Определување на содржина на UV- спектрофотометрија 95-110% од декларираната содржина
нафазолин нитрат

2. Методолошка постапка/подготовка на примероци

Краток опис на методот и подготовка на растворите (за линеарност)
Се подготвува серија на стандардни раствори со концентрација од 5, 10, 15, 20, 25, 30 mcg/mL.
Апсорбанција на стандардните раствори заедно со слепа проба и пробен раствор се мери на 280nm и тие
резултати се користат за пресметување на содржина на нафазолин нитрат преку конструирање на баждарен
дијаграм.

3. Параметри за валидација на метод

3.1 Опсег на метод
(Да се дефинира опсегот на методот согласно препораките на водичот)
80-120% од работната концентраија.
3.2 Специфичност/селективност
Опис на параметарот:
Специфичноста на методот е определена со мерење на апсорбанција на слепа проба (подготвена на ист
начин како и пробниот раствор од плацебо), стандарден раствор и пробен раствор, подготени на работната
концентрација. Добиените резултати се прикажани во табела 1.

Критериуми за прифатливост:
Специфичноста се потврдува со позитивни резултати од примероци што го содржат аналитот и негативни
резултати од примероци што не го содржат аналитот.

Резултат:
Табела 1. Измерени вредности за апсорбанција на слепа проба, стандарден раствор и пробен раствор
A [AU] A [AU]
Средна вредност (n=3)
0.0001
Слепа проба 0.0003 0.0003
0.0005
0.2505
Стандарден раствор 0.2500
0.2502
0.2577
Пробен
0.2479
раствор
0.2445

Коментар:
- да се дефинира аналитот;
- да се дефинира работната концентрација на аналитот во стандардниот и пробниот раствор;
- да се евалуираат резултатите;
- да се образложи како е потврдена специфичноста на овој метод, врз основа на резултатите во табелата.

3.2 Линеарност
Опис на параметарот:
Критериуми за прифатливост:
Линеарноста на методот се потврдува со потврдување на линеарната зависност на апсорбанцијата од
концентрацијата на аналитот (регресиона анализа, метод на најмали квадрати).

Резултат Линеарноста на методот е определена со мерење на апсорбанцијата на серија на стадардни

раствори (во трипликат) во опсег на концетрација од 5-30 g/mL. Добиените резултати се прикажани во
табела 2.
- табеларен приказ:
Табела 2. Измерени вредности за апсорбанција на серија на стандардни раствори

концентрација A [AU] A [AU]

[g/mL] Средна вредност (n=3)

10

15

20

25

30

- График
- Равенка на права/коефициент на корелација
Коментар:

3.3 Прецизност
Опис на параметарот:
Прецизноста на методот се потврдува со потврдување на рипитабилноста на методот (6 независни
определувања на 100 % од работната концентрација) и интермедиерната прецизност (анализа на
варијабилноста на резултатите што потекнува од различни ефекти: работата на различи аналитичари, работа
во различни денови, работа на различна орпема и слично), како и со потврдување на репродуцибилноста на
методот (интерлабораториски испитувања). За тестот за определување на содржина, се препорачува
RSD ≤ 2,0 %.

- Рипитабилност
- Интермедиерна прецизност
Прецизноста на методот е определена со примена на аналитичкиот метод за да се определи содржина на
аналитот во препаратот НАФАЗОЛИН, 1 ‰, капки за нос. Добиените резултати (6 независни определувања
на 100 % од работната концентрација, од страна на два аналитичари), се прикажани во табела 3.
- Репродуцибилност: /
Критериуми за прифатливост:
Резултат
- табеларен приказ (статистички показател за прецизност):
Табела 3. Определена содржина на нафазолин во Нафазолин 1 mg/ml, капки за нос од 6 последователни
определувања

Аналитичар 1 Аналитичар 2
Содржина на нафазолин нитрат Содржина на нафазолин нитрат
(mg/ml) (mg/ml)
1
2
3
4
5
6
Средна вредност
Стандардна
девијација (S)
RSD (%)

Коментар:
- да се дефинира работната концентрација;
- да се прикаже релативната стандардна девијација и да се евалуираат вредностите.

3.4 Точност
Опис на параметарот:
Точноста на методот е определена со анализа на вештачки смеси спајкувани со познати количества од
компонентите на фармацевтската дозирана форма, на три различни концентрации 80 %, 100 % и 120 % од
работна концентрација. Добиените резултати се прикажани во табела 4.
Критериуми за прифатливост:
Точноста на методот се потврдува со потврдување аналитичкиот принос при примена на предложениот
аналитички метод. За тестот за определување на содржина се препорачува аналитичкиот принос да се движи
во гранците од 98,0 % – 102,0 %.
Резултат (статистички показател за точност):
Табела 4. Определена содржина на нафазолин од три независни определувања на три различни
концентрации

Аналитички принос Средна вредност RSD %

1 101,2 %
80 % од работна
концентрација 2 100,7 %
3 100,9 %
Граници на доверливост
1 100,5 %
100 % од работна
концентрација 2 100,6 %
3 100,9 %
Граници на доверливост
1 100,8 %
120 % од работна
концентрација 2 100,1 %
3 100,0 %
Граници на доверливост

Коментар:
- да се дефинира работната концентрација;
- да се определат концентрациите на активната супстанција на трите дефинирани нивоа (80 %, 100 % и 120
% од работна концентрација)
- да се прикаже средната вредност од аналитичкиот принос на секоја концентрација, RSD% и границите на
доверливост (Excel, Data analysis, Descriptive statistics, Confidence level 95,0 %).

3.5 Лимит на детекција / Лимит на квантификација

Опис на параметрите:
Лимитот на детекција (DL) и лимитот на квантификација (QL) на методот се определуваат од стандардната
девијација на одговорот и нагибот на калибрационата крива, добиена со графичко претставување на
зависноста на измерената апсорбанција на серија на стадардни раствори од концентрацијата.

3 ,3 ∙ σ
DL=
S

10 ∙ σ
DL=
S
Каде што:
σ = стандардна девијација на одговорот
S= нагибот на калибрационата крива
Стандардна девијација на одговорот преставува стандардна девијација на резидуите (Residual standard
deviation), што всушност претставува отстапување на секоја точка (експерментално измерена вреднсот за
апсорбанција) од правата.

Резидуите може да се определат во Excel, Data analysis, Regression Analysis.

Алтернативен начин е со примена на метод на најмали квадрати да се определи Равенка на регресиона права
(y=a+b x).

Од равенката да се определи теоретска вредност за апсорбанцијата за секоја точка:

~
y n =a+b x n

Од разликата помеѓу експерименталната вредност за y и теоретската ~

y n , може да се определат резидуите
(отстапување на секоја точка од правата):
 y−~
yn

Стандардната девијација на овие вредсонти може да се земе во пресметките на лимитот на детекција (DL) и
лимитот на квантификација (QL).

Лимитот на детекција (DL) и лимитот на квантификација (QL) на методот се определени по мерење на

апсорбанција на серија на стадардни раствори во опсег на концетрација од 0,5-30 g/mL. Добиените
резултати се прикажани во табела 5.

Критериуми за прифатливост:

Резултат
Табела 5. Измерени вредности за апсорбанција на серија на стандардни раствори

Коментар:
- да се прикажат вредностите на лимитот на детекција (DL) и лимитот на квантификација (QL) и начинот на
нивно пресметување.

4. Параметри на соодветност на системот

Критериуми за прифатливост:

5. Заклучок

Изработил: Проверил и одобрил: