Xác định và Định lượng Tế bào lympho nhuộm huỳnh quang cao dưới dạng tế

bào tổng hợp/bài tiết kháng thể bằng Máy phân tích huyết học thường quy tự
động XE-2100
Mục tiêu: Mục đích của nghiên cứu này là phân loại và định lượng diện tích tế bào
lympho có huỳnh quang cao (số lượng HFL) từ kênh phân biệt bạch cầu SYSMEX
XE-2100 dưới dạng tế bào tổng hợp hoặc tiết kháng thể (ASC, tế bào plasma hoặc
tế bào lymphoplasmacytoid) trong các bệnh phản ứng . Để xác định rõ ràng các tế
bào HFL, tất cả các quần thể tế bào đủ điều kiện có thể đã được nghiên cứu: tế
bào lympho B hoạt hóa, tế bào lympho T hoạt hóa, tế bào lympho hạt lớn (LGL),
bạch cầu đơn nhân hoạt hóa và bạch cầu hạt chưa trưởng thành.
Phương pháp: Tổng cộng, 85 bệnh nhân được phân tích trên XE-2100 và so sánh
với hệ thống phân tích hình ảnh tự động Cellavision Diffmaster 96 dựa trên mạng
thần kinh nhân tạo và phương pháp tạo mẫu miễn dịch với BD FACSCaliburTM.
Kết quả: Các thử nghiệm về độ tái lập đối với HFL cho thấy hệ số biến thiên trung
bình là 13,9% đối với kết quả rất thấp và 1,5% đối với kết quả cao. Dữ liệu tuyến
tính cho thấy mối tương quan tốt (R2 = 0,99) giữa HFL dự kiến và đo được. Việc so
sánh với các quần thể tế bào có thể đủ điều kiện cho thấy không có mối tương
quan đáng kể giữa bạch cầu đơn nhân đã hoạt hóa và bạch cầu hạt chưa trưởng
thành, với hầu hết các bạch cầu hạt chưa trưởng thành (promyelocyte I hoặc II),
tế bào giết người tự nhiên hoặc LGL, tế bào lympho T đã hoạt hóa và quần thể tế
bào lympho phụ T. Tuy nhiên, đối với các tế bào lympho B đã hoạt hóa, mối tương
quan đáng kể với phết máu ngoại vi và phương pháp xác định kiểu hình miễn dịch
đã được tìm thấy với R2 = 0,900, P < 0,001 và R2 = 0,897, P < 0,001, tương ứng.
Độ dốc 1,1 và điểm chặn âm 5 ô/mL của phương trình hồi quy giữa số lượng HFL
và ASC (mẫu phết) cũng cho thấy số lượng HFL được định lượng rất tốt.
Kết luận: Máy đếm SYSMEX XE-2100 HFL hoàn toàn tự động xác định và định
lượng tế bào ASC (tế bào lympho B đã hoạt hóa) với độ chính xác và độ tin cậy cao
ở những bệnh nhân không mắc các bệnh về hệ thống huyết học, do đó cung cấp
một công cụ sàng lọc và theo dõi tiềm năng cho bất kỳ bệnh nhân nào bị nghi ngờ
nhiễm trùng .
Cần có các nghiên cứu bổ sung để hiểu chi tiết hơn về tiện ích lâm sàng đầy đủ
của số lượng HFL (ASC) như một chỉ số chẩn đoán tiềm năng về tình trạng viêm,
nhiễm trùng hoặc nhiễm trùng huyết.
GIỚI THIỆU
Tế bào học dòng huỳnh quang
XE-2100 (Tập đoàn Sysmex, Kobe, Nhật Bản), một máy phân tích huyết học tự
động, là một hệ thống phân tích tế bào phức tạp hiện đại thực hiện phân tích sự
khác biệt bạch cầu bằng phương pháp nhuộm huỳnh quang kết hợp với cường độ
ánh sáng tán xạ (1). Sự kết hợp giữa phân tán bên (độ phức tạp bên trong của tế
bào), phân tán thuận (kích thước của tế bào) và cường độ huỳnh quang (hàm
lượng RNA) của các tế bào có nhân mô tả cả hình ảnh ngắn gọn và chính xác của
từng tế bào máu ngoại vi được phát hiện.
Phương pháp tế bào học dòng huỳnh quang nâng cao khả năng phân tích vượt xa
sự khác biệt năm phần thông thường bằng cách cung cấp độ phân giải cụm tuyệt
vời và phân tách các tế bào máu bất thường. Số lượng tế bào hồng cầu có nhân và
số lượng bạch cầu hạt chưa trưởng thành (IG) là một phần của phép phân biệt mở
rộng trên XE-2100 với khả năng cải thiện tính hữu ích trong chẩn đoán của phép
phân biệt 5 phần thông thường, có thể được báo cáo trực tiếp cho tất cả các mẫu
được phân tích (1, 2). Bên cạnh IG, có sự phân tách rõ rệt của quần thể tế bào bất
thường với cường độ huỳnh quang cao phía trên vùng bạch cầu đơn nhân và tế
bào lympho. Điều này được sử dụng để gắn cờ các tế bào lympho không điển
hình. Chúng được phát hiện nhờ cường độ huỳnh quang cao đặc trưng, phản ánh
hàm lượng RNA cao.
Trong nghiên cứu hiện tại, người ta chứng minh rằng phương pháp nhuộm RNA
huỳnh quang trên XE-2100 có thể phân loại và định lượng vùng tế bào lympho
không điển hình trong tế bào Blymphocytes đã hoạt hóa, tổng hợp các kháng thể
đặc hiệu nhân bản, tế bào plasma hoặc tế bào lymphoplasmocytoid. Hình 1 hiển
thị sơ đồ phân tán bạch cầu của XE2100 (trái sang phải) từ mẫu bệnh nhân bình
thường, mẫu bệnh nhân chứa IG và mẫu bệnh nhân chứa cả IG và tế bào lympho
huỳnh quang cao (HFL).
Sinh học tế bào
Tế bào plasma hoặc tế bào lymphoplasmacytoid là các tế bào tác động không tăng
sinh, biệt hóa ở giai đoạn cuối của dòng tế bào B và là nhà sản xuất kháng thể duy
nhất.
Do đó, chúng đại diện cho cả hai thành phần của hệ thống miễn dịch thích ứng
của con người, rất quan trọng để đáp ứng miễn dịch hiệu quả trong các bệnh
phản ứng. Chúng hỗ trợ một cách dứt khoát cho phản ứng miễn dịch đầy đủ đối
với mầm bệnh vi khuẩn với độ đặc hiệu và tốc độ cần thiết. Tế bào plasma có thể
được tìm thấy trong tủy xương được gọi là tế bào plasma có tuổi thọ cao; nhưng
chúng hiếm khi được nhìn thấy trong máu ngoại vi của những người khỏe mạnh
bình thường. Vì lý do này, sự hiện diện của tế bào plasma trong mẫu máu bệnh
nhân cho thấy phản ứng miễn dịch do nhiễm trùng. Quá trình tạo tế bào B đang
bắt đầu trong tủy xương. Tế bào gốc tạo máu ban đầu biệt hóa thành các tế bào B
nguyên sơ (Hình 2. Sự phát triển được tiếp tục ở lá lách (3,4). Một số tế bào B, tế
bào B1, phát triển kiểu hình bề mặt tế bào độc đáo và khả năng tự làm mới, chủ
yếu chịu trách nhiệm về sản xuất IgM tự nhiên mà không cần kích thích kháng
nguyên hoặc tế bào T. Chúng cung cấp tuyến phòng thủ kháng thể đầu tiên chống
lại mầm bệnh. Những tế bào tiết hoặc tổng hợp kháng thể (ASC) này chủ yếu
được tìm thấy trong khoang phúc mạc và màng phổi và lớp đệm của ruột (kháng
thể IgA) Chúng không được tìm thấy dưới dạng ASC trong tuần hoàn máu. Một tỷ
lệ tương đối nhỏ các tế bào B thông thường (tế bào B2) vẫn còn ở vùng rìa lách
như các tế bào B vùng rìa không tuần hoàn ngây thơ (4,5).Phần lớn nhất của B2
quần thể tế bào trưởng thành thành các tế bào B dạng nang tồn tại lâu dài và tuần
hoàn liên tục (lách – hạch bạch huyết – tủy xương).
Chức năng tác động của tế bào B đầu tiên để đáp ứng với các kháng nguyên là sự
biệt hóa của tế bào B vùng cận biên thành tế bào plasma. Nếu không có sự tương
tác của tế bào T, các tế bào B vùng cận biên sẽ nhận biết các kháng nguyên một
cách độc lập trong vòng vài giờ sau khi tiêm chủng. Với kháng nguyên độc lập với
tế bào T, chúng di chuyển đến tủy đỏ của lá lách tăng sinh từ nguyên bào tương
đến IgM ASC, không có khả năng chuyển đổi lớp và cư trú qua bạch huyết đi đến
các vị trí xa máu.
Một chức năng tác động khác là khi các tế bào nang B gặp kháng nguyên và nhận
được sự trợ giúp của tế bào T. Sự trợ giúp của tế bào T cho tế bào B xảy ra trong
các mô bạch huyết thứ cấp cung cấp môi trường vi mô lý tưởng cho tế bào T và tế
bào B tương tác với nhau và với các loại tế bào khác như tế bào đuôi gai (DC)
(4,6–8). Ở đây, tế bào B hình thành các liên hợp động với tế bào T, nhận sự trợ
giúp của tế bào T cùng nguồn gốc và biệt hóa theo một trong hai con đường có
thể (9): (a) con đường ngoại bào tạo ra các tế bào plasma có thời gian tồn tại ngắn
và (b) con đường nang trứng hình thành các trung tâm mầm bệnh. Trong con
đường ngoài nang, các tế bào B đặc hiệu với kháng nguyên di chuyển đến tủy đỏ
của lá lách hoặc vào các hạch bạch huyết, sau đó đến các tủy và biệt hóa thành
IgM ASC tồn tại trong thời gian ngắn, không có khả năng chuyển lớp. (tuần đầu
tiên). Trong con đường nang trứng, một số lượng nhỏ tế bào B đặc hiệu với kháng
nguyên (plasma-blast) gieo mầm vào các nang trứng để hình thành các trung tâm
mầm trong đó các tế bào B có trí nhớ ái lực cao và khả năng chuyển đổi lớp, tồn
tại lâu dài (IgG, IgA hoặc IgE) ASC phát triển (tuần thứ hai).
Đặc biệt, IgM ASC từ con đường ngoại bào (kích thích tế bào B vùng kháng nguyên
độc lập và kích thích tế bào B nang kháng nguyên phụ thuộc) có thể lưu thông qua
bạch huyết đi vào máu để cư trú ở các vị trí ở xa (9,10).
Nồng độ và tỷ lệ ASC trong máu ngoại vi có thể hữu ích cho chẩn đoán lâm sàng
và theo dõi điều trị ở nhiều bệnh. ASC—được đo bằng HFL từ máy phân tích huyết
học thông thường—có thể cung cấp thông tin có giá trị về giai đoạn của bệnh
truyền nhiễm trong đó giai đoạn cấp tính được đặc trưng bởi sự tăng bạch cầu
hạt bạch cầu trung tính và IG và giai đoạn chữa lành được đặc trưng bởi ASC tăng
cao hoặc để phân biệt giữa giai đoạn cấp tính phản ứng với nhiễm trùng hoặc
viêm (viêm không có ASC). Ở bệnh nhân nhiễm trùng huyết, ASC có thể cung cấp
thông tin có giá trị trong việc phân biệt giữa tình trạng viêm quá mức và tê liệt
miễn dịch hoặc để phân biệt giữa phản ứng kháng nguyên độc lập với tế bào T
nhanh và phản ứng kháng nguyên phụ thuộc tế bào T chậm hơn. Hơn nữa, ASC
cũng thường được phát hiện dưới dạng tế bào plasma trong u tủy/u tế bào
tương, u lympho bào tương bào (u tế bào miễn dịch, Morbus Waledenstro¨m) và
trong u lympho tế bào B lớn lan tỏa (u nguyên bào miễn dịch). Theo đó, việc đếm
và phân loại ASC trong tế bào plasma hoặc tế bào lymphoplasmacytoid có thể hữu
ích trong việc phát hiện và theo dõi các bệnh ác tính như vậy.
Việc liệt kê ASC thường được thực hiện bằng hình thái màng máu ngoại vi dưới
kính hiển vi quang học. Tuy nhiên, phương pháp thủ công này tốn nhiều công sức
cũng như không chính xác do số lượng tế bào được đếm thấp và tính biến đổi
giữa các máy chủ. Số phần trăm ASC nhỏ, tức là trong phản ứng giai đoạn cấp tính
bạch cầu trung tính, thường bị bỏ sót trong số lượng vi sai 100 tế bào tiêu chuẩn.
Phương pháp tế bào học dòng chảy với kháng thể đơn dòng không phù hợp làm
xét nghiệm sàng lọc. Quy trình này không được tự động hóa. Nó đắt tiền và tốn
thời gian.
Nghiên cứu này so sánh số lượng HFL trên XE-2100 với phương pháp tế bào học
dòng chảy kiểu hình miễn dịch và hệ thống phân tích hình ảnh tự động 400 tế bào
kỹ thuật số với phân loại trước. Hiệu suất cơ bản về độ tái lập và độ tuyến tính
cũng đã được thực hiện cho bộ đếm XE2100 HFL.
NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Mẫu máu
Tất cả các mẫu máu đều là mẫu bệnh nhân thông thường được chống đông bằng
K3EDTA. Tất cả các mẫu đều được xác minh hồi cứu và đảm bảo rằng tất cả các
mẫu bệnh nhân đều là của những bệnh nhân không mắc các bệnh về hệ thống
huyết học (AML, ALL, NHL). Tổng cộng, 85 mẫu bệnh nhân đã được xử lý trên XE-
2100 mà không cần chuẩn bị gì và ngay lập tức
Sau khi lấy mẫu, hai màng máu riêng biệt được chuẩn bị bằng máy nhuộm và
chuẩn bị tiêu bản SYSMEX tự động SP-100, sử dụng máy nhuộm May Gru¨nwald
Giemsa. Sau đó, việc đếm chênh lệch bạch cầu 2 200 tế bào thủ công được thực
hiện bằng hệ thống phân tích hình ảnh tự động Cellavision Diffmaster (DM96)
(11). Các mẫu tương tự được phân tích sâu hơn bằng BD FACSCaliburTM sau khi
nhuộm máu toàn phần bằng cách sử dụng kháng thể đơn dòng. Hai mươi bệnh
nhân có số lượng HFL âm tính (HFL = 0/mL máu) và 65 bệnh nhân có số lượng HFL
dương tính lên tới 600 tế bào/mL (0,2–10% tổng số lượng bạch cầu).
Các mẫu bệnh phẩm từ bệnh nhân mắc bệnh về hệ thống huyết học (AML, ALL,
NHL) nói chung hiển thị với cờ nổ," đồng thời ngăn chặn cờ tế bào lympho không
điển hình" kèm theo dấu hiệu cho thấy số lượng HFL không đáng tin cậy (dân số
có màu xám và không được tự động hóa). có thể phân cụm theo hệ thống). Do
đó, những mẫu được đánh dấu rõ ràng như vậy phải bị loại khỏi nghiên cứu.
Nguyên lý đếm HFL bằng Máy phân tích huyết học XE-2100 HFL và các thông số
phân biệt bạch cầu được đo bằng XE-2100. HFL được phân biệt với quần thể tế
bào lympho bởi cường độ huỳnh quang cao và cường độ tán xạ phía thấp trong
kênh phân biệt bạch cầu XE-2100 (Hình 1). Sau khi ly giải hồng cầu và chuẩn bị
bạch cầu, huỳnh quang
thuốc nhuộm polymethine phản ứng với axit ribonucleic của bạch cầu, và thiết bị
đếm tế bào dòng chảy sẽ phát hiện và phân loại các tế bào tương ứng bằng phân
tán bên và phát huỳnh quang bên. Chúng được báo cáo dưới dạng phần trăm của
tổng số bạch cầu và dưới dạng số lượng tuyệt đối trong màn hình nghiên cứu
dưới dạng tham số nghiên cứu “OTHERS."
Đếm vi sai thủ công với hệ thống phân tích hình ảnh tự động DM96
Số lượng bạch cầu 400 tế bào theo NCCLS (11) được thực hiện bằng hệ thống
phân tích hình ảnh tự động được tiêu chuẩn hóa DM96 với tính năng phân loại
trước (từ CellaVision AB, Thụy Điển) (12). Sau khi phân loại trước tự động các
bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân, tế bào lympho, bạch cầu ái toan và bạch
cầu ái kiềm được phân đoạn, các tế bào bạch cầu được phân loại thủ công (Hình
3) trong IG (metamyelocytes, myelocytes và promyelocytes I và II), bạch cầu đơn
nhân hoạt hóa (đại thực bào), tế bào giết người tự nhiên (Tế bào NK, tế bào
lympho dạng hạt lớn), tế bào lympho T đã hoạt hóa (tế bào lympho T gây độc tế
bào, tế bào hướng động hóa học (13) [thay đổi hình dạng], tế bào giống blast
basophilic lớn [tế bào miễn dịch]) và tế bào lympho B đã hoạt hóa (tế bào huyết
tương và tế bào lympho tế bào) (14,15). Phân tích kiểu hình miễn dịch bằng phép
đo tế bào dòng chảy với BD FACSCalibur
Phân tích tế bào học dòng chảy được thực hiện trên hệ thống BD FACSCalibur. Tín
hiệu FSC, SSC và huỳnh quang bốn màu được xác định cho từng ô và được lưu trữ
trong tệp dữ liệu listmode ở định dạng FCS 2.0. Các tệp dữ liệu được thu thập và
phân tích bằng quy trình chọn nhiều ống và nhiều bước bằng phần mềm BD
MultiSETTM 1.1.2, BD CellQuest Proa 4.0.2 và BD DIVATM 4.1.2.
Trong ống đầu tiên, tổng số bạch cầu được phân biệt thành bạch cầu trung tính,
bạch cầu đơn nhân, bạch cầu lympho, bạch cầu ái toan và bạch cầu ái kiềm bằng
cách sử dụng SSC, FSC-H, HLA-DR FITC, CD123 PE, CD45 PerCP-Cy5.5 và CD14 APC
Bạch cầu đơn nhân được định nghĩa là CD14high/SSCint, tế bào lympho được
định nghĩa là bạch cầu đơn nhân CD45high/SSClow/NOT, bạch cầu ưa kiềm được
định nghĩa là CD123high/anti-HLA DRneg, bạch cầu ái toan được định nghĩa là các
tế bào có huỳnh quang tán xạ phía cao và huỳnh quang tự động cao xuất hiện
dưới dạng trung gian FL1-FL4 cao (SSChigh/FL1-FL4int) và bạch cầu trung tính
được định nghĩa là SSCint-high/NOT (tế bào lympho HOẶC bạch cầu đơn nhân
HOẶC bạch cầu ái kiềm HOẶC bạch cầu ái toan) (Hình 4).
Trong ống thứ hai và ống thứ ba, tổng số tế bào lympho được biệt hóa thành tế
bào lympho B, tế bào lympho T và tế bào lympho NK bằng cách sử dụng Bộ công
cụ IMK Multiset BD (16). Một ống được sử dụng để xác định các quần thể tế bào
lympho T (tế bào lympho T trợ giúp và tế bào lympho ức chế T) với CD3 FITC, CD8
PE, CD45 PerCP và CD4 APC. Ống thứ hai được sử dụng để phân biệt tế bào
lympho B, tế bào lympho T, tế bào lympho T gây độc tế bào (CTL) và tế bào
lympho NK với CD3 FITC, CD16 þ 56 PE, CD45 PerCP và CD19 APC, theo sự chuẩn
bị và điều trị của nhà sản xuất. hướng dẫn phân tích. Trong ống thứ tư, tổng số tế
bào lympho được biệt hóa thành tổng số tế bào lympho B, tế bào lympho B
SSChigh và SSClow, IgM tế bào chất (cyIgM) và tế bào plasma CD138 (17) bằng
cách nhuộm bề mặt và nội bào của CD138 FITC, antiIgM PE, CD45 PerCP Cy5.5 và
CD14 APC (để loại trừ sự nhiễm bẩn bạch cầu đơn nhân ở cổng tế bào lympho).
Tỷ lệ phần trăm của tất cả các loại tế bào được tính bằng tỷ lệ của tất cả các sự
kiện bạch cầu. Số lượng tuyệt đối của tất cả các loại tế bào trên mỗi mL máu được
tính từ tổng số lượng bạch cầu của XE-2100.
Phân tích thống kê
Phân tích hồi quy tuyến tính và hệ số tương quan thời điểm sản phẩm Pearson
được thực hiện với phần mềm thống kê SigmaStat cho Windows phiên bản 2.03.
Các mối tương quan có ý nghĩa thống kê được xác định ở mức P <0, 05.
KẾT QUẢ
Khả năng tái tạo số lượng HFL
Độ tái lập được định lượng bằng cách thực hiện 10 phép đo liên tiếp trên hai mẫu
máu khác nhau. Các mẫu được chọn lần lượt có giá trị cao và thấp. Các hệ số biến
thiên (CV) cho thấy kết quả tốt cho cả hai mẫu (Bảng 1).

Độ tuyến tính của số lượng HFL

Một mẫu có số lượng HFL cao (590/mL) đã được pha loãng với dung dịch muối
đệm phốt phát ở các mức 100, 80, 50, 20, 10 và 5%. Dữ liệu tuyến tính cho thấy
mối tương quan tốt giữa giá trị HFL dự kiến và đo được cho tất cả các bước pha
loãng (Biểu đồ 1).
So sánh Sự khác biệt của XE-2100 với Phép đo tế bào dòng chảy kiểu hình miễn
dịch và Số lượng tham chiếu thủ công
Bảng 2 hiển thị các hệ số tương quan và độ dốc từ số lượng chênh lệch năm phần
giữa XE-2100, FACSCalibur và DM96 từ tất cả 85 bệnh nhân.
BIỂU ĐỒ 2. Hồi quy tuyến tính giữa số lượng tế bào lympho tuyệt đối trên XE-
2100 và BD FACSCalibur. Đường liền nét biểu thị đường hồi quy, đường đứt nét
biểu thị khoảng dự đoán và khoảng tin cậy.
Mối tương quan với phương pháp tế bào học dòng chảy và phân biệt thủ công là
tốt cho tất cả các quần thể tế bào, ngoại trừ số lượng basophil từ phương pháp
thủ công. Việc đếm basophil thủ công thể hiện tính ưu việt về độ chính xác của
việc đếm tự động so với phương pháp thủ công (18). Mối tương quan về
basophils giữa XE-2100 và BD FACSCalibur cho kết quả tốt (R2 ¼ 0,651). Mối
tương quan về basophils giữa XE-2100 và phương pháp thủ công, và giữa BD
FACSCalibur và phương pháp thủ công dẫn đến R2 ¼ 0,324 và R2 ¼ 0,442, tương
ứng.
Biểu đồ 2 cho thấy mối tương quan tuyệt vời giữa tổng số lượng tế bào lympho
tuyệt đối trên XE-2100 (với quần thể HFL) và số lượng tế bào lympho tuyệt đối
trên BD FACSCalibur
Xác định và định lượng khu vực HFL
Để xác định rõ ràng các tế bào HFL, tổng cộng 85 bệnh nhân đã được nghiên cứu
về tất cả các quần thể tế bào có thể đủ điều kiện bằng cách so sánh số lượng HFL
với phương pháp đo tế bào dòng chảy kiểu hình miễn dịch trên BD FACSCalibur và
hệ thống phân tích hình ảnh tự động hóa 400 tế bào kỹ thuật số DM96. Quần thể
tế bào được phân tích là quần thể tế bào không phải tế bào lympho; các tế bào
đơn nhân được kích hoạt (đại thực bào) và IG (siêu tủy – tế bào tủy – tế bào tiền
tủy I và II) và tiểu quần thể tế bào lympho; tế bào NK (tế bào lympho hạt lớn), tế
bào lympho T được kích hoạt và tế bào lympho B được kích hoạt.
So sánh số lượng HFL XE-2100 với bạch cầu đơn nhân được kích hoạt và IG từ hệ
thống phân tích hình ảnh tự động vi mô thủ công DM96. Các mẫu máu ngoại vi
được phân tích trên thiết bị XE-2100 và được so sánh với phết máu ngoại vi, sau
đó được phân tích trên DM96 với phân loại trước (vi sai 5 phần). Các tế bào đơn
nhân được phân biệt thủ công hơn nữa ở các tế bào đơn nhân không hoạt động
và đã hoạt hóa, được đặc trưng là các tế bào đơn nhân có không bào và thay đổi
hình dạng như cái gọi là đại thực bào. IG được phân loại thủ công trong các tế bào
metamyelocytes, myelocytes và pomyelocytes. Hồi quy tuyến tính được hiển thị
trong Bảng 3 cho thấy không có mối tương quan có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) (R2
= 0,002) giữa HFL và bạch cầu đơn nhân được kích hoạt. Ngoài ra, tổng IG hoặc
các tế bào tiền tủy bị cô lập cho thấy không có mối tương quan với số lượng HFL.
(R2 ¼ 0,031, P > 0,05 tương ứng. R2 ¼ 0,007, P > 0,05).
So sánh số lượng XE-2100 HFL với các quần thể tế bào lympho khác nhau được
phân tích bằng hệ thống phân tích hình ảnh tự động DM96 và phương pháp đo tế
bào dòng chảy kiểu hình miễn dịch trên BD FACSCalibur. Các mẫu máu ngoại vi đã
được phân tích trên thiết bị XE-2100 và số lượng HFL được so sánh với các quần
thể tế bào lympho khác nhau được phân tích trên phết máu ngoại vi và phương
pháp đo tế bào dòng chảy kiểu hình miễn dịch trên BD FACSCalibur: tế bào
lympho NK, tế bào lympho T, và tế bào lympho B (Bảng 4).
Tế bào lympho NK được phân loại dưới kính hiển vi là tế bào lympho hạt lớn (LGL)
và kiểu hình miễn dịch là tế bào CD16þ þ CD56þ và CD3.
Tế bào lympho T được biệt hóa bằng kính hiển vi trong các tế bào lympho T đã
hoạt hóa - được định nghĩa là các tế bào lympho lớn (trừ tế bào plasma) với tế
bào chất màu xanh xám dồi dào hoặc với các hạt azurophilic (CTL) hoặc với sự
nhuộm màu cơ bản tăng lên ở ngoại vi tế bào chất với nhiễm sắc thể và nucleoli
lỏng lẻo (Tế bào miễn dịch ) và tế bào lympho có hóa ứng động (thay đổi hình
dạng). Về mặt miễn dịch, tế bào lympho T được phân loại thành CD4þ (tế bào trợ
giúp) và CD8þ (tế bào ức chế) và CTL là tế bào CD16þ, CD56þ và CD3þ.
Tế bào lympho B được phân loại dưới kính hiển vi trong tế bào lympho B đã hoạt
hóa—được định nghĩa là tế bào plasma hoặc tế bào lymphoplasmacytoid, cả hai
đều là ASC. Về mặt miễn dịch, tế bào Blymphocytes được phân loại là tế bào
lympho B đã hoạt hóa, với CD19þ, SSChigh, tăng cyIgM và CD138þ.
Hồi quy tuyến tính giữa HFL, DM96 và BD FACSCalibur đối với các quần thể tế bào
lympho Tế bào NK, tế bào lympho T và tế bào lympho B được hiển thị trong Bảng
4.
Các tế bào NK của quần thể tế bào lympho cho thấy không có mối tương quan có
ý nghĩa thống kê với số lượng HFL. Tổng số tế bào NK được xác định trên
FACSCalibur (tế bào CD16þ þ CD56þ và CD3) dẫn đến mối tương quan R2 ¼ 0,005
và P > 0,05. LGL, được xác định về mặt hình thái là các tế bào NK hoạt động, cũng
không cho thấy mối tương quan đáng kể nào (R2 = 0,002, P > 0,05). Đúng như dự
đoán, các tế bào LGL từ phết máu ngoại vi mang lại mối tương quan kém nhưng
đáng kể (R2 = 0,314, P < 0,001) với tổng số tế bào NK trên FACSCalibur.
Các quần thể tế bào lympho T cho thấy không có mối tương quan có ý nghĩa
thống kê với số lượng HFL, ngoại trừ mối tương quan có ý nghĩa kém đối với tế
bào CD4 (R2 = 0,053, P = 0,041). Tổng số tế bào lympho T, chất ức chế T (CD8) và
CTL lần lượt mang lại các giá trị R2 ¼ 0,046, R2 ¼ 0,011 và R2 ¼ 0,026, tất cả đều
có giá trị P > 0,05. Các tế bào lympho T đã hoạt hóa được xác định trong phết máu
ngoại vi là CTL, các tế bào hiển thị hóa hướng và các tế bào bạch huyết lớn (không
bao gồm tế bào plasma). Các mối tương quan tương ứng cho thấy các giá trị lần
lượt là R2 ¼ 0,032, R2 ¼ 0,067 và R2 ¼ 0,000, tất cả đều có giá trị P > 0,05. Đúng
như dự kiến, các tế bào CTL từ phết máu ngoại vi mang lại mối tương quan đáng
kể (R2 ¼ 0,494, P < 0,001) với các tế bào CTL CD16þ, CD56þ và CD3þ. Tổng số tế
bào CD8þ cho thấy mối tương quan tuyệt vời và đáng kể (R2 = 0,814, P < 0,001)
với tổng số lượng tế bào lympho T đã hoạt hóa (CTL, các tế bào hiển thị hóa
hướng động và các tế bào bạch huyết lớn) từ phết máu ngoại vi.
Các tế bào lympho B đã hoạt hóa được xác định trong phết máu ngoại vi là các tế
bào plasma cộng với các tế bào lymphoplasmacytoid và ASC được định nghĩa là
CD19þ, SSChigh, sự gia tăng cyIgM và CD138þ dẫn đến mối tương quan tuyệt vời
với mỗi loại HFL. Các hệ số tương quan lần lượt là R2 ¼ 0,809 (với P < 0,001) và R2
¼ 0,804 (với P < 0,001). Mối tương quan giữa HFL chỉ với tế bào plasma (loại được
xác định về mặt hình thái) là tốt với R2 = 0,796. Tuy nhiên, sự kết hợp của cả hai
(như đã trình bày trước đó) dưới dạng ASC hoặc tế bào lympho B được kích hoạt
cho thấy mối tương quan thuyết phục nhất.