Zasejavanje

• Prenosenje bioloskog materijala na hranljivu podlogu

• Zasejavamo ezama (omcaste, ubodne,…), stapicem, brisem,…
Tehnike zasejavanja
1. Zmijoliko
-primokultura (mesana kultura)
-izraste kultura (kultura je sve sto
izraste na hranljivoj podlozi)
*kolonija – jedna formacija koja je
nastala od jedne bakterijske vrste
2. Metod razredjenja

-subkultura (cista kultura)

-pikiramo koloniju iz prethodne
podloge I presejavamo na novu
podlogu
-cilj je da izvrsimo krajnju
identifikaciju bakterije
3. Kombinovani metod
4. Gusto zasejavanje (pravimo mrezicu)
Zasejavanje biohemijske serije (sareni niz
secera)
A) trostruki secer

-zmijolikim pokretima idemo po

povrsini
B) manit
C) Peptonska voda
D) Urea
E) Citrat
Antibiogram
• Podrazumeva ispitivanje osetljivosti mikroorganizama prema antibioticima.
• Za testiranje postoje dve metode:
1. Difuzioni disk metod
2. Dilucioni
- u praksi – difuzioni disk metod (jeftiniji)
Podloga koju zasejavamo zove se Muller Hinton (zute boje), ako se radi o probiracim
dodajemo 5-10% ovcije ili govedje krvi
Kada zasejemo (gusto) podloga ostaje 10-15 min na sobnoj temperaturi, a zatim sterilnom
pincetom stavljamo tablete ili diskove.
6-8 antibiotika, do 12 diskova
Tablete su veceg promera, mogu biti razlicito obojene ili da imaju pocetno slovo
odredjenog antibiotika
• Inkubiramo posle zasejavanja u
termostatu I citamo rezultat
• Ocitavanje rezultate se vrsi na osnovu
zone inhibicije

• S>23 – senzitivno
• I 20-22 – intermedijerno
• R<19 – rezistentno
Dilucioni metod
• Postoje dve varijante: agar- dilucioni; bujon – dilucioni (cesci)
• Dilucioni metod je skup za izvodjenje I cesce se koristi u
eksperimentalnim lab.
• U epruvetama sa hranljivim bujonom napravi se niz razblazenja
(serijski, tako da svaka sledeca epruveta ima duplo manju
koncentraciju antibiotika, a zatim se u njih doda ista kolicina
ispitivanih bakterija
• Koncentracija antibiotika u prvoj epruveti u kojoj nema zamucenja
(nema porasta bakt) odgovara minimalnoj inhibitornoj koncentraciji
(MIK)
• Za odredjivanje minimalne baktericidne konc, vrsi se presejavanje iz
preostalih epruveta bez zamucenja I prva sa zamucenjem na cvrstu
hranljivu podlogu pa nakon inkubacije se trazi porast kolonija.
• Prvi izostanak kolonija odgovara minimalnoj baktericidnoj
koncentraciji (MBK)
• Odnos MBK I MIK je znacajan parametar osetljivosti bakterijskog soja.
Visoko tolerantnim sojevima oznacavaju se oni kod kojih je ovaj odnos
veci od 32.
Epsilon test
• Izvodi se na cvrstoj podlozi I zasniva se na difuziji antibiotika kroz
medijum
• Za izvodjenje se koriste posebne komercijalno dostupne trake koje
sadrze neravnomerno impregniran antibiotik cija koncentracija
eksponencijalno opada duz trake
• Nakon inkubacije je uocljiva elipsoidna zona inhibicije rasta, a
minimalna inhibitorna koncentracija (MIK) se ocitava sa skale u
preseku uzeg segmenta zone I same trake