‫الدرس الرابع‬

‫أمثلة على أوساط زرع الجراثيم ‪culture media‬‬

‫وكيفية الزرع ‪culture technique‬‬
 ‫وسط زرع الجراثيم ‪Culture Media‬‬
‫يحوي على مواد مغذية عقيمة (أمالح معدنية‪ ,‬غلوكوز ‪ ,‬مصدر‬
‫كربون‪ ,‬مصدر نيتروجين ) تسمح للجراثيم بالنمو والتكاثر‪.‬‬
‫(يؤمن كافة متطلبات الجرثوم الكيمائية الحيوية والفيزيائية)‬
‫الغاية من استخدام أوساط الزرع الجرثومي‬

‫‪ ‬تنمية وحفظ النوع الجرثومي‬

‫‪ ‬دراسة صفات الجراثيم على األوساط وتصنيفها‬
‫‪ ‬دراسة تأثير الجراثيم على أحد مكونات الوسط‬
‫‪ ‬حث الجرثوم على إنتاج أو تكوين بعض المواد‬
 ‫تقسم أوساط الزرع الجرثومي حسب الغرض منها إلى ‪:‬‬

‫‪ - 1‬أوساط مغذية ‪: Nutrient media‬تحوي على مواد غذائية‬

‫ضرورية لنمو وتكاثر الجراثيم مثال ‪ :‬ماء البيبتون والمرق المغذي‬
‫والغراء المغذي‬
‫‪ - 2‬أوساط مغذية غنية ‪: Enrichment media‬هي أوساط‬
‫مغذية مضاف إليها مواد مغذية إضافية خاصة مثال ‪ :‬وسط الغراء‬
‫المدمى‬
 ‫‪-3‬أوساط مغذية انتخابية ‪ : Selective media‬هي أوساط مغذية‬
‫مضاف إليها مواد معينة مثل بعض الصادات أو األصبغة أوتغير‬
‫درجة الحموضة أو الملوحة بهدف تثبيط نموبعض أنواع الجراثيم‬
‫مثل وسط ماكونكي ( ‪) MacConkey media‬‬
‫‪ - 4‬أوساط مغذية تفريقية ‪:Differential media‬هي أوساط مغذية‬
‫مضاف إليها مواد معينة مثل السكاكر بهدف التفريق بين األنواع‬
‫الجرثومية النامية مثل وسط ( ‪) E.M.B‬‬
‫‪ - 5‬أوساط مغذية خاصة ‪ Specific media‬بنوع أوعدة أنواع من‬
‫الجراثيم مثل وسط لوفنشتاين جنسن )‪)Lowenstien-jensen‬‬
‫‪ - 6‬أوساط تساعد على تحديد الصفات الكيميائية للجراثيم ‪Media for‬‬
‫‪characterization of bacteria‬‬
‫(معرفة المجموعة األنزيمية للجرثوم بدراسة استقالبها للسكاكر‬
‫والشحوم والبروتينات )‬
‫إعداد األوساط الغذائية‬
‫‪ -‬وزن الكمية الالزمة من البودرة الخاصة بالوسط‬ ‫‪1‬‬
‫‪ - 2‬إضافة الكمية الالزمة من الماء المقطر مع المزج‬
‫‪ - 3‬التسخين مع المزج حتى الحل الكامل للبودرة‬
‫‪ - 4‬صب الوسط في األواني الخاصة لتعقيمها بالصاد الموصد‬

‫‪4‬‬ ‫‪3‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪1‬‬

‫تقسم أوساط الزرع حسب قوامها إلى ‪:‬‬

‫‪-1‬أوساط سائلة (المرق المغذي)‬

‫‪ -2‬أوساط صلبة (الغراء المغذي)‬
 ‫المرق المغذي‬
‫‪Nutrient Broth‬‬
‫‪ ‬يتألف من ‪ :‬خالصة لحم البقر والببتون (‪ )%2-1‬وملح الطعام‬
‫(‪) %0,5‬‬
‫‪ ‬يتصف المرق العقيم بلونه األصفر والرائق‬
‫‪ ‬صفات المرق بعد الزرع ‪ :‬يظهر فيه راسب أو عكر أو طهاوة‬
‫أو رائحة أوتموجات حريرية وقد يتغير لونه ‪.‬‬
‫‪ ‬وهواألساس الذي تتركب منه األوساط الزرعية األخرى‬
‫‪ ‬وهو وسط منمي عام‬
 ‫المرق المغذي‬
‫‪Nutrient Broth‬‬
‫قبل الزرع‬

‫بعد الزرع‬ ‫قبل الزرع‬

 ‫الغراء المغذي‬
‫‪Nutrient Agar‬‬

‫‪ ‬يتركب الغراء المغذي من المرق المغذي‪ +‬إشنة اآلغار‬

‫بنسبة ‪15‬باأللف‪.‬‬
‫‪ ‬صفات الغراء العقيم ‪:‬هالمي أصفر اللون ذو قوام صلب في درجة‬
‫حرارة دون ‪ 40‬مئوية ويبدأ بالتميع فوق الدرجة ‪،40‬ذو سطح أملس‬
‫متجانس ‪.‬‬
‫‪ ‬وهو وسط منمي عام‬
‫‪ ‬صفات الغراء بعد الزرع ‪ :‬تظهر الجراثيم على شكل مستعمرات دائرية‬
‫منتظمة أو غير منتظمة ذات قطر ولون محدد وقد تكون محدبة‬
‫أومسطحة لماعة أو كامدة أو مخاطية أو منتشرة أومشرشرة الحواف‬
‫أو ذات رائحة خاصة ‪....‬‬
 ‫الغراء المغذي‬
‫‪Nutrient Agar‬‬

‫طبق بتري عقيم‬ ‫طبق بتري بعد الزرع‬

 ‫الغراء المدمى‬
‫‪Blood Agar‬‬
‫نحصل عليه بإضافة الدم منزوع الليفين إلى الغراء المغذي بنسبة‬ ‫‪‬‬
‫‪ %5‬بدرجة حرارة ‪ 50-45‬درجة مئوية‪.‬‬
‫لونه أحمر قاني‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫وهو وسط مغذي غني ومنمي عام يقدم إمكانية أفضل لنمو الجراثيم‬ ‫‪‬‬
‫وهو وسط تفريقي بصفة حل الجراثيم للدم ( أنواع جرثومية تحل‬ ‫‪‬‬
‫الدم حالً كامالً أو جزئيا ً أو ال تحله )‬
 ‫الغراء الشوكوالتي‬
‫‪Chocolate Agar‬‬
‫‪ ‬نحصل عليه بإضافة الدم إلى الغراء المغذي بنسبة ‪ %5‬بدرجة‬
‫حرارة ‪ 80‬درجة مئوية‬
‫‪ ( ‬وهو وسط مغذي غني ) لونه بني غامق ‪.‬‬
‫‪ ‬يستخدم لزرع الجراثيم شديدة الحساسية والهشة كالنايسيريات‬
‫بعد الزرع قبل الزرع‬ ‫البنية والسحائية‬
 ‫غراء بزرقة المتيلين مع اإليوزين ‪EMB‬‬
‫هو غراء مغذي مضاف إليه زرقة المتيلين ‪ MB‬واإليوزين ‪E‬‬ ‫‪‬‬
‫اللتان تثبطان نمو الجراثيم إيجابيات الغرام وتسمحان بنمو الجراثيم‬
‫سلبية الغرام فقط (وسط ناخب)‪.‬‬
‫وهو وسط تفريقي الحتوائه على سكري السكاروز والالكتوز مما‬ ‫‪‬‬
‫يكسب المستعمرات المخمرة ألحدهما أو كليهما لونا ً ورديا ً بنفسجيا ً‬
‫بلمعة معدنية خضراء (العصيات الكولونية) أو بدون لمعة للعصيات‬
‫المخمرة األخرى‪.‬‬
‫بينما تظهر المستعمرات غير المخمرة‬ ‫‪‬‬
‫بلون رمادي أو بدون لون (شفاف )‬
‫لون الوسط العقيم بنفسجي محمر ‪.‬‬ ‫‪‬‬
 ‫‪EMB‬‬

‫قبل الزرع‬ ‫بعد الزرع‬

 ‫غراء ماكونكي ‪Macconkey Agar‬‬
‫‪ ‬يدخل في تركيبه البنفسجية المبلورة واألمالح الصفراوية التي تثبط‬
‫نمو الجراثيم إيجابية الغرام وتمنع إنتشار المتقلبات فهو وسط‬
‫انتقائي ( ناخب )‪.‬‬
‫‪ ‬وهو وسط تفريقي الحتوائه على سكر الالكتوز والحمرة المعتدلة‬
‫‪ ‬يسمح بنمو الجراثيم سلبية الغرام فقط ‪.‬‬
‫‪ ‬تظهر مستعمرات الجراثيم التي تخمر الالكتوز بلون أحمر‬
‫بينما تظهر المستعمرات غير المخمرة‬
‫بلون رمادي أو بدون لون (شفاف )‬
 ‫‪Macconkey agar‬‬
‫قبل الزرع‬ ‫بعد الزرع‬
 ‫غراء شابمان (المانيتول الملحي)‬
‫)‪Manitol salt Agar )MSA‬‬
‫‪ ‬هو وسط ناخب وتفريقي لعزل أنواع العنقوديات ‪.‬‬
‫‪ ‬يحوي تركيز مرتفع من ملح كلورالصوديوم (‪ )%7,5‬الذي يمنع‬
‫نمو معظم أنواع الجراثيم األخرى فهو وسط ناخب‪.‬‬
‫‪ ‬يحوي سكر المانيتول مع مشعر حمرة الفينول‬
‫‪ ‬لون الوسط أحمر ‪.‬‬
‫‪ ‬العنقوديات الذهبية المخمرة للمانيتول‬
‫تغير لون الوسط لألصفر فهو وسط تفريقي‪.‬‬
‫‪ ‬العنقوديات الليمونية غيرالمخمرة‬
‫للمانيتول ال تغير لون الوسط‬
 ‫أوساط خاصة‬
‫وهي متنوعة ومتعددة وكل وسط منها مالئم لنوع جرثومي معين مثل ‪:‬‬
‫‪-‬وسط لوفنشتاين جونسون ويستخدم لزرع العصيات السلية‪.‬‬
‫‪-‬وسط لوفلر ويستخدم لزرع الوتديات الخناقية ‪.‬‬
‫‪-‬وسط موللر هينتون منمي عام ويستخدم لدراسة تحسس الجراثيم للصادات‬
‫‪-‬وسط ثاير مارتين ويستخدم لزرع النايسيريات البنية و السحائية ‪.‬‬
‫‪-‬وسط سابورو ويستخدم لزرع للفطور‪.‬‬
 ‫‪ Nutrient agar‬الغراء الغذي‬ ‫أوساط مغذيه‬
‫المرق المغذي‬

‫‪ Chocolate agar‬الغراء الشوكالتي‬ ‫أوساط مغذية غنيه )‪(enrichment media‬‬

‫‪Blood agar‬الغراء المدمى‬

‫‪ Macconkey‬ماكونكي‬ ‫أوساط ناخبة انتقائية)‪(selective media‬‬

‫‪EMB‬‬
‫‪ MSA‬شابمان‬
‫‪ Blood agar‬الغراء المدمى‬ ‫أوساط تفريقية‪differential media‬‬
‫‪ Macconkey‬ماكونكي‬
‫‪EMB‬‬
‫شابمان‬ ‫‪MSA‬‬
‫‪ Macconkey‬ماكونكي‬ ‫أوساط انتقائية و تفريقية‬
‫‪EMB‬‬ ‫‪Combination of selective and‬‬
‫شايمان‬ ‫‪MSA‬‬ ‫‪differential‬‬
 ‫طريقة الزرع الجراثيم (بإستفراد المستعمرات أوالعزل )‬
‫طريقة الزرع على وسط صلب )‪ EMB‬أو ماكونكي أو‪) ..‬‬
‫‪ ‬نأخذ بواسطة إبرة بالتين عقيمة قطرة من ( مستحلب – بول – براز ‪)...‬‬
‫‪ ‬نمرر اإلبرة على سطح وسط الزرع عند منطقة الساعة ‪ 12‬على شكل خطوط‬
‫متقاربة‬
‫‪ ‬نفتل الوسط بشكل تصبح المنطقة المزروعة عند منطقة الساعة ‪9‬‬
‫‪ ‬نعقم اإلبرة ونمررها من طرف الزرع بإتجاه منطقة الساعة‪ 12‬على شكل‬
‫خطوط متقاربة أيضا ً‬
‫‪ ‬نفتل الوسط أيضا ً بشكل تصبح المنطقة المزروعة عند منطقة الساعة ‪9‬‬
‫‪ ‬ونعقم اإلبرة ونمررها من طرف الزرع بإتجاه منطقة الساعة ‪ 12‬أيضا ً‬
‫‪ ‬كذلك نفتل الوسط بشكل تصبح المنطقة المزروعة األخيرة عند منطقة الساعة ‪9‬‬
‫‪ ‬وأخيرا ً نعقم اإلبرة أيضا ً ونمررها من طرف الزرع بإتجاه منطقة الساعة ‪12‬‬
‫‪ ‬يكتب اسم الطالب ورقم الفئة وتوضع العلب في المحم بدرجة حرارة ‪ 24‬مئوية‬
‫مدة ‪ 24‬ساعة‬
‫طريقة الزرع واإلستفراد أوالعزل الجرثومي‬
‫طريقة الزرع واإلستفراد الجرثومي‬
 ‫دراسة نتائج الزرع‬
ً ‫ عيانيا‬-
ً ‫ ومجهريا‬-
Bacterial cultural
characteristics
‫الصفات العيانية للمستعمرة الجرثومية عاى األوساط الصلبة‬
‫تختلف أنواع المستعرات الجرثومية عن بعضها البعض ب ‪:‬‬
‫‪ -‬الشكل‬
‫‪ -‬القطر‬
‫‪ -‬السطح‬
‫‪ -‬الحواف‬
‫‪ -‬الكثافة‬
‫‪ -‬القوام (درجة اللزوجة)‬
‫‪ -‬اللمعان‬
‫‪ -‬اللون‬
‫‪ -‬الرائحة‬
‫‪ -‬وجود التسلق أواإلنتشار‬
‫‪ -‬درجة حلها للدم في وسط الغراء المدمى‪:‬حل كامل‪ :‬بيتا‪ ،‬حل جزئي‪ :‬ألفا‪،‬‬
‫بدون حل‪ :‬غاما‬
‫صفات مستعمرات الجراثيم‬
‫على األوساط الصلبة‬
 Pigmentation)‫ لون المستعمرة ( انتاج الصبغات‬-

Xanthomonas sp.
Serratia sp.

Pseudomonas sp.
‫الكولونية واإلعتيادية على الغراء المغذي‬
‫الحظ صفة التسلق أواإلنتشارعلى السطح لالعتيادية‬
‫الحظ الصفات المختلفة للمستعمرات‬

‫سطح خشن‬
‫كثيفة جدا ً‬ ‫سطح أملس‬
‫حواف مشرشرة‬ ‫قوام مخاطي‬
‫كامدة‬ ‫كثيفة جدا ً‬
‫لماعة‬
‫الحظ أنماط حل الدم على وسط الغراء المدمى‬
‫الحظ اللمعة المعدنية الخضراء لمستعمرات‬
‫العصيات الكولونية على وسط ‪EMB‬‬
 ‫الصفات المجهرية للمستعمرات الجرثومية‬
‫بعد تلوينها بطريقة غرام‬
‫تختلف الجراثيم عن بعضها البعض مجهريا ً ‪:‬‬
‫‪-‬بالشكل (مكورة أو عصية أو ملتوية)‬
‫‪-‬باللون (إيجابية الغرام أوسلبية أو إيجابية بضعف ‪).‬‬
‫‪-‬باإلصطفاف (عشوائي ‪ ،‬عقدي ‪ ،‬عنقودي ‪) ..‬‬
‫‪ -‬وبصفات أخرى (محفظة –أبواغ –عرطلة‪-‬تلون قطبي‪)...‬‬
‫المطلوب‬
‫‪ ‬مشاهدة أوساط الزرع المتوفرة‬
‫‪ ‬الزرع على الغراء المغذي‬