‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .

‬أحمد قجة‬ ‫م ( ‪)4‬‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫اإلثنين ‪2018-11-12‬‬

‫الزرع الجرثومي‬
‫إن معظم الجراثيم يمكن أن تزرع في المخبر‪ ,‬إذا كان وسط الزرع يحوي على المواد المغذية وذو درجة‬
‫حموضة مناسبة لهذه الجراثيم‪ ,‬باإلضافة لحضنها في درجة حرارة وفي ظروف جوية مالئمة‪.‬‬
‫في مخابر األحياء الدقيقة الطبية تزرع العينات من أجل عزل العامل الممرض والحصول على مستعمرات‬
‫نقية لتحديد هويتها ‪,‬وإجراء اختبارات التحسس عليها‪.‬‬
‫يتم العزل على األوساط الصلبة حيث تكون المستعمرات مفردة ‪,‬ويمكن مالحظة خصائص هذه المستعمرات‬
‫‪.‬‬
‫ً‬
‫تستخدم أوساط الزرع الصلبة في األطباق الزجاجية‪ ،‬ويمكن استخدامها أيضا في أنابيب زجاجية بشكل‬
‫مائل‪.‬‬
‫أما األوساط السائلة ‪,‬فهي تستخدم للتكثير عندما يكون عدد الجراثيم في العينة منخفض ‪,‬كما تستخدم أيضا ً‬
‫إلجراء االختبارات الكيميائية الحيوية عندما تكون المتعضّيات ضمن أوساط زرع نقية على األطباق‪.‬‬

‫أوساط الزرع الصلبة‪:‬‬

‫يمكن تحضير الوسط الصلب بدمج مواد جيالتينية مثل اآلغار أو الجيالتين‪.‬‬

‫اآلغار‪:‬‬
‫( عبارة بولي سكاريد مستخلص من أعشاب بحرية ( األشنيات) ) يستخدم عادة في صنع األوساط الصلبة‬
‫بسبب قدرته العالية على تصميم األوساط‪ .‬يتصلب اآلغار في درجة الح اررة من ‪ 39 – 32‬درجة مئوية و‬
‫ينصهر في درجة ح اررة من ‪ 95 - 90‬درجة مئوية‪ .‬معظم اآلغار المستخدم في األعمال البكتيرية الحيوية‬
‫ينتج على شكل آغار مركز ‪.‬‬

‫درجة ح اررة تجمد مادة الجيالتين المنخفضة تسمح لنا بإضافة المواد المغذية التي تتأثر بالح اررة مثل‪ :‬الدم‬
‫الكامل بأمان في درجة ح اررة ‪. 50 – 45‬‬

‫يضاف اآلغار إلى أوساط النقل مثل وسط ‪ Amies medium‬لتجعل قوام هذا الوسط جيالتيني نصف‬
‫صلب‪.‬‬

‫تستخدم األوساط الصلبة بشكل رئيسي في أطباق البتري كوسط زرع كذلك في زجاجات الزرع ‪ ،‬كما يمكن‬
‫صب اآلغار في عمق األنابيب بشكل قائم أو منحدر( مائل )‪ .‬يهدف هذا الزرع بشكل خاص لعزل‬
‫المستعمرات الجرثومية المتفرقة الموجودة في المسحة أو العينة و هذا يمكننا من الحصول على مستعمرة‬

‫‪19‬‬
 ‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫م ( ‪)4‬‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫اإلثنين ‪2018-11-12‬‬
‫جرثومية نقية إلجراء اإلختبارات عليها مثل‪ :‬اختبار الحساسية و التعرف على الهويات‪ .‬ظهور المستعمرة في‬
‫الوسط و التبدالت التي تحدثها فيه تعطي معلومات قيمة كفيلة بتعريف الجرثوم و صفاته‪.‬‬

‫أوساط التكثير‪:‬‬
‫وهي أوساط أساسية يضاف لها مكونات معينة كالدمن أو البالزما والفيتامينات ‪,‬والتي تسمح بنمو‬
‫متعضيات ال تنمو على األوساط العادية ‪,‬كالمستدمية النزلية‪.‬‬
‫في المخبر يمكن أن يستخدم األغار المدمى بدالً من األغار العادي ‪,‬ألن العديد من المتعضيات تنمو بشكل‬
‫أفضل وأسرع عند إضافة مغذيات أكثر بوساطة الدم‪.‬‬
‫األوساط االختيارية‪:‬‬
‫وهي تستخدم للمتعضيات التي تنمو ببطء شديد أكثر من بقية المتعضيات في العينة‪.‬‬
‫ويمكن إضافة الصادات الحيوية أو أمالح الصفراء التي تبطء أو توقف نمو النبيت الجرثومي الطبيعي في‬
‫العينة ‪.‬‬
‫ومثال هذه األوساط ‪,‬الوسط النوعي للنيسريا السيالنية أو الكامبيلوباكتر‪.‬‬
‫األوساط التمييزية‪:‬‬
‫هذه األوساط أضيف لها مواد معينة تسمح بالتفريق بين األحياء الدقيقة في مزرعة مختلطة ألكثر من نوع‬
‫جرثومي‪ ,‬ويتم ذلك غالبا ً من خالل تغيرات اللون في الوسط‪.‬‬
‫مثالها وسط ماكونكي أغار ‪,‬والذي يحوي الالكتوز ومؤشر حموضة ‪,PH‬فالعصيات الكولونية مثالً تخمر‬
‫الالكتوز فتغير‪ PH‬الوسط وبالتالي يتلون الوسط باللون الزهري الغامق‪.‬‬

‫كيفية ظهور المستعمرات الجرثومية على األوساط الصلبة‪:‬‬

‫يجب فحص المستعمرات الجرثومية في إضاءة جيدة و يجب استخدام منبع ضوئي مسلط بشكل مائل عند‬
‫الفحص لرؤية تلون المستعمرات‪ .‬العدسة ذات التكبير الضعيف تساعد على رؤية التفاصيل الشكلية للجرثوم‪.‬‬
‫الرؤية من األعلى‪:‬‬
‫تبدو المستعمرة مدورة غير منتظمة الحواف محززة أو متشعبة شفافة أو معتمة و سطحها يمكن أن يكون‬
‫ناعم أو خشن و قد تكون مشعة أو قاتمة‬

‫مستعمرات العينات الممحفظة تبدو مخاطية‬

‫المستعمرات الناضجة للمكورات الرئوية لها مظهر حلقي الشكل‬

‫الرؤية من الجانب‪:‬‬

‫قد تبدو المستع مرات مسطحة أو مرتفعة بدرجات متفاوتة مع حواف مثلثة الشكل في بعض األحيان مع‬
‫انخفاض مركزي أو ارتفاع مركزي‪.‬‬

‫‪20‬‬
 ‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫م ( ‪)4‬‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫اإلثنين ‪2018-11-12‬‬
‫عند لمسها باللوب )‪: (Loop‬‬
‫بعض المستعمرات تكون ناعمة و مستحلبة مثل المكورات العنقودية المذهبة في حين هناك بعض‬
‫المستعمرات يكون من الصعب رفعها مثل العقديات القيحية‪.‬‬

‫لون المستعمرات‪:‬‬
‫هذا أيضاً يساعد في تحديد نوع الجراثيم خاص ًة عند استخدام أوساط تفريقية تحوي مواد تساعد في ذلك‪.‬‬

‫التغيرات التي تحدثها الجراثيم المزروعة في أوساط الزرع الصلبة‪:‬‬

‫تتضمن هذه التغيرات‪ :‬ارتكاسات انحاللية‪ ،‬نواتج صبغية‪ ،‬تغيرات لونية ناتجة عن تخمر السكر الذي تحدثه‬
‫المستعمرات‪ ،‬اإلسوداد الناتج عن سلفيد الهيدروجين‪ .‬مثال عن الجراثيم المشكلة لألصبغة‪ :‬البسيدوموناز‬
‫المنتجة للغاز معطية لون أخضر مصفر في وسط اآلغار المدمى و ماكونكي آغار‪ .‬و كمثال عن الجراثيم‬
‫التي تحدث تغير لوني في أوساط الزرع‪ :‬ضمات الكولي ار التي تخمر السكروز معطية لون أصفر في وسط‬
‫‪ TCBS‬آغار‪.‬‬

‫اإلسوداد الناتج عن سلفيد الهيدروجين يمكن رؤيته في معظم مستعمرات السلمونيال التي تنمو في الوسط‬
‫‪Kligler Iron Agar‬‬

‫االرتكاسات االنحاللية في اآلغار المدمى تشاهد في مستعمرات العقديات بيتا الحالة للدم و مستعمرات‬
‫المكورات الرئوية إلفا الحالة للدم ‪ .‬المظاهر الشكلية للمستعمرات يمكن أن تختلف حسب أنواع الدم المستخدم‬
‫مثل دم الحصان أو الخروف أو دم الماعز‪.‬‬

‫خطوات العمل‪:‬‬
‫على كل علبة أغار تكتب الشركة الصانعة خطوات العمل و هي بشكل عام كالتالي‪:‬‬

‫‪ -1‬نذيب ‪ 39‬جرام من البودرة الموجودة في العلبه في واحد لتر ماء مقطر‪.‬‬

‫مالحظة‪ :‬اذا اردنا تحضير مثال عشره اطباق فقط فيجب اوال ان نعرف ان كل طبق يحتاج ‪20‬مل فقط أي‬
‫أن العشره االطباق تحتاج ‪200‬مل‪.‬‬

‫ولكي نحدد الكميه المناسبه من البودر للعشره االطباق نستخدم المعادلة التالية‪:‬‬

‫كل ‪ 1000‬مل تحتاج ‪ 39‬غ من بودرة اآلغار‪.‬‬

‫‪21‬‬
 ‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫م ( ‪)4‬‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫اإلثنين ‪2018-11-12‬‬
‫كل ‪ 200‬مل ماء تحتاج س غ من بودرة اآلغار‪.‬‬

‫و هكذا س = ‪ 39×200‬تقسيم ‪ 1000‬و الناتج‬

‫سوف يكون‪7.8‬جرام وهذه هي كمية البودرة التي نحتاجها لتحضير عشره اطباق‪.‬‬

‫‪ -2‬نقوم بوزن البودرة الالزمة بالمي ازن الحساس‪.‬‬

‫‪ -3‬نضيفها على الماء المقطر فوق الهب او بعد غليانه‪.‬‬
‫‪ -4‬نصبها في االطباق‪.‬‬
‫‪ -5‬ونضعها في البراد للحفظ بعد تغليفها الستخدامها وقت الحاجة‪.‬‬
‫اذا اردنا تحضير آغار مدمى اوال نحضر أغار مغذي ثم نتركه حتى يبرد(‪ )50-40‬ثم نضيف الدم‪.‬‬

‫طريقة تطعيم أطباق بتري‪:‬‬

‫‪ -‬العينات تزرع على األغار على أطباق بتري لتسمح بالحصول على مستعمرات مفردة للتعرف على‬
‫البكتريا ‪,‬وهذا سيمكن من الرؤية الواضحة لجميع أشكال المستعمرات الموجودة في العينة‪.‬‬
‫‪ -‬عليك دائما ً أن تعزل العامل الممرض في المزارع النقية قبل أن تحاول التعرف عليها وإجراء‬
‫اختبار الحساسية‪.‬‬

‫‪22‬‬
 ‫السنة الثالثة‬ ‫د‪ .‬أحمد قجة‬ ‫م ( ‪)4‬‬ ‫علمي علم الجراثيم الطبي‬

‫اإلثنين ‪2018-11-12‬‬
‫‪ -‬عندما يكون سطح األغار قد جف(حوالي ‪ 20‬دقيقة‪,‬للحصول على طبق جاف) سجل بوضوح على‬
‫الوجه الخلفي للطبق الذي يحوي األغار صفات الطبق ومحتوياته‪,‬ألنك إذا سجلت المعلومات على‬
‫الغطاء فإنك لن تستطيع قراءة األطباق‪.‬‬
‫‪ -‬أنشر العينة في منطقة واحدة من الطبق باستعمال عروة الزرع العقيمة وانشرها بالطريقة المبينة‬
‫باألشكال التالية‪.‬‬

‫عندما تنتهي من التطعيم أو الزرع ضع األطباق على حامل خاص واحضنها‬

‫انتهت المحاضرة العملية الرابعة‪.‬‬

‫‪23‬‬