大腸桿菌檢驗法

總大腸桿菌法 -- 多管發酵法
多管發酵法之實驗原理及目的

• 原理及目的
利用大腸桿菌能發酵乳糖培養
基之原理，再根據統計法原理
粗略估計大腸桿菌之密度
多管發酵檢驗法步驟

• 假定試驗
• 確定試驗
• 完成試驗
假定試驗

• 來源：自來水、飲料、一般早餐店飲料
• 稀釋倍率： 1x 、 10-1x 、 10-2x 、 10-3 、 10-4x
、 10-5x
• 培養基：乳糖培養液 (LST)
• 培養時間： 24hr 或 48hr
• 觀察結果：正反應 --- 有氣泡
負反應 --- 無氣
泡
1. 於試管架上排列四組含 LST 的試管，每組五支
試管，共 20 支。每組試管標示稀釋度 (10-
2 、 10-3 、 10-4 及 10-5 ) 。

2. 將水樣充分震盪均勻，取樣 1 ml 進行連續稀釋
，稀釋至 10-5 。
3. 由 10-2 、 10-3 、 10-4 及 10-5 分別吸取 1 ml 稀釋
液至乳 LST ，每個稀釋度各重複作 5 支試管。
4. 將所有試管於 37℃ 下培養 24-48 小時。
10 ml 10 ml 10 ml
假定試驗結果

資料來源： http://microbiology.scu.edu.tw/micro/microbe-
exp/exp_website/schedule_1.htm
確定試驗

• 來源：乳糖正反應之培養液
• 培養基： BGLB 培養液
• 培養時間： 48hr
• 觀察結果：正反應 --- 有氣泡

（水樣混濁也記為正反應）
負反
應 --- 無氣泡
假定試驗結果
 確定試驗
• 確定實驗結果計算：統計三種稀釋度正反
應的數量後，查 MPN 數值表。並可利用所
得反應結果，精確計算。
• MPN ： Most Probable Number 最大可能
數
大腸桿菌群最大可能數 (MPN/100 mL) 
呈正反應之樣品數 100
呈負反應之水樣總體積 (mL)  實驗樣品之總體積 (mL)
國立成功大學 環境工程學系 微生物學實驗

MPN 數據判讀說明
表 11-2 判讀說明
水 樣 體 積 （mL） 陽性反應 結果
水樣別
10 1 0.1 0.01 0.001 組合 (MPN/100 mL)
a 5/5 5/5 2/5 0/5 0/5 5-2-0 4.9×102
b 4/5 5/5 1/5 0/5 0/5 4-5-1 48
c 0/5 1/5 0/5 0/5 0/5 0-1-0 2
d 5/5 4/5 4/5 1/5 0/5 4-4-1 4.0×102
e 5/5 4/5 4/5 0/5 1/5 4-4-1 4.0×102

1. 最低稀釋倍數 5 支皆呈陽性 2. 往下取三個連續稀釋，直到產生正反應

之最高稀釋倍數
完成試驗

• 來源： BGLB 正反應之培養液

• 培養基： EMB 培養基
• 培養時間： 24hr
• 觀察結果：正反應 --- 有金屬光澤菌落
負反
應 --- 無金屬光澤菌落
問題與討論

1. 請分別用查表法與公式法計算水樣中大腸桿菌最大可能
數 (MPN/100mL) ，並討論兩種方法計算的結果。
2. 請討論利用多管發酵法與濾膜法分析水樣中大腸桿菌之
優缺點。
值週組工作

• 擦拭實驗桌
• 倒垃圾
• 關燈、關風扇電源
• 協助準備實驗材料
Thank You!