Flow Cytometry

‫فلوسایتو متری تکنیکی است با کارآیی باال که برای اولین بار‬

‫توسط ‪ wolfgang göhde‬در سال ‪ 1968‬در دانشگاه‬
‫مونس تر کش ف ش د ‪.‬نام اولی ه این روش "‪pulse‬‬
‫‪ "cytophotometry‬بود ک ه در کنفرانس ‪ 1988‬در‬
‫امریکا به فلوسایتومتری تبدیل شد ‪ .‬‬
‫فلوسیتومتری به طور کلی روش ی برای شمارش ذرات و بررسی‬
‫میکروسکوپی ‪ ،‬مانند سلول ها و کروموزوم ها است ‪ .‬در این‬
‫حالت ذره در یک جریان سیال تعلیق شده و ذره یکی به یکی از‬
‫مقابل نور عبور میکند و شمارش انجام می شود ‪ .‬همچنین این‬
‫دس تگاه اجازه بررس ی ‪ multiparametric‬پارامتر های‬
‫فیزیک ی و شیمیایی را در یک زمان بس یار اندک را می دهد ‪.‬‬
‫فلوسیتومتری به طور مداوم در تشخیص اختالالت استفاده می‬
‫شود ‪ ،‬به خصوص سرطان خون ‪ ،‬اما بسیاری از برنامه های‬
‫کاربردی دیگر در هر دو پژوهش بالینی و عمل هم شامل ان می‬
‫شوند ‪.‬‬
 ‫سه اصل مهم در فلوسایتو متری‪  ‬‬
‫الف ) یکنواخت بودن جریان عبور سلول ها‪ ‬‬
‫ب ) یکنواخت بودن غلظت سیال‪ ‬‬
‫ج ) یکنواخت بودن فشار مکش و ترزیق ذرات‬
‫‪ ‬‬
Flow Cytometry Is A Powerful Technique For
Characterizing Immune Cells

• Allows For Detection Of Surface Markers

Of Cells
• Allows For Detection Of Intracellular
Factors
• Allows Detection Of Secreted Factors By
Cells
• Allows For Detection Of DNA Content
Principles Of Flow Cytometry
How Is It Done:

http://biology.berkeley.edu/crl/flow_cytometry_basic.html
Limitations With Light Scattering
• Some Information Can Be Obtained
• FSC Correlates With Cell Size
• SSC Correlates With Internal Complexity
• To Distinguish Between 2 Cell types
– A. Size Has To Be Different OR
– B. Internal Complexity i.e amount of granules
• If These Two Parameters Are The Same, Then
No Distinction Can Be Made
• See The Following Figure
FSC vs SSC Dot Plot
Fluorescence And Antibodies
To The Rescue
 Fluorescent Dyes And Antibodies
• Fluorochromes Are Molecules That Emit
Fluorescence Upon Excitation With Light
– Ex. FITC (Fluorescein Isothiocyanate)
– PE (Phycoerythrin)
– PerCP (Peridinin Chlorophyll Protein)
– APC (Allophycocyanin)
• Some Fluorochromes Are Proteins, Some Are
Small Organic Compounds
– Ex. PE (Phycoerythrin)-Protein
– Ex. FITC (Fluorescein Isothiocyanate)
Principles Of Fluorescence

E= h f
=f
Excitation Spectra Of
Fluorochromes
Emission Spectra
Architecture Of A FacsCalibur
Instrument
Analyzed Data
Unstained ISOTYPES
GM-CSF + IL-4 (6 Days Old)

GM-CSF
Fig. 2 GM-CSF+IL-4 GM-CSF+IL-4+PGE2
GMF: 168.92 GMF: 1.85

25 75 99 1

GMF: 11.82 GMF: 391.83

80 99
20 1