T7 RNR Polimerazė

Mantvydas Zaksas Bif19/1

1
 Įvadas

• Bakteriofago T7 RNR polimerazė - (RNRP) - plačiai paplitusios RNRP šeimos narys,

apimantis daugumą bakteriofagų koduotų RNRP ir mitochondrijų RNRP. Tvirtas fagų
RNRP aktyvumas ir griežtas promotoriaus specifiškumas padarė juos ypač naudingus
kaip reagentus tiek specifinių RNR paruošimui in vitro, tiek genų ekspresijai in vivo.

2
T7 RNR polimerazė yra RNR polimerazė iš T7 bakteriofago, kuri katalizuoja
RNR susidarymą iš DNR 5'→ 3' kryptimi.

T7 polimerazė yra labai specifinė promotoriui ir transkribuoja tik DNR

pasroviui nuo T7 promotoriaus. T7 polimerazei taip pat reikalingas
dvigrandė DNR šablonas ir Mg2+ jonas kaip RNR sintezės kofaktorius. Jis
turi labai mažą klaidų lygį.
3
 T7 RNR polimerazės
promotorius

This Photo by Unknown Author is licensed under CC BY

4
 Struktūra

• Fermentas turi pakankamai didelį plyšį, kad tilptų dvipusė DNR molekulė. Pažymėtina, kad didelė fermento
dalis (45%) turėjo didelį struktūrinį panašumą į DNR I polimerazės domeną ir labiau ribotą panašumą į ŽIV
atvirkštinės transkriptazės (RT) polimerazės domeną. (Sousa ir kt., 1993)
• Visi šie polimerazės domenai yra panašios į dešinės rankos formos ir susideda iš trijų subdomenų, vadinamų
nykščiu, delnu ir pirštais.
• Nepaisant itin riboto sekos panašumo, DNAP I ir T7 RNAP polimerazės domenai turi beveik identišką
sulankstymo topologiją ir antrinę struktūrą.

5
Struktūra
• Nykščio subdomeną sudaro 330–410
likučiai ir jis sudaro ilgą spiralinę
projekciją vienoje šablono surišimo
plyšio pusėje. Tiek struktūriniai, tiek
struktūros ir funkcijų tyrimai rodo,
kad pagrindinė nykščio subdomeno
funkcija yra stabilizuoti transkripcijos
kompleksą ir išlaikyti jo
procesiškumą transkripto pailgėjimo
metu
• Delno subdomeną sudaro 386–448,
532–540 ir 788–838 likučiai, jame
yra kataliziškai svarbiausių liekanų.
Nors T7 RNAP kaip visuma yra labai
spiralinė molekulė, delno paviršius,
nukreiptas į DNR ir RNR, daugiausia
yra lakštinis.

6
Reguliacija

7
Taikymas

8
Charakterizacija

9
 Išvados
• Buvo sukurtas naujas inteino pagrindu susiskaldantis afininis
inkaras, skirtas rekombinantinių baltymų gryninimui.
• Savaime skaidomas afinitetas palengvina periplazminę
rekombinantinio baltymo ekspresija naudojant buferinę auginimo
terpę. Tai paprastas, greitas,ekonomiškas požiūris į mokslinių
tyrimų ir terapijos baltymų gamyba.

10
Ačiū

11