‫تقنية االليزا واستخداماتها‬

‫‪‬تقنية االليزا ‪ Elisa‬والتي تعرف أيًض ا باسم (قياس االمتصاصية المناعية‬

‫لالنزيم المرتبط) هي اختبار كيميائي حيوي يعتمد على استعمال األجسام‬
‫المضادة‪ ،‬والتغيير اللوني في التعرف على وجود مادة معينة في عينة ما‪.‬‬
‫‪‬وتعتبر تقنية االليزا ‪ ELISA‬أحد أكثر الفحوصات المناعية المتاحة حساسية ‪،‬‬
‫فنطاق الكشف النموذجي لـتقنية االليزا هو ‪ 0.01‬نانوغرام إلى ‪ 0.1‬نانوغرام‪.‬‬

‫‪ ‬هذه التقنية مصممة الكتشاف وقياس الببتيدات والبروتينات واألجسام المضادة‬

‫والهرمونات‪ .‬وتستخدم هذه التقنية بكثرة في المختبرات الطبية للتأكد من وجود‬
‫مستضد مرضي ‪ Antigen‬أو جسم مضاد ‪ Antibody‬معين في دم‬
‫المريض‪.‬‬
 ‫ماهي تقنية االليزا ؟‬

‫‪ ‬اختبار االليزا هو اختبار سريع وتستخدم هذه التقنية لقياس تركيز مادة‬
‫جزيّئية مثل الهرمونات والمستضدات البكتيِّر ية و االجسام المضادة تستخدم‬
‫البروتينات بدال من الجزيئات الصغيرة و االيونات بدل الكلوكوز والبوتاسيوم‬
‫موجودة في السائل الحيوي كالسيرم ‪ .‬هذه المادة الجزيّئية تقاس عن طريق‬
‫معرفة كّم ية االجسام المضادة ‪ Antibody‬والتي ارتبطت بـالمستضد‬
‫‪Antigen‬‬
‫‪‬ملحوظة‪ :‬الجسم المضاد ‪ Antibody‬هو بروتين ينتجه جهاز المناعة في‬
‫الجسم عندما يكتشف مواد ضارة تسمى المستضدات ‪.Antigens‬‬
 ‫أنواع تقنية االليزا‬

‫‪ ‬هناك أربعة أنواع أساسية لتقنية االليزا‪ ،‬مما يسمح بقدر جيد من المرونة‬
‫والتي يمكن تعديلها بناًء على األجسام المضادة المتاحة‪ ،‬أو النتائج المطلوبة‪،‬‬
‫أو مدى تعقيد العينات‪:‬‬

‫‪‬االليزا المباشرة ‪Direct ELISA‬‬

‫‪ .‬االليزا الغير مباشرة ‪Indirect ELISA‬‬
‫‪‬االليزا الشطيرية ‪ELISA Sandwich‬‬
‫‪‬االليزا التنافسية ‪Competition ELISA‬‬
 ‫تقنية االليزا المباشرة ‪Direct ELISA‬‬
‫‪ ‬لكشف المباشر‪ ،‬يتم الكشف عن مستضد مغطى بلوحة بواسطة جسم مضاد تم اقترانه مباشرة بإنزيم‪،‬‬
‫ويكون حفر االليزا مغطى بالجسم المضاد ‪.‬‬

‫‪ ‬تعد طريقة الكشف هذه خياًرا جيًد ا إذا لم تكن هناك مجموعات اليزا متاحة تجارًيا للبروتين المستهدف‪.‬‬

‫‪ ‬عندما يكون المطلوب الكشف عن المستضد وقياس تركيزه في العينة ‪ ,‬ففي هذه الحالة ‪:‬‬

‫يرتبط المستضد في العينة مع الجسم المضاد‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫يتم غسل الطبق الزالة االجسام المضادة غير المرتبطة ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫بعد ذلك تتم إضافة أجسام مضادة أخرى و تكون هذه االجسام المضادة مرتبطة بإنزيم ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يتم غسل الطبق أيضا األجسام المضادة غير المرتبطة ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ثم تضاف المادة االساسية لالنزيم‪ ،‬ويتم حساب كمية المستضد عن طريق قياس كمية ناتج التفاعل‬ ‫‪‬‬
 ‫تقنية االليزا غير المباشرة ‪Indirect‬‬
‫‪ELISA‬‬
‫‪ ‬عندما يكون المطلوب الكشف عن المستضد وقياس تركيزه في العينة‪ ،‬ففي هذه الحالة‪:‬‬
‫‪ُ ‬يضاف المستضد المخصص لحفر االليزا و ُيترك فترة حتى يلتصق‪.‬‬
‫‪ُ ‬يضاف السيرم المحتوي على أنواع مختلفة من الجسم المضاد تسمى بالجسم المضاد‬
‫االولي‬
‫‪ ‬يرتبط الجسم المضد في السيرم مع المستضد الموجودة في الطبق‬
‫‪ ‬يتم غسل الطبق الزالة الجسم المضاد غير المرتبط‪.‬‬
‫‪ُ ‬يضاف مستضد آخر مرتبط بإنزيم الجسم المضاد الثاوي وهذا يمكنه االرتباط فقط في‬
‫حال ارتباط الجسم المضاد االولي بالعينة الموجودة بالطبق‪.‬‬
‫‪ ‬يتم غسل الطبق الزالة الجسم المضاد الغير المرتبط ‪.‬‬
‫‪ ‬تضاف المادة ااالساس لإلنزيم‪ ،‬ويتم حساب كمية الجسم المضاد عن طريق قياس كمية‬
‫ناتج التفاعل ‪.‬‬
‫الشكل التالي يوضح الفرق بين االليزا المباشرة والغير مباشرة‬
 ‫تقنية االليزا الشطيرية ‪ELISA Sandwich‬‬

‫‪‬تتطلب عادًة استخدام أزواج األجسام المضادة المتطابقة‪ ،‬حيث يكون كل جسم‬
‫مضاد محدًد ا لجزء مختلف غير متداخل من جزيء المستضد‪ .‬يتم تغليف‬
‫الجسم المضاد األول في طبق االليزا‪.‬‬

‫‪ ‬سمي بالشطيري نسبة إلى الشطيرة (الساندويتش)‪ ،‬وذلك ألن في هذا النوع‬
‫من االليزا يتم حضن المستضد المراد الكشف عنه بجسمين مضادين مضافان‬
‫مخبريًا للعينة‪.‬‬

‫‪‬ثم يضاف محلول العينة إلى الطبق‪ .‬يتبع الجسم المضاد الثاني هذه الخطوة‬
‫من أجل قياس تركيز العينة‪.‬‬
 ‫تقنية االليزا التنافسية ‪Competition ELISA‬‬
‫‪‬في هذه الحالة يتنافس المستضد المطلوب قياسه في العينة مع المستضد‬
‫المسمى ‪ Labeled Antigen‬لالرتباط بالجسم المضاد ‪ .‬و في هذه الحالة‬
‫تكون العالقة عكسية بين كمِية المستضد المطلوب قياسه ‪Labeled‬‬
‫‪.Antigen‬‬

‫‪ ‬الحدث الرئيسي في االليزا التنافسية (المعروف أيًض ا باسم اليزا التثبيت) هو‬
‫عملية التفاعل التنافسي بين مستضد العينة والمستضد المرتبط بحفر لوحة ال‬
‫‪ microtiter‬مع الجسم المضاد األولي‪.‬‬
 ‫‪ ‬مبدأ عمل تقنية االليزا ‪ELISA‬‬
‫‪ ‬اختبار االمتصاصة المناعية المرتبط باإلنزيم اليزا هو تقنية معملية شائعة تستخدم لقياس‬
‫تركيز التحاليل (عادًة األجسام المضادة أو المستضدات) في المحاليل‪ .‬ينتج عن خطوات‬
‫‪ ELISA‬منتج نهائي ملون يرتبط بكمية التحليالت الموجودة في العينة األصلية‪.‬‬
‫‪ ‬عادًة ما يتم إجراء ‪ ELISA‬في صفائح بوليسترين ذات ‪ 96‬حفرة (أو ‪ 384‬حفرة) ‪،‬‬
‫والتي ستربط األجسام المضادة والبروتينات بشكل سلبي‪ .‬هذا االرتباط وتثبيط الكواشف‬
‫هو الذي يجعل تقنية االليزا ‪ ELISAs‬سهلة التصميم والتنفيذ‪.‬‬

‫‪ ‬إن وجود متفاعالت االليزا مثبتة على سطح الصفيحة الدقيقة يجعل من السهل فصل‬
‫المواد المرتبطة عن المواد غير المقيدة أثناء الفحص‪ .‬هذه القدرة على التخلص من‬
‫المواد غير المرتبطة بشكل خاص تجعل من اليزا أداة قوية لقياس فحوصات معينة داخل‬
‫تحضير خام‪.‬‬
‫شكل اللوحة‪ :‬تستخدم اللوحات مسطحة مكونة من ‪ 96‬جدار‬
‫مصنوعة من البوليسترين او كلوريد البولي فينيل في الغالب‬
‫‪‬لوحة (‪) Well‬مع ‪ 8‬شرائط عمودية و ‪ 12‬افقية تتضمن ‪ 96‬حجيرة أو حفرة‬
‫( يحدث التفاعل داخلها)‬
‫‪‬مستضد ‪Antigen‬‬
‫‪‬األجسام المضادة ‪Antibodies‬‬
‫‪‬محاليل مظهرة للون‬
‫‪ ‬محاليل لوقف التفاعل‬
 ‫طريقة تقدير الهرمونات ( ………‪FSH ,LH , PRl.‬‬
‫‪-1‬ترقيم الطبق الخاص والمكون من ‪ 96‬خانة ( ‪ ) Wells‬بدقة وتستخدم‬
‫الخانات االولى لرسم المنحني القياسي ‪. Standard Curve‬‬
‫‪-2‬وضع ‪ 50‬مايكروليتر من العينة بالنسبة للهرمونات ( ‪ ) FSH , LH‬و‬
‫‪ 25‬مايكروليتر بالنيبة لهرمون ‪. PRL‬‬
‫‪-3‬نضيف ‪ 100‬مايكروليتر من – ‪Enzyme Reagent solution‬‬
‫‪ FSH ,LH ,PRL‬الى الخانات ( ‪. ) Wells‬‬
‫‪-4‬يحرك الطبق بلطف لمدة ‪ 30 – 20‬ثانية لغرض المزج ‪.‬‬
‫‪-5‬يحضن الطبق لمدة ‪ 60‬دقيقة في درجة حرارة المختبر ‪.‬‬
‫‪-6‬تفرغ محتويات الطبق وتجفف الخانات ‪ Wells‬باستخدام ورق الترشيح‬
 ‫‪-7‬نضيف ‪ 350‬مايكروليتر من محلول الغسل ‪ Wash buffer‬الى‬
‫الخانات ‪ Wells‬حيث يتم الغسل والشطف مرتين او ثالثة ‪.‬‬
‫‪-8‬نضيف ‪ 100‬مايكروليتر من المحلول القياسي ‪Working substrate‬‬
‫‪ solution‬الى الخانات ‪ Wells‬مع مالحظة عدم رج الطبق بعد اضافة‬
‫المحلول القياسي ‪.‬‬
‫‪-9‬يحضن الطبق لمدة ‪ 15‬دقيقة في درجة حرارة المختبر ‪.‬‬
‫‪-10‬نضيف ‪ 50‬مايكروليتر من ‪ Stop solution‬الى جميع الخانات‬
‫‪ Wells‬وتمزج جيدا لمدة ‪ 20 – 15‬ثانية ‪.‬‬
‫‪-11‬تقرا االمتصاصية لكل خانة ‪ Well‬على طول موجي ‪ 450‬نانوميتر ‪.‬‬
 ‫ما هو استخدام اختبار ‪ELISA‬‬
‫‪‬غالًب ا ما يستخدم هذا االختبار لمعرفة احتمالية التعرض لفيروسات أو مواد‬
‫أخرى تسبب العدوى‪ .‬كما أنها تستخدم لفحص اإلصابات الحالية أو السابقة‪.‬‬
 ‫استخدام تقنية االليزا‬
‫‪ ‬هناك العديد من األمثلة على التطبيقات التي تستخدم اختبار ‪ .ELISA‬على سبيل المثال‪ :‬في‬
‫المجال الطبي‪ ،‬وصناعة األغذية‪ ،‬وتطوير اللقاحات‪ ،‬وعلم المناعة‪ ،‬والتشخيص‪ ،‬وعلم‬
‫السموم‪ ،‬ومراقبة األدوية‪ ،‬وصناعة األدوية ‪ ،‬وزرع األعضاء‪.‬‬
‫‪ ‬ي المجال الطبي‬
‫‪ ‬تحليل الهرمونات و الفيتامينات‪.‬‬
‫‪ ‬رصد المخدرات العالجية‪.‬‬
‫‪ ‬اجراءات التشخيص‪.‬‬
‫‪ ‬يستخدم في التشخيص الطبي لالنسان و الحيوانات‪.‬‬
‫‪ ‬يستخدم لقياس مستوى االجسام المضادة (في حاالت الحساسية و اللقاحات)‪.‬‬
‫‪ ‬الكشف عن الفيروسات(التهاب الكبد و أمراض فيروس نقص المناعة البشرية التناسلية)‪.‬‬
‫‪ ‬الكشف عن التغيرات الهرمونِّية (الحمل)‪.‬‬
‫‪ ‬الكشف عن عالمات التهابات الدورة الدموِية‬
 ‫‪‬الصناعات الغذائية‬
‫‪‬تلعب تقنية االليزا دوًر ا رئيسًيا في صناعة المواد الغذائية‪ .‬إنها المنصة الرئيسية‬
‫لتحديد مسببات الحساسية الغذائية مثل تلك الموجودة في الحليب والفول السوداني‬
‫والجوز واللوز والبيض‪ .‬يمكن أيًض ا استخدام االليزا ‪ ELISA‬لتأكيد صحة‬
‫المنتجات الغذائية‪ .‬تساعد هذه التقنية بشكل كبير في تجنب الخسائر االقتصادية‬
‫المحتملة الناتجة عن االستبدال االحتيالي‪.‬‬

‫‪‬تطوير اللقاحات‬
‫‪ ‬تعمل تقنية االليزا كمرشح رائع لتطوير اللقاح‪ .‬يمكن اختبار عينة المصل من‬
‫حيوان محصن أو نموذج بشري للكشف عن وجود أجسام مضادة ضد أنواع‬
‫معينة من المستضدات ‪ ،‬والتي تم حقنها عمًد ا في المضيف‪.‬‬
 ‫‪ ‬ختبار الحمل‬
‫‪ ‬يمكن التعبير عن عدد من الكيانات الجزيئية المختلفة بما في ذلك هرمون موجهة الغدد التناسلية المشيمائية البشرية‬
‫(‪ ، )HCG‬والهرمون الملوتن (‪ ، )LH‬والهرمون المنبه للجريب (‪ ، )FSH‬واإلستريول (‪ ، )E3‬والهرمون المنبه‬
‫للثيروتروبين (‪ )TSH‬بسبب الحمل‪.‬‬

‫‪ ‬يمكن لـتقنية االليزا الكشف عن بعض هذه البروتينات من دم األم أو لعابها أو بولها في المراحل المبكرة من الحمل‪.‬‬
‫هرمون ‪ HCG‬هو أحد الهرمونات الشائعة التي يمكن الكشف عنها بواسطة االليزا خالل الشهر األول بعد اإلخصاب‪.‬‬

‫‪ ‬وجزيء حيوي آخر مرتبط بالحمل هو اإلستريول (‪ )E3‬الذي يمكن اكتشافه باستخدام االليزا في اللعاب في األسبوع‬
‫السادس من الحمل‪.‬‬

‫‪ ‬كشف السرطان‬
‫‪ ‬يوفر االكتشاف عالي الحساسية للسرطان تشخيًصا مبكًر ا ‪ ،‬وهو أمر بالغ األهمية لبقاء المريض على قيد الحياة‪ .‬ومع‬
‫ذلك ‪ ،‬فإن المؤشرات الحيوية للسرطان هي من أكثر الكيانات الجزيئية الحيوية تحدًيا باعتبارها تحليالت مستهدفة‪ .‬لقد‬
‫وعدت التطورات في تقنية االليزا بتطبيقها في الكشف عن المؤشرات الحيوية للسرطان‪.‬‬
‫‪‬شكرا لحسن االصغاء‬