-85

Hematopoeza

10.Hematopoetski
faktori
Hematopoetske (krvne) elija su
osnova zarasta
ivot

One prenose kiseonik, odgovorne su za imunitet domaina i

obezbeuju zgruavanje krvi
elije krvi se sastoje od crvenih i belih zrnaca koje su zajedno
sa ploastim elijama (platelama) suspendovane u krvnoj
plazmi
Sve krvne elije su nastale od matinih elija.
Matine elije se zajedno sa drugim elijama koje ukljuuju i
stromalne elije nalaze u kotanoj sri.
Matine elije imaju sposobnost da vre regeneraciju elija, a
takoe se mogu diferencirati u razliite vrste elija koje se
nalaze u krvi
Proces u kome se deo matinih elija kontinualno diferencira
(kontinualno proizvodi nova krvne zrnaca i ploice koje
zamenjuju stare koje su ostarele) se naziva hematopoeza.
U toku same diferencijacije elije stiu potrebne funkcionalne
osobine.
Hematopotetski faktori rasta su bioloki aktivne supstance
(citokini) koji uestvuju u hematopoezi.

Vrste krvnih elija koje se stvaraju iz matinih elija

kotane sri
Neutrofili

T elije i B limfociti

Eozinofili

Eritrociti

Bazofili

Monociti i makrofazi
(prethodnici
mononuklearnih
fagocita)

Megakariociti
(prethodnici platela)

Osteoklasti*

* Osteoklasti su multijedarne elije koje se povezuju sa malim udubljenjma na

povrini kostiju; njihova funkcija je da reapsorbuju kalcifikovane kosti

Leukociti: njihova podela i funkcija

Leukociti

Mononuklear
ni fagociti

Limfociti

Granulociti

Neutrofili

B-limfociti

T- pomonike
elije

T- limfociti

elije
ubice NK

T- citotoksine
elije

T- supresorske
elije

Bazofili

Eozinofili

Pluripotentne elije

Unipotentne elije
T-pomonike
T-limfoblasti
T-ubice

Limfoidn
e

B-elije

B-limfoblasti

Matine
elije

Normoblasti

Crvena zrnca

Megakarioblasti

Platele
Eozinofili

Mijeloidne

Bazofili
Mijelociti

Matine elije

Uproena
ema procesa
hematopoeze.

Progenitorske
BFU
CFU
L
GEMM
E
Eo
GM
Meg

Neutrofili

Promonociti

Monociti i Mak.

Prekusorske

Diferencirane

Jedinica formiranja elijske vrste

Jedinica formiranja kolonija
Limfoidan
Granulocit-Eritrocit-Makrofag-Monocit
Eritrocit
Eozinofil
Granulocit-Monocit
Megakariocit

-86- Osnovni hematopoetski faktori rasta

Razliiti interleukini
Stimulirajui faktor kolonija granulocit-makrofaga (GM-CSF)
Stimulirajui faktor kolonija granulocita (G-CSF)
Stimulirajui faktor kolonija makrofaga (M-CSF)
Inhibirajui faktor leukemije (ILF)
Eritropoetin (EPO)
Trombopoetin (TPO)
Veina nabrojanih hematopoetskih faktora rasta su
glikoproteini molekulske mase od 14-24 kDa.
Mnogi od njih se mogu proizvesti pomou vie od jedne
elijske vrste, a takoe jedna vrsta elija moe da poseduju na
svojoj povrini receptore za nekoliko hematopoetskih faktora.

 Danas je, zahvaljujui razvoju genetskog inenjerstva, mogue proizvesti

rekombinantne forme gotovo svih nabrojanih hematopoetskih faktora, a to je
doprinelo dubljem poznavanju procesa hematopoeze.
Tako je utvreno da kada se matine elije gaje u in vitro uslovima i tretiraju
pojedinim hematopoetskim faktorima individualno, samo IL-3 e podrati
njihov rast i diferencijaciju.
Ovi i kasniji eksperimenti su ukazali na neophodnost zdruenog delovanja
hematopoetskih faktora za veinu sluajeva.
Sinergistiko dejstvo je utvreno i za IL-1 i IL-3 i stimulirajui faktor kolonija
granulocita makrofaga (GM-CSF), pa je potrebno da se koriste zdrueni.
Slino tome, u in vivo uslovima, hematopoetski faktori deluju zdrueno i sa
stromalnim elijama kotane sri. Utvreno je da stromalne elije kotane
sri imaju znaajnu ulogu u proliferaciji i diferencijaciji matinih elija
kotane sri, odnosno da one mogu proizvoditi faktore rasta hematopoeze.
U toku hematopoeze, u odreenom trenutku samo mali broj matinih elija
kotane sri podlee diferenciranju, dok druge nastavljaju da se obnavljaju.
U organizmu se odrava precizna i delikatna raspodela izmeu ova dva
procesa kojima podleu matine elije kotane sri (diferenciranje i
obnavljanje), a smatra se da se ravnoa izmeu ova dva procesa regulie
kako vrstom prisutnih hematopoetskih faktora rasta, tako i njihovom
koncentracijom.

1. INTERLEUKINI KAO HEMATOPOETSKI FAKTORI RASTA

Od svih intereleukina smatra se da je IL-3 najznaajniji hematopoetski
faktor. On stimulie CFU-GEMM, a takoe stvaranje prekusorskih
elija bazofila, eozinofla i platela.
2. STIMULIRAJUI FAKTOR KOLONIJA GRANULOCITA (G-CSF)
G-CSF je glikoprotein kod koga je izvrena glikozilacija preko Oatoma. Njegova molekulska masa se kree oko 21 kDa. Molekul se
sastoji od 174 ili 177 amno kiselina (poznate su dve varijante koje se
malo razlikuju u duini lanca) i stabilizovan je prisustvom dve
disulfidne veze.
Prostorna struktura je slina sa IL-2 i u njoj se mogu izdvojiti 4
strukture -heliksa.
Mogu ga sintetisati razliite eijske vrste
On deluje kao faktor rasta i deferenciranja za neutrofile i njihove
elije prekursore. G-CSF deluje sinergistiki sa drugim
hematopoetskim faktorime rasta na stimulaciji i deferenciranju razliitih
krvnih i drugih prekursorskih elija.
Podstie proliferaciju i migraciju endotelnih elija.

Danas je determinisana struktura G-CSF receptora, koji predstavlja

jednostavan transmembranski polipeptid. Ovaj receptor se moe nai na
povrini neutrofila kao i razliitih drugih hematopoetskih prekusorskih elije,
platela, endotelnih elija, i to je znaajno, razliitih mijeloida leukemije
(mijeloid znai da potie od kotane sri; leukemija predstavlja kancerogeno
stanje kod koga je dolo do hiperprodukcije belih krvnih zrnaca u kotanoj sri
ili u drugim delovima organizma gde se vri sinteza krvnih elija). Bele krvne
elije koje se proizvode u organizmu obolelom od leukemije su nedovoljno

3.

STIMULIRAJUI FAKTOR KOLONIJA MAKROFAGA

(M-CSF)

M-CSF slui kao faktor rasta, deferenciranja i aktivirajui

faktor za makrofage i njihove prekursorske elije. Takoe je
poznat kao CSF-1. On se proizvodi u razliitim elijskim
vrstama.
Do sada su odreene 3 sline forme humanog M-CSF. Sve
tri su dobijene od istog gena i imaju isti C- i N- kraj. Najvei
od definisanih molekula ima 532 amino kiseline, dok su
druga dva kraa i sadre 406 i 224 amino kiseline
respektivno. Molekulske mase se kreu u opsegu od 45-90
kDa.
Bioloki aktivna forma M-CSF je homodimer.
M-CSF receptor predstavlja jednostavan polipeptidni lanac
koji je veoma glikoziliran, molekulske mase od 150 kDa.

4. STIMULIRAJUI FAKTOR KOLONIJA

GRANULOCITA-MAKROFAGA (GM-CSF)
GM-CSF je poznat i kao CSF-.
Po strukturi je glikozilirani polipeptid sa 127 aminokiselina,
molekulske mase 22 kDa
Trodimenzionalna struktura se sastoji od dimera sa 4 -heliksa i
dva antiparalelna -lanca.
Proizvode ga razne vrste elije
Najznaajnije bioloke funkcije su:

(GM-CSF)
Treodimenzionalna
struktura

stimulie matine elije da se diferenciraju u granulocite

(neutrofile, eozinofile i bazofile) i makrofage;
aktivira zrele krvne elije i ostvaruje:
opoveanje fagocitne aktivnosti;
opoveanje mikrobiocidne aktivnosti;
opoveanje anti-tumorne aktivnosti;
opoboljanje leukocitne hemotaksije (pokretljivosti).
oteko je odrediti koja mu je najznaajnija fizioloka
funkcija. (mievi sa izbaenim genom bili zdravi)

Pregled nekih osobina G-CSF, M-CSF i GM-CSF

G-CSF

M-CSF

GM-CSF

Molekulska masa
(kDa)

21

45-90

22

elije koje proizvode

Stromalne elije
kotane sri
Makrofag
Fibroblasti

Limfociti
Mioblasti
Osteoblasti
Monociti
Fibroblasti
Endotelne elije

Makrofagi
T limfociti
Fibroblasti
Endotelne elije

Osnovne ciljane elije

Neutrofili
Hematopoetske
Matine elije i
Endotelne elije

Makrofagi i njihove Hematopoetske

prekursorske elije matine elije
Granulociti
Monociti
Endotelne el.
Megakariociti
T limfociti
Eritrociti

-87-

Klinika primena CSF

Farmaceutski preparati na bazi CSF se koriste za

leenje bolesti koje se karakteriu poremeajima u
stvaranju krvnih elija
G-CSF i GM-CSF su pokazali dobre rezultate u leenju
neutropenije (smanjeni broj neutrofila kod infekcije,
leukemije i hemoterapije)
Sva tri tipa CSF su se pokazala korisnim i za leenje:
infektivnih bolesti,
nekih vrsta kancera i
stanja prilikom transplatacije kotane sri, posebno jer stimuliu
diferenciranje i aktiviraju bela krvna zrnca koja su najvie
ugroena u navedenim sluajevima.

Proizvod

Status

Indikacije

Kompanija

"Nepogen"
Odobren
(filgrastim; G-CSF) 1991
(E.coli)

Neutropenija usled
hemoterapije
Transplatacija kotane
sri

Amgen Inc.

"Leukin"
(filgrastim; GMCSF)
(S. cerevisiae)

Odobren

Autologna transplatacija
kotane sri
Regeneracija neutrofila
nakon transplatacije
kotane sri

Imunex

"Neulasta" (PEGfilgrastim)

Odobren
2002

Neutropenija

Amgen

GM-CSF

U klinikim
ispitivanjima

Stimulacija imunog
sistema kod malignog
melanoma,
Kronova bolest

Berlex

GM-CSF

U klinikim
ispitivanjima

Rekonstitucija mijeolida
nakon transplantacije
kotane sri

Cangene

-88- 5. ERITROPOETIN (EPO)

Eritropoetin stimulie sintezu crvenih krvnih zrnaca.
(odrastao ovek ima 2,3x1013 eritrocita). Primarna funkcija
crvenih krvnih zrnaca je transport O2 i CO2 ugljen dioksida
(hemoglobin gradi do 1/3 citoplazme eritrocita), kao i odravanje
pH krvi. Sintetiu se brzinom od 2,3 miliona elija/s i imaju
cirkulatorni ivot odoko 120 dana u toku koga predju 350 km.
Eritropoetin je atipini citokin po tome to deluje kao endokrini
hormon i to ga ne sintetiu krvne elije nego se sintetie u
bubrezima.
Eritropoetin je prvi put odobren kao terapeutski agens za
tetman anemije nastale usled hemoterapije kancera 1991.
godine. Prva kompanije koja je iznela na trite farmaceutski
preparat na bazi EPO pod nazivom "ProcritEPO" je bila
Johnson & Johnson, a proizvod je razvila kompanija Amgen.
Preparat se uglavnom administrira podkono ili intravenozno.
Kao sporedni efekat terapije moe se javiti poveanje
temperature organizma. Pored ovoga, EPO moe izazvati rizik
od stvaranja krvnih ugruaka, glavobolju, vrtoglavicu ili
muninu.

ERITROPOETIN (EPO)- hemijska struktura

Sinteza je u ovekovom organizmu
kodirana genom koji je smeten na 7
hromozomu.
Eritropoetin sadri 165 amino kiselina.
Oko 50 % molekula ima strukturu
heliksa. Eritropoetin je glikoprotein
(M=30-45 kDa) sa izuzetno visokim
sadrajem ugljenih hidrata (40 %), koji su
neophodni za potpunu aktivnost u in vivo
uslovima.
Utvrene su 3 N- glikoproteinske veze i jedna Oveza. Ova Ougljenohidratna jedinica ima esencijalnu ulogu u aktivnosti.
Delimino glikolizirani EPO je neefikasan i uklanja se iz cirkulacije pomou
jetre. eerna komponenta doprinosi rastvorljivosti molekula EPO, sekreciji i
procesovanju u eliji i znaajna je za in vivo metabolizam.

Komercijalni preparati na bazi EPO koji su dobili

dozvolu ili su u fazi klinikih ispitivanja
Proizvod

Status

Kompanija

"Prokrit EPO"
(rekombinantan EPO)

Odobren 1991
(CHO elije)

Amgen
Johnson & Johnson

"Epogen" (rekombinantan Odobren

EPO)

Ortho Biotech

"Neorecormon"

Odobren

BoehringerMannheim

"Aransep" (analog
rekombinantnog EPO)

Odobren

Amgen

"Nespo" (analog
rekombinantnog EPO)

Odobren

Dompe Biotec

Rekombinantan EPO

Klinika ispitivanja Aventis

EPO kao farmaceutik

Svi oblici EPO su prilino skupi. Tako, na primer, pacijent koji je na

dijalizi i kome je potreban ovaj tretman doivotno e plaati u SAD

oko $10,000 godinje, dok mesena terapija sa EPO u hemoterapiji
kota oko $1,000. Vrednost godinje prodaje EPO je u 2004. godini
iznosila preko $10 milijardi.

U novije vreme, upotreba EPO se sve vie iri. Koristi se za tretman

razliitih oblika anemija koje su pratei simptomi mnogih bolesti,
izmeu ostalih:
reumatoidnog artritisa,
malignih bolesti,
razliitih infekcija,
transplatacije kotane sri itd.

Pored terapeutskog korienja, korienje EPO-a je esto

zloupotrebljeno kao doping sredstvo za atlete i sportiste, zbog

osobine da poveava aerobnu respiraciju u miiima i tako
poveava izdrljivost i kompetitivnost sportista (biciklisti). Krajem
1980-tih i poetkom 1990-tih dogodilo se vie smrtnih sluajeva kod
biciklista kao posledica sranog udara (ugruci).

-89- 6. TROMBOPOETIN
Trombopoetin (TPO) je hematopoetski faktor rasta koji predstavlja
primarni fizioloki regulator stvaranja platela ili krvnih ploica.
Njegovo izolovanje i preiavanje iz krvi je bilo vrlo
komplikovano i gotovo nemogue izvesti zbog malih koliina
prisutnih u krvi i nedostatka adekvatnog biohemijskog testa za
TPO.
Njegovo prisustvo je potvreno tek nakon identifikacije i kloniranja
gena za njegovu sintezu sredinom 1990-tih godina.
Smatra se da ovaj faktor rasta moe biti dobar terapeutik za
leenje medicinskih stanja kod kojih dolazi do smanjene koliine
trombocita (platela), to je tek potrebno da se potvrdi u klinikim
ispitivanjima.
Platele (trombociti) imaju vie funkcija u organizmu koje su
uglavnom vezane za spreavanje krvarenja. One predstavljaju
ploaste elije prenika 1-2 m, a u krvi zdravih ljudi ih ima oko
250109/l. Nastaju u procesu diferenciranja matinih elija. U
poslednjoj fazi diferencijacije od magakariocita nastaju platele
koje dalje ulaze u cirkulaciju

IL-3
GM-CSF

IL-3

Matine
elije

CFUGEMM

CFUMEG
TPO

megakariociti

TPO
Platele

Uproeni prikaz proizvodnje platela od matinih elija.

CFU-magakariociti i zreli megakariociti su vrste elija
najosetljivije na stimulatorno dejstvo TPO.

TPO kao farmaceutik

Bolesti ili medicinska stanja koja se javljaju usled nenormalnih
koliina trombocita u krvi su
Trombocitemija koju karakterie poveana proliferacija trombocita,
to moe dovesti do spontanog stvaranja ugruaka. U sluaju kada su
trombociti defektni dolazi do produenog krvarenja.
Trobocitopenija se karakterie smanjenim brojem platela, a tipini
simptomi su stvaranje modrica u tkivu. Ona moe nastati usled
poremeeja kotane sri, hemoterapije, kao i usled razliitih infekcija.
Standardna terapija transfuzija se moe zemeniti administracijom TPO.

Glavni izvori TPO su bubrezi i miine elije, mada se primarno

proizvodi u jetri odakle se prenosi cirkulacijom krvi.
TPO ostvaruje svoju bioloku funkciju vezivanjem za receptore koji
su prisutni na povrini senzitivnih elija. Danas je poznata hemijska
struktura receptora, koji predstavlja jednostavan polipeptidni lanac,
glikoprotein sa 610 amino kiselina.
Trenutno se najmanje dva preparata rekombinantnog TPO nalaze u
klinikim ispitivanjima:
1. Jedan je rekombinantna glikozilirana forma koja je proizvedena u
elijama sisara,
2. Druga je neglikozilirana forma proizvedena pomou E.coli.