Puferi - regulatori pH vrednosti

1. Definicija i sastav pufera

Puferi su rastvori koji odravaju priblino stalnu pH vrednost pri razblaenju ili
Sadraj predavanja dodatku ogranienih koliina kiselina ili baza.

1. Definicija i sastav pufera Uslov je da sadre kiselu i baznu komponentu, koje meusobno ne reaguju, ali
2. Henderson-Hasselbalchova jednaina su u mogunosti da neutraliu H+ i OH- jone iz drugih izvora.
3. Mehanizam dejstva pufera
4. pH-opseg dejstva i kapacitet pufera Konjugovani kiselinsko-bazni par, u znaajnim koncentracijama, ima
5. Bioloki znaajni puferi navedene karakteristike (npr. siretna kiselina-acetatni jon ili amonijak-
6. Izbor odgovarajueg farmaceutskog pufera amonijum jon). Kisela komponenta reaguje sa dodatom jakom bazom, a bazna
7. Priprema pufera sa dodatom jakom kiselinom.
8. Primeri izraunavanja pH pufera
Puferski rastvori sadre smeu:
slabu kiselinu i njenu so (konjugovana baza)
slabu bazu i njenu so (konjugovana kiselina)
20 i 23-11-2015
Gordana Popovi
1 2

2. Henderson-Hasselbalchova jednaina
Acetatni pufer
Slaba kiselina i njena so Slaba baza i njena so
sastav: smea CH3COOH i so acetat (npr. NaCH3COO)
HA H+ + A- (reverzibilna reakcija) B + H2O BH+ + OH-
kiselinsko bazni par: CH3COOH CH3COO-
NaA Na+ + A- (potpuna disocijacija soli) BH+Cl- BH+ + Cl-
[CH3COO- ] baza (so)
- + + pH = pK a + log
[A ][H ] [BH ][OH ] [CH 3COOH] kiselina
K a (HA) = K b (B) =
[HA] [B]
Logaritmovanje
Logaritmovanje pOH = pKw pH pKa za CH3COOH (tablina vrednost)
pKb= pKw pKa
Henderson-Hasselbalchova jednaina Henderson-Hasselbalchova jednaina pK a = log K a CH 3COOH = log1,8 105 = 4,74

[konj. baza]
pH = pK a + log
[kiselina]
pKa - kiselinska konstanta kiseline u puferu
4
 Samo kod pufera se u jednaini za izraunavanje pH, umesto koncentracija
Amonijani pufer mogu uvrstiti koliine (broj molova):
n konj. baza
!!!
sastav: smea NH3 i amonijum so (npr. NH4Cl)
pH = pK a + log V
kiselinsko bazni par: NH3 NH4+ n kiselina
V
[NH3 ] baza
pH = pK a NH + + log + n konj. baza
4
[NH 4 ] kiselina (so)
pH = pK a + log
n kiselina
Ako se u tabelama ne navodi pKa za NH4+ izraunava se na osnovu K b NH
3

Kb (NH3)=1,810-5 pH pufera zavisi od:

pKa
1014 1014 odnosa [konj. baza]/[kiselina]
K a NH + = = = 5,6 1010
4 K b NH 3 1,8 105

pK a NH4+ = 9,26
Imaju istu pH vrednost:
ili
Pufer I. 0,1 mol/l HAc 0,2 mol/l NaAc
pK a NH 4 + = 14 pK b NH 3 = 14 4,74 = 9,26
Pufer II. 0,2 mol/l HAc 0,4 mol/l NaAc
5 6

Primer 1. Izraunati pH rastvora pufera koji u 500 ml sadri 0,1 mol NH3 i
0,05 mol NH4Cl. Kb (NH3)=1,810-5.

7 8
 3. Mehanizam dejstva pufera Dejstvo acetatnog pufera zasniva se na ravnotei:

CH3COOH CH3COO-
Pri dodatku malih koliina jakih kiselina ili jakih baza pH pufera se veoma velika konc. velika konc. (iz soli)
malo menja - pufer zadrava priblino stalnu pH vrednost HCl
Pufer se opire promeni pH vrednosti tako to prisutni konjugovani kiselinsko- NaOH
bazni par HA/A- ili BH+/B neutralie dodatu jaku kiselinu ili jaku bazu
Dodatak HCl: smanjuje se koncentracija CH3COO-
poveava koncentracija CH3COOH
Jedna komponenta (kiselina) konjugovanog para reaguje sa OH- jonima dodate
jake baze, a druga komponenta (konjugovana baza) sa H+ jonima dodate jake H+ + CH3COO- CH3COOH
kiseline Molekulski oblik jednaine:

HCl + NaCH3COO CH3COOH + NaCl

Dodatak NaOH: smanjuje se koncentracija CH3COOH

poveava koncentracija CH3COO-

CH3COOH + OH- CH3COO- + H2O

Molekulski oblik jednaine:
9 CH3COOH + NaOH NaCH3COO + H2O 10

Promene u sastavu pufera posle dodatka jake kiseline ili jake baze Dejstvo amonijanog pufera zasniva se na ravnotei:
velika konc velika konc (iz soli)

Konc. komponenti pufera su znaajnije vee od konc. dodatih HCl ili NH3 NH4 +

NaOH, zbog ega dolazi do malih promena koncentracija komponenti !!! HCl
pufera koje bitno ne menjaju pH pufera.
NaOH

Dodatak HCl: smanjuje se koncentracija NH3

Pufer koji sadri iste koncentracije kiseline i konjugovane baze
poveava koncentracija NH4+
NaCH3COO
H+ + NH3 NH4+
CH3COOH CH3COO- CH3COOH CH3COO-
Molekulski oblik jednaine:

+ NaOH + HCl HCl + NH3 NH4Cl

HAc + OH- Ac- + H2O Ac- + H+ HA

Dodatak NaOH: smanjuje se koncentracija NH4+
CH3COOH CH3COO- CH3COOH CH3COO-
poveava koncentracija NH3
Jo uvek puferi, ali sa drigim odnosom koncentracija kiseline i konjugovane baze NH4+ + OH- NH3+ H2O

Molekulski oblik jednaine:

NH4Cl + NaOH NH3 + H2O + NaCl
11 12
 Efikasnost pufera u odbrani svoje pH vrednosti najbolje ilustruje poreenje Dodatak HCl i NaOH u acetatni pufer
promene pH vrednosti pri dodatku iste koliine HCl ili NaOH u destilovanu
vodu i u pufer Pufer: 0,1 mol/l CH3COOH i 0,1 mol/l NaCH3COO

Dodatak HCl i NaOH u destilovanu vodu

a) pH pufera
a) Destilovana voda

b) 1 l destilovane vode + 0,01 mol HCl

c) 1 l destilovane vode + 0,01 mol NaOH

13 14

b) 1 litar pufera (0,1 mol CH3COOH i 0,1 mol NaCH3COO) c) 1 litar pufera (0,1 mol CH3COOH i 0,1 mol NaCH3COO)
+ 0,01 mol HCl + 0,01 mol NaOH

15 16
Sumarno: Uticaj razblaenja na pH pufera

[konj. baza]
Dodatak 0,01 mol HCl u 1 litar: pH pH = pK a + log
[kiselina]
destilovane H2O
Razblaenjem pufera:
acetatnog pufera ne menja se odnos [konj. baza]/[kiselina]
pH pufera se ne menja*

Dodatak 0,01 mol NaOH u 1 litar:

destilovane H2O

acetatnog pufera

*GP primedba. Ako striktno uzmemo da je pH negativni logaritam aktiviteta H+, u

rastvorima sa veom koncentracijom soli vea je jonska sila, zbog ega je aktivitet manji.
U sluaju da nije naglaeno drugaije, u svim razmatranjima jonskih rastvora uticaj jonske
sile je zanemaren i aktivitet je izjednaen sa koncentracijom.
17 18

4. pH-opseg dejstva i kapacitet pufera

pH vs HCl dodata u destilovanu vodu i pufer

pH opseg puferskog dejstva: pH = pKa 1 !!!! 7

6
Pufer je efikasan u granicama odnosa [konj. baza]/[kiselina] = 1/10 do 10/1 Pufer + HCl
5
[konj. baza] [konj. baza] 4
pH = pK a + log pH
[kiselina] [kiselina] 3
1 pH = pKa Voda + HCl
2
10/1 pH = pKa + 1
1
1/10 pH = pKa 1 10
-6
10
-5
10
-4
10
-3
10
-2 -1
10
moli HCl dodati u 1 l
Pufer pKa pH-opseg
Acetatni 4,74 (CH3COOH) 3,7 5,7
Komentar za promenu pH pri dodatku HCl u vodu i pufer:
Fosfatni 7,21 (H2PO4 -) 6,2 8,2
Amonijani 9,26 (NH4+) 8,3 10,3
Zato je dolo da velikog snienja pH pri dodatku 0,1 mol HCl u pufer?

19 20
 Puferski kapacitet () - sposobnost pufera da se opire promeni pH vrednosti
Kapacitet pufera zavisi od:
koncentracije pufera (cpufer = [konj. baza] + [kiselina])
(ako dva pufera imaju isto pH, vei kapacitet ima pufer vee koncentracije)
5. Bioloki znaajni puferi
Telesne tenosti sadre puferske sisteme koji odeavaju pH priblino 7,4
In vivo vrednosti pH < 6,9 ili pH > 7,8 mogu da ugroze ivot

odnosa koncentracija komponenti ([konj. baza]/[kiselina]) Najzastupljeniji endogeni (prirodni) puferski sistemi su:
(ako dva pufera imaju istu koncentraciju, vei kapacitet ima pufer kod koga
je odnos [ konj. baza]/[kiselina] blii 1) - hidrogenkarbonatni H2CO3/HCO3- (CO2 aq /HCO3-)

Puferski kapacitet je najvei na pH = pKa - fosfatni H2PO4-/HPO42-

[konj. baza]/[kiselina] = 1
- proteinski (amino-kiseline proteina sadri funkcionalne grupe
Udaljavanjem pH pufera od pKa vrednosti ili smanjenjem koncentracije
koje deluju kao slabe kiseline ili baze)
pufera smanjuje se puferski kapacitet

Primer 1. Koji pufer ima vei kapacitet? Primer 2. Koji pufer ima vei kapacitet?
A) acetatni pufer c=0,2 mol/l, pH=4,50 A) acetatni pufer c=0,1 mol/l, pH=5,50
B) acetatni pufer c=0,2 mol/l, pH=5,50 B) acetatni pufer c=0,2 mol/l, pH=5,50

21 22

Fosfatni pufer (H2PO4- - HPO42-)

Sa HCl reaguje Na2HPO4 , odnosno HPO42- :

Vodeni rastvor smee NaH2PO4 i Na2HPO4: HPO42- + H+ H2PO4-

kiselina
U molekulskom obliku: Na2HPO4 + HCl NaH2PO4 + NaCl
NaH2PO4 Na+ + H2PO4- konjugovana
baza Sa NaOH reaguje NaH2PO4, odnosno H2PO4- :
Na2HPO4 2Na+ + HPO42-
H2PO4- + OH- HPO42- + H2O
2-
[HPO 4 ]
pH = pK a (H PO - ) + log -
H3PO4
2 4
[H 2 PO 4 ] U molekulskom obliku: NaH2PO4 + NaOH Na2HPO4 + H2O
Ka1= 7,510-3
Ka2 = 6,210-8 (pKa2= 7,21)
[Na 2 HPO 4 ]
pH = pK a (H PO - ) + log Ka3 = 4,810-13
2 4
[NaH 2 PO 4 ]

23 24
Hidrogenkarbonatni pufer (CO2 aq HCO3-) H-H jednaina za bikarbonatni pufer za 37 oC (fizioloki uslovi) :

-
CO2 aq i HCO3- ili H2CO3 i HCO3- [HCO 3 ] VANO !!!!
pH = 6,1 + log PATOFIZIOLOGIJA
kH x pCO 2
BIOHEMIJA
kH=0,03 p [mmHg]
Henrijev zakon kH=0,23 p [kPa]
gasovita faza CO2 (g)

vodeni rastvor CO2 (aq) + H2O H2CO3 HCO3- + H+ pK = 6,1 (37oC) Odnos koncentracija komponenata pufera na fiziolokom pH 7,4
-
99% 1% konjugovana baza [HCO 3 ]
kiselina log = 7,4 - 6,1
kH x pCO 2
-
[HCO 3 ] -
pH = pK + log log
[HCO 3 ]
= 1,3
kH x pCO 2 kH x pCO 2
-
pCO2 parcijalni pritisak CO2 [HCO 3 ] [HCO 3 ] 20
= 101,3 =
kH koeficijent rastvorljivosti kH x pCO 2 kH x pCO 2 1
(Henrijeva konstanta)

25 26

Pomeranje ravnotea pri dodatku H+ (kiselina) ili OH- (baza):
+ -
CO2 (aq) + H2O H2CO3 H + HCO3
CO2 (g)
plua
H+ joni pomeraju ravnoteu na levo
- H+ joni se vezuju za HCO3- i nastaje CO2
- HCO3- se nadoknauju reapsorpcijom iz bubrega,
a nastali CO2 se izbacuje preko plua
OH- joni pomeraju ravnoteu na desno
- OH- reaguju sa CO2 i nastaje HCO3-
6. Izbor odgovarajueg farmaceutskog pufera
Izabrati slabu kiselinu (molekulsku, anjonsku ili katjonsku)
pKa zadato pH
bubrezi
Primenom HH jednaine izraunati odnos koncentracija
baza/kiselina za zadato pH
[konj. baza]
pH = pK a + log
[kiselina]
Izabrati koncentraciju pufera za odgovarajui kapacitet
(uobiajene koncentracije pufera od 0,05 do 0,5 mol/l)
cpufer = [konj. baza] + [kiselina]
Izabrati sastojke vodei rauna o stabilnosti, toksinosti,
moguim interakcijama, sterilnost (ako je potrebno), ceni
pH-metrom proveriti pH napravljenog pufera
27 28
 7. Priprema pufera PRIMERI IZRAUNAVANJA

1. Priprema pufera direktno meanjem komponenti pufera

1. Direktno meanjem komponenti pufera
Koliko je grama NaH2PO4 potrebno dodati u 100 ml 0,05 mol/l rastvora
rastvaranjem u vodi potrebnih koliina komponenti Na2HPO4 da bi nastao pufer pH=7,40?
(npr. NaH2PO4 i Na2HPO4 za fosfatni pufer)
n(konj. baza) Fosforna kiselina
dodatak jedne vrste komponente u rastvor druge komponente pH = pK a + log
(npr. vrst natrijum-acetat u rastvor siretne kiseline; vrst amonijum-hlorid u n(kiselina) Ka1= 7,510-3 H3PO4
rastvor amonijaka) 2- Ka2 = 6,210-8 H2PO4-
[HPO 4 ]
pH = pK a (H PO - ) + log Ka3 = 4,810-13 HPO42-
meanjem vodenih rastvora komponenti pufera 2 4
-
[H 2 PO 4 ]

2. Parcijalnom neutralizacijom (reakcijom) [Na 2 HPO 4 ]

pH = pK a (H PO - ) + log
2 4
[NaH 2 PO 4 ]
slabe kiseline sa jakom bazom; slabe baze sa jakom kiselinom
(npr. viak siretne kiseline i NaOH; viak amonijaka i HCl) n(Na 2 HPO 4 )
pH = pK a (H PO - ) + log pKa = -log 6,210-8 = 7,21
soli slabe kiseline sa jakom kiselinom; soli slabe baze sa jakom bazom 2 4
n(NaH 2 PO 4 )
(npr. viak natrijum-acetata i HCl; viak amonijum-hlorida i NaOH)
n (Na2HPO4 ) = 0,005 mol
3. Od ve postojeeg pufera
0,005 mol
7,40 = 7,21 + log
29
n(NaH 2 PO 4 ) 30

0,005 mol 2. Priprema pufera parcijalnom neutralizacijom

0,19 = log
n(NaH 2 PO 4 ) a) Izraunati zapreminu 1 mol/l HCl koju treba dodati u 100 ml rastvora Na2HPO4
koncentracije 0,2 mol/l za pripremu pufera pH 7,40.
0,005 mol
100,19 = n (Na2HPO4) = 0,02 mol
n(NaH 2 PO 4 )

0,005 mol Na2HPO4 + HCl NaH2PO4 + NaCl

1,55 =
n(NaH 2 PO 4 ) Poetak (mol) 0,02 x 0
Promena (mol) -x -x +x
Mr = 120
n(NaH 2 PO 4 ) = 3,23 10-3 mol 0,388 g NaH2PO4 Ravnotea (mol) 0,02-x 0 x

n(Na 2 HPO 4 )
7,40 = 7,21 + log H2PO4- Ka = 6,210-8
n(NaH 2 PO 4 )
pKa = 7,21

n(Na 2 HPO 4 ) (0,02 - x)

1,55 = 1,55 =
n(NaH 2 PO 4 ) (x)

31 x=0,00784 mol (HCl) 32

 b) Izraunati zapreminu 1 mol/l NaOH koju treba dodati u 100 ml rastvora NaH2PO4
1 mol/l HCl
koncentracije 0,2 mol/l da bi nastao pufer pH 7,40.
n
c=
V
n 0,00784mol
V= = = 0,00784 l = 7,84 ml
c 1 mol/l

33 34

3. Pripremanje pufera od ve postojeeg

Koliko ml rastvora 1 M NaOH treba dodati u 100 ml pufera koji sadri 0,02 mol
NaH2PO4 i 0,01 mol Na2HPO4 da bi se dobio pufer pH 7,40?

35 36
 8. Izraunavanje pH u rastvoru pufera

1. Izraunati pH rastvora nastalog meanjem 100 ml 0,2 mol/l NaH2PO4 i 100 ml

0,1 mol/l Na2HPO4.

0,02 mol NaH2PO4

pufer
0,01 mol Na2HPO4

n(Na 2 HPO 4 )
pH = 7,21 + log H2PO4- Ka = 6,210-8
n(NaH 2 PO 4 )
pKa = 7,21
0,01 mol
pH = 7,21 + log
0,02 mol

pH = 7,21 - 0,30 = 6,91

37 38

2. Izraunati pH rastvora nastalog meanjem 100 ml 0,2 mol/l NaH2PO4 i 40 ml 3. Izraunati pH rastvora nastalog meanjem 100 ml 0,2 mol/l Na2HPO4 i 50 ml
0,2 mol/l NaOH. 0,1 mol/l HCl.

0,02 mol NaH2PO4

0,008 mol NaOH

NaH2PO4 + NaOH Na2HPO4 + H2O

Poetak (mol) 0,02 0,008 0
Promena (mol) -0,008 -0,008 +0,008
Ravnotea (mol) 0,012 0 0,008

Pufer nastaje u reakciji

n(Na 2 HPO 4 )
pH = 7,21 + log H2PO4- Ka = 6,210-8
n(NaH 2 PO 4 )
pKa = 7,21
0,008
pH = 7,21 + log = 7,03
0,012
39 40
 4. Izraunati pH rastvora koji nastaje kada se 50 ml 0,1 mol/l HCl doda u 200 ml Za vebanje
pufera koji sadri 0,04 mol NaH2PO4 i 0,02 mol Na2HPO4.

Tabline vrednosti
Kiselina Ka pKa
CH3COOH 1,810-5 4,74
H3PO4 Ka1= 7,510-3 2,1
Ka2 = 6,210-8 7,2
Ka3 = 4,810-13 12,4

Baza Kb pKb
NH3 1,810-5 4,74
Tris 2,010-6 5,70

41 42

Pitanja 7. Koji kiselinsko-bazni par je nosilac puferskog dejstva na pH 6,5?

CH3COOH/ CH3COO
1. Od ega zavisi pH vrednost pufera.
NH4+/NH3
2. U kom odnosu molova treba pomeati NaCH3COO i CH3COOH da bi dobili pufer pH 5,2? H3PO4/H2PO4
H2PO4/HPO42
3. U kom odnosu zapremina treba pomeati rastvore NaCH3COO i CH3COOH istih HPO42/ PO43
koncentracija da bi dobili pufer pH 5,2? TrisH+/Tris

Od kojih supstanci bi mogli da napravite taj pufer?

4. Uporediti pH vrednosti pufera koji u 100 ml sadre :
Pufer A) 0,05 mol NH3 i 0,05 mol NH4Cl Pomo: direktnim meanjem komponenti pufera, parcijalnom neutralizacijom, od ve postojeeg
Pufer B) 0,5 mol NH3 i 0,5 mol NH4Cl

5. Uporediti kapacitete pufera koji imaju istu koncentraciju, a sadre:

Pufer A) 0,05 mol/l NH3 i 0,05 mol/l NH4Cl Zadaci
Pufer B) 0,03 mol/l NH3 i 0,07 mol/l NH4Cl
1. U 500 ml pufera rastvoreno je 3 g NaH2PO4 i 7,1 g Na2HPO4. Izraunati pH i
6. Koji je pH opseg dejstva Tris pufera? koncentraciju pufera.

+ 2. a) Ako se u pufer u zadatku 1. doda 100 ml 0,01 mol/l HCl, izraunati promenu pH (pH).
NH3 OH NH2 OH b) Ako se u 500 ml destilovane vode doda 100 ml 0,01 mol/l HCl, izraunati promenu
HO OH HO OH pH vode (pH).
TrisH+ Tris
43 44
 2. Henderson Hasselbalch jednaina
Slaba kiselina - so slabe kiseline na primeru CH3COOH - NaCH3COO

NaCH3COO Na+ + CH3COO- (potpuna disocijacija soli)

PRILOG CH3COOH H+ + CH3COO-
(reverzibilna reakcija)
(izvoenje HH jednaine) suzbijanje jonizacije slabe kiseline
(uticaj zajednikog jona)

[CH 3 COO - ][H + ]

K a (CH 3COOH) =
[CH 3 COOH]

U optem obliku:

[A - ][H + ] [HA]
Ka = [H + ] = K a
[HA] [A - ]

[HA] [A - ]
- log [H + ] = log K a log pH = pK a + log
[A - ] [HA]

[konjugovana baza]
pH = pK a + log
[kiselina]
45 46

Slaba baza - so slabe baze na primeru NH3 - NH4Cl

NH4Cl NH4+ + Cl- (potpuna disocijacija soli)

NH3 + H2O NH4+ + OH- (reverzibilna reakcija)
suzbijanje jonizacije slabe baze
(uticaj zajednikog jona)

+
[NH 4 ][OH ]
K b (NH3 ) =
[NH 3 ]

U optem obliku:

[BH + ][OH ] [B]

K b (B) = [OH ] = K b
[B] [BH+ ]
[B]
- log [OH ] = log K b log
[BH + ]
[BH + ]
pOH = pK b + log pH = pKw - pOH
[B]
+
[BH ]
pH = pK w pK b log
[B]
[B]
pH = pK a (BH + ) + log
[BH + ]
[konjugovana baza]
pH = pK a + log 47
[kiselina]