TRƯỜNG ĐẠI HỌC KĨ THUẬT Y TẾ HẢI DƯƠNG

KHOA XÉT NGHIỆM

HỌC PHẦN: VI SINH 2

BÁO CÁO THỰC HÀNH

Xác định vi khuẩn từ đĩa cấy cho trước

-Thành viên nhóm 1 – tổ 5 – XN10A

1.Đinh Thanh Hằng

2.Nguyễn Thị Mỳ
3.Hoàng Thị Hoài My
4.Lò Thị Linh
1. NHẬN MẪU
- Ngày làm: 22/4/2019
- Ngày nhận mẫu: 8h ngày 22/4/2019
- Có khuẩn lạc riêng rẽ trên thạch Chocolate agar
- Nhận diện đại thể (đặc điểm mẫu) : khuẩn lạc dạng M, nhầy, ướt, xù xì,
kích thước 3 – 4 mm.

2. Tiến hành
2.1 Chuẩn bị
- Dụng cụ: bộ dụng cụ nhuộm gram, lam kính , ống nghiệm, que cấy, đèn
cồn, kính hiển vi…
- Hóa chất: thuốc nhuộm Gram ( tím gentian, lugol, cồn 90, fucshin kiềm
), NaCl 0,9%, dầu soi…
- Môi trường: thạch thường
- Bộ tính chất sinh vật hóa học: 1 ống KIA, 1 ống Citrat Simmons, 1 ống
Manit di động, 1 ống Ure – Indol, 2 ống Clark – lubs.
- Bệnh phẩm: Mẫu đã nhận
2.2 Quy trình
2.2.1 Nhuộm soi trực tiếp
- Thời gian bắt đầu tiến hành: 9h30 ngày 22/4/2019
- Đánh dấu lam kính theo thông tin đĩa mẫu
- Nhỏ 1 giọt nước muối sinh lí vào giữa lam kính
- Dùng que cấy vô trùng lấy 1 ít vi khuẩn tại khuẩn lạc riêng rẽ từ đĩa
mẫu hòa vào giọt nước muối sinh lí.
- Để khô tự nhiên
- Hơ cắt qua ngọn lửa đèn cồn từ 3-5 lần để cố định vi khuẩn
- Nhuộm gram (phủ tím gentian kín bệnh phẩm để 45-60s → rửa nước
→ phủ lugol 30-45s → rửa nước→ tẩy cồn 15-30s ( tùy theo dàn bệnh
phảm dày hay mỏng mà thời gian tẩy cồn khác nhau) → rửa nước →
phủ fucshin kiềm 30-45s → rửa nước, để khô ).
- Quan sát ở vật kính x100 bằng dầu soi.
- Nhận định lam nhuộm : Vi khuẩn bắt màu fucshin , hình dạng cầu trực
khuẩn đứng riêng rẽ hoặc tụ lại với nhau, có nhìn thấy lớp vỏ bao
quanh.
- Kết luận ban đầu: Cầu trực khuẩn gram (-)
 2.2.2 Nuôi cấy
- Thời gian nuôi cấy: 10h ngày 22/4/2019
- Dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn tại vị trí khuẩn lạc riêng rẽ từ đĩa
mẫu và tiến hành ria cấy vi khuẩn vào môi trường thạch thường.
- Mỗi đĩa thạch cấy 3 vùng rõ ràng, thưa dần, yêu cầu 3 vùng rõ ràng,
không cày thạch, không bị nhiễm từ môi trường ngoài vào, …
- Nuôi cấy trong điều kiện 37◦C ( trong tủ ấm nuôi vi khuẩn), đọc kết
quả sau 18-24h.

2.2.3 Nhận định kết quả: trên môi trường thạch thường, khuẩn
lạc dạng M, xù xì, nhày, ướt, đường kính 3-4mm.
 Xác định vi khuẩn từ đĩa nuôi cấy
2.2.4
Thử test oxydase : Nhỏ 1 giọt nước muối sinh lí lên lam kính sạch,
dùng bơm kim tiêm sạch, vô khuẩn lấy khoanh giấy oxydase thấm
nước muối sinh lí, bắt vi khuẩn từ đĩa thạch nghiền vào khoanh giấy,
- Quan sát khoanh giấy
- Đánh giá nhận xét kết quả: khoanh giấy không chuyển màu

Oxydase (-)
Cấy chuyển vi khuẩn sang bộ tính chất sinh vật hóa học
- Cấy lần lượt vào các ống trong bộ sinh vật hóa học
- Thời gian cấy: 10h30 ngày 22/4/2019
- Theo dõi liên tục sự phát triển của vi khuẩn trong khoảng 18 – 24h, sau
24h đọc bộ tính chất của vi khuẩn trên các ống KÍA, Citrat Simmons,
Manit di động, Ure – Indol, Clark – lubs.
Đọc kết quả : 10h ngày 23/4/2019
-KIA: Phần chân thạch chuyển từ màu đỏ sang màu vàng→vi khuẩn lên
men glucose (glucose(+))
Phần lưỡi thạch chuyển từ đỏ sang vàng→vi khuẩn lên men
lactose (lactose(+))
Chân thạch có hiện tượng đẩy thạch lên → vi khuẩn sinh hơi
( Hơi(+))
-Citrat Simmon: thạch chuyển từ màu xanh lá cây sang màu xanh
nước biển→ vi khuẩn có khả năng sử dụng Citrat ( Citrat(+))
 -Manit di động: phần thạch chuyển từ đỏ sang vàng→ vi khuẩn lên
men đường manitol ( manit (+))
-Di động: Vi khuẩn không mọc theo đường cấy và không lan ra bên
ngoài đường cấy→ di động (-)
 +Ure – Indol:
- Ure: môi trường chuyển từ đỏ sang hồng cánh sen→ Ure (+)
- Indol: Indol (-) do nhỏ kowac vào tạo váng màu cam chứ không
phải màu đỏ tươi
 +Clark – lubs :
- MR: nhỏ thuốc thử đỏ methyl thấy môi trường chuyển màu vàng đậm
( MR (-))
- VP(+)
3. Xác định vi khuẩn
- Cầu trực khuẩn gram (-)
- Oxydase (-)
- Glucose (+), lactose(+), sinh hơi (+), H2S (-)
- Manit (+), di động (-)
- Ure (+), Indol(-)
- RM(-), VP(+)

 Dựa vào các tính chất đã tiến hành thử nghiệm, nhóm đã xác định ra
vi khuẩn:

klebsiella