Vércsoport-szerológiai kompatibilitási vizsgálat

sorozat
A vérkészítmények kompatibilitása

Transzfúzió felelős tanfolyam

2021.03.01.
dr. Gazdag Éva
Országos Vérellátó Szolgálat
(elérhetőség: gazdag.eva@ovsz.hu)
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

●Kompatibilitás:
a donor vörösvérsejtjei a recipiens
keringésében normális túlélést mutatnak

●Szerológiai kompatibilitás
a recipiens savójában nem mutatható ki
ellenanyag a donor valamely vörösvérsejt
antigénje ellen
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Cél: - (azonnali) hemolitikus transzfúziós reakció

megelőzése
- alloimmunizáció megelőzése (RhD)
Inkompatibilis vörösvérsejt készítmény
transzfúziójakor:
- a recipiens keringő antitestje a donor vörösvérsejt
antigénjével lép reakcióba: major inkompatibilitás
Inkompatibilis plazmatartalmú készítmény
transzfúziójakor:
- a donor antitestje a recipiens vércsoport antigénjével
lép reakcióba: minor inkompatibilitás
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

A kompatibilitási vizsgálat sorozat elemei:

- Laboratóriumi ABO és RhD meghatározás
(typing)
- Ellenanyagszűrés (screening)
/pozitív ellenanyagszűrés esetén ellenanyag
azonosítás, szükség esetén további vizsgálatok/
- Direkt antiglobulinteszt (DAT)= direkt Coombs

- Választott vörösvérsejt készítmény igény esetén

laboratóriumi keresztpróba
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Laboratóriumi ABO/RhD meghatározás

- ún. kétoldalas ABO meghatározás
- recipiens vörösvérsejtjeinek felszínén lévő ABO
antigén(ek),valamint a savójában lévő reguláris
anti-A és/vagy anti-B ellenanyagok meghatározása
(Landsteiner-szabály teljesülése)
RhD meghatározás
- recipiens vörösvérsejtjeinek felszínén lévő D
antigén tulajdonság meghatározása

Inkompatibilitás elkerülése antigén vizsgálatok

eredményén alapul!
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Ellenanyagszűrés
Célja: a klinikailag jelentős irreguláris
antitestek kimutatása
Vércsoport rendszerek: Antigénjeik:
Rh D, C, E, c, e, (Cw)
Kell Kell, Cellano, (Kp a, Kpb)
Duffy Fya, Fyb
Kidd Jka, Jkb
MNSs M, N, S, s
Lewis Lea, Leb
P P1
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Klinikailag jelentős antitest: okozott már MÚHB-t,

és/vagy hemolitikus transzfúziós szövődményt vagy
legalábbis a transzfundált vörösvérsejtek
élettartamának jelentős rövidülését.

Az ABO/RhD antigénektől eltekintve a inkompatibilitás

elkerülése antitest vizsgálatok=ellenanyag-szűrés
eredményén alapul, előzetes dokumentáció hiányában
vagy korábbi negatív eredmény esetén

egységes informatikai rendszer és

transzfúziós anamnézis fontossága
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Direkt antiglobulinteszt (direkt Coombs)

- a vörösvérsejtek in vivo bekövetkezett
IgG/komplement (C3d) fedettségének kimutatása
- a 3 hónapon belül transzfundált recipiensben az
alloimmunizáció első (vagy egyetlen) jele lehet
Pozitív DAT gyakori egyéb okai:
- Donor antitestje a recipiens vörösvérsejt antigénje ellen
- Autoantitestek (hideg, meleg AIHA)
- Gyógyszerek hatására különféle mechanizmusokkal
- IVIG és egyéb készítmények (pl. ATG, ALG heterophil
antitestjei)
- Passenger limfocita szindróma (PLS) csontvelő- és
szervtranszplantáltaknál
- MÚHB (magzatokban,újszülöttekben)
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Laboratóriumi vércsoport meghatározás

ellenanyag-szűrés nélkül, illetve
ellenanyag-szűrés ABO/RhD meghatározás
nélkül nem érvényes,
nem végezhető el!
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Ellenanyag azonosítás
- pozitív ellenanyag-szűrés esetén törekedni kell
az antitest vércsoport-specificitásának
meghatározására

- pozitív ellenanyag-szűrés esetén Rh és Kell antigén

tipizálás is történik, ebben az esetben a választott
vörösvérsejt készítményeket ABO és RhD
antigéneken kívül ezen antigénekre is megfeleltetjük
(amely antigénre a recipiens negatív, a donor is legyen
az)
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Laboratóriumi keresztpróba
- recipiens savója tartalmaz-e ellenanyagot a
donor vörösvérsejt antigénjei ellen

- kis gyakoriságú antigének (amely antigéneket a

szűrő panel vörösvérsejtjei csak esetlegesen
hordoznak és/vagy tipizálva nincsenek rá) elleni
antitestek kimutatása a laboratóriumi
keresztpróbán alapul
 Vércsoport szerológiai kompatibilitás

Eredményközlés=vércsoport szerológiai lelet

Tartalmazza: az ABO, RhD vizsgálat,
ellenanyagszűrés, direkt antiglobulinteszt,
pozitív ellenanyagszűrés esetén az
azonosítás és további vizsgálatok eredményét és
a transzfúziós utasítást, mely (kompatibilitás
szempontjából) megjelöli, hogy mely antigénekre
elvárt, hogy a választott vörösvérsejt-készítmény
negatív legyen.
Valamennyi ezt követő vörösvérsejt-transzfúzióra
érvényes!
 Kompatibilitási vizsgálatok
érvényessége

Immunizáló esemény vérminta levételétől számított

(sejtes készítmény transzfúziója
terhesség, transzplantáció)

3 hónapon belül nem történt 1 hét

3 hónapon belül történt 72 óra

2 héten belül történt 72 óra, de minél rövidebb

idő teljen el a mintavétel és
transzfúzió között
Vércsoport szerológiai vizsgáló módszerek
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Szerológiai vizsgálatok:
- antigén (sejt felszínén) és antitest (savóban)
reakcióján alapulnak (specifikus kötődés)

In vitro antigén-antitest reakció kifejeződhet mint

- agglutináció
- szenzitizálódás agglutináció nélkül
- komplement-közvetítette hemolízis
- komplementfixáció hemolízis nélkül
Vércsoport szerológiai vizsgáló módszerek
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Antigén (öröklött tulajdonság) kimutatása:

●

ismert specificitású antitesttel (tesztsavó)

● Antitest (szerzett tulajdonság) kimutatása,

azonosítása:
ismert antigén tulajdonságú sejttel
(tesztsejt)
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Antigén-antitest reakció in vitro kimutatása

- agglutináció: az antitestek hidakat
képeznek a szomszédos vörösvérsejtek
antigéndeterminánsai között
- direkt (ABO meghatározás)
- indirekt (IAT alkalmazásával)
- hemolízis
- vörösvérsejtek feloldódása
- komplementaktiváció szükséges
- oszlopaffinitás módszer
Direkt-indirekt agglutináció
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Agglutináció: kétlépcsős folyamat

1. szenzitizálódás: az antitest hipervariábilis
régiójával a vörösvérsejt
antigéndeterminánsaihoz (epitóp) kötődik

2. az érzékenyített sejtek közötti hidak

kialakulása: rácsszerkezet
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Agglutinációt befolyásoló tényezők:

1. szakasz
- hőmérséklet (IgM: 4-27°C, IgG: 37°C)
- pH: optimális:7,0 (pufferolt sóoldatok alkalmazása)
- inkubáció időtartama (antitestfelvétel egyensúlyi
állapotba kerüléséig)
- ionerősség (alacsony ionerősség mellett az antitest
felvételi sebessége nő)
- antitest/antigén arány

2. szakasz - sejtek közötti távolság

 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

In vitro technikák az agglutináció elősegítésére,

felerősítésére

1. LISS (low ionic strength solution) alkalmazása

- rövidebb inkubációs idő (60 percről 15 percre)
- felerősödött érzékenység (több antitest kötődik)

az agglutináció 1. szakaszában van szerepe

 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek
2. AHG (antihumánglobulin)-Coombs savó
alkalmazása
- direkt: in vivo sejtekhez kötődött immunglobulinok
kimutatása
- indirekt: in vitro létrejött immunglobulin-fedettség
kimutatása
Az agglutináció 2. szakaszában, a rácsszerkezet
kialakításában van szerepe.
Előállítási technológiát tekintve: poliklonális, monoklonális
Specificitását tekintve: polispecifikus, monospecifikus
Mindennapi gyakorlatban anti-IgG+anti-C3d tartalmú AHG-t
használunk, az antikomplement-tartalom segít a Kidd antitestek
kimutatásában, hátránya,hogy klinikailag nem jelentős antitestek
(pl. hideg típusúak) kimutathatóságát is fokozza.
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

3. Enzimatizálás
- Vörösvérsejtek kezelése papainnal, bromelinnel
(fehérjebontó enzimek)
- Kétfázisú enzimteszt: a sejteket enzimmel
előkezelik, majd az előkezelt sejtekhez adják a
savót
(egyfázisú: a sejt-savó keverékhez közvetlenül adják
az enzimet)
- előny: felerősíti az antitestreakciót (Rh, Kidd)
- hátrány: bizonyos antigének (Fya, Fyb, M, N, s)
károsodnak
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

3. Enzimatizálás (folytatás)
- feltételezett szerepe
1. - az első szakaszban:
vörösvérsejtek felszínéről kitüremkedő
polipeptidek lehasítása révén jobb hozzáférést
biztosít az antitestek számára
2. - a második szakaszban:
csökkenti a vörösvérsejtek felszíni töltését azáltal,
hogy szialoglikoproteineket hasít le, az effektív
töltés csökkentésével a sejtek közelebb kerülnek
egymáshoz
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Oszlopaffinitás módszer:
- nem agglutináción vagy hemolízisen alapul

Az affinitás mátrixba ágyazott gél partikulumok

fedettek:
- protein G-vel: IgG antitestet köt
- anti-C3d-vel: komplementdependens IgG-t köt
- anti-IgM-mel: IgM antitestet köt (37°C-on reaktív)
Affinitás matrix
Reakcióerősség, értékelés
● 4+ reakció:
valamennyi sejt a géloszlop
tetején (fennakad a
mátrixban)
● 3+, 2+, 1+ reakció:
sejtek a géloszlop tetején és
alján is
● negatív reakció
valamennyi sejt a géloszlop
aljára kerül a centrifugálás
után
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Laboratóriumi ABO meghatározás:

Antigén meghatározás: („bal oldal”)
- recipiens vörösvérsejt szuszpenziója + anti-A,
anti-B, anti-AB tesztsavók
Antitest kimutatás: („jobb oldal”)
- recipiens savója (plazmája) + A1, A2, B, O
csoportú vörösvérsejtek szuszpenziója

Módszerek: lemezes, csöves, microplate és

oszlopagglutináció
 a vvs- k a savó
antigén reguláris
anti-A anti-B anti-A,B kontroll A1 A2 B 0 tulajdonsága antitest
tartalma

“0” anti-A,B

- - - - + + + -

“A” anti-B

+ - + - - - + -

“B” anti-A

- + + - + + - -

“AB” --
+ + + - - - - -
Dr. Szabó János Elemér anyaga
AB0 vércsoport-meghatározás eredménye
 ABO/RhD meghatározás
oszlopagglutinációs módszerrel
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

RhD meghatározás
- Anti-D tesztsavó: poliklonális, kevert IgM/IgG
monoklonális, IgM monoklonális

- Gyenge D antigén kimutatása, megerősítése: IAT

vizsgálatra alkalmas IgG-tartalmú anti-D-vel

- Epitóphiányos (parciális) D antigén kimutatása:

IAT technikával, a tesztsavók bizonyos epitópok
kombinációjára specifikus anti-D-t tartalmaznak
Csöves technika alkalmazása
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Ellenanyagszűrés, ellenanyagazonosítás
- csöves, oszlopagglutinációs technikával,
enzimes, LISS-IAT módszerrel
- oszlopaffinitásos módszerrel

- tesztsejtek O-s csoportú sejtek

- panelsejtek többsége homozigóta formában
hordozza az antigéneket, ez elősegíti azon
antitestek kimutatását, amelyek dózishatást
mutatnak (azaz csak a homozigóta pozitív
vörösvérsejtekkel adnak pozitív reakciót)
Antitest-azonosítás
Antitest-azonosítás
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Direkt antiglobulinteszt
- recipiens vörösvérsejt szuszpenziója +
anti-IgG és anti-C3d tartalmú AHG

Pozitív DAT esetén lehetőség van továbbvizsgálni

monospecifikus Coombs savókkal (anti-IgG,
anti-IgM, anti-IgA, anti-C3c, anti-C3d)

Illetve eluálni a vörösvérsejtek felszínéről az

antitestet és azonosítani
 Vércsoport szerológiai vizsgáló
módszerek

Laboratóriumi keresztpróba
- csöves, oszlopagglutinációs technikával,
LISS-IAT módszerrel (oszlopaffinitásos
módszerrel)
- recipiens savója + donor vörösvérsejt
szuszpenziója

Többszörös vagy nagy gyakoriságú antigén elleni

antitestek jelenléte esetén a vérválasztás
(kompatibilis készítmény biztosítása) napokat is
igénybe vehet!
Laboratóriumi keresztpróba értékelése

● Kompatibilis készítmény = negatív keresztpróba

(nincs reakció, nincs agglutináció)

● Pozitív keresztpróbájú vvs készítmény csak ún

"szakmai döntés" alapján adható ki transzfúzióra

● Pozitív a keresztpróba eredménye

- meleg AIHA esetén (leggyakrabban)
- nem specifikus pozitivitás lehet sympexis képző
savó esetén vagy ha a betegnek az oldószerben lévő
anyagok, pl antibiotikum ellen van antitestje (ritkán)
 Vérválasztás szabályai

Kompatibilis készítmény kiválasztása

● ABO és RhD azonosság elve:

transzfúzió csak ABO és RhD kompatibilisen

történhet, többségében ABO-RhD azonos vvs
transzfúzió történik

● Nem ABO és RhD azonos, de kompatibilis

transzfúzió oka lehet:
- készlethiány vagy vércsoport-szerológiai okok
 Vérválasztás szabályai

Nem ABO és RhD azonos, de kompatibilis

transzfúzió vércsoport-szerológiai okai:

- alloimmunizáció miatt (többszörös vagy nagy

gyakoriságú antitest)
- ABO téves transzfúziót követően (átmenetileg)
- RhD gyenge variáns esetén
- újszülöttkori hemolitikus betegségben
- őssejtátültetés után (recipiens és donor eltérő
ABO/RhD tulajdonságú)
 Választott vvs készítmény indikációja

● Ellenanyag-szűrés pozitív, akár allo- akár

autoantitest okozza vagy pozitív DAT reakció
● Recipiens anamnezisében kimutatott antitest
szerepel
● Recipiens anamnézisében 3 hónapon belül
potenciális immunizációra utaló adat szerepel
(transzfúzió, terhesség, transzplantáció)
● Hipotermiában végzett műtét
● Csecsemő transzfúziója
● Amikor fokozottan fennáll az immunizálódás
veszélye (MDS, CLL stb)
Kompatibilis készítmények kiválasztása
● Vörösvérsejt-készítmények
Recipiens ABO Vvs készítmény ABO

A A vagy O
B B vagy O
AB A vagy B vagy O
O O
Ismeretlen O
Recipiens RhD Vvs készítmény RhD
Pozitív Pozitív vagy negatív
Negatív Negatív
Variáns RhD negatív vagy pozitív
transzfúziós utasításnak megfelelően
Ismeretlen Negatív
 Kompatibilis készítmények kiválasztása

● Trombocita-készítmények
Recipiens vércsoportja Trombocita készítmények csoportja
A A vagy O (plazmát eltávolítani)
B B vagy O (plazmát eltávolítani)
AB AB vagy A/B/O (plazmát eltávolítani)
O O
Ismeretlen O

RhD negatív leánygyermek vagy szülőképes korú nő lehetőleg RhD

negatív donortól származó készítménnyel transzfundálandó.
 Kompatibilis készítmények kiválasztása

● Plazma (FFP)
Recipiens vércsoportja FFP csoportja

A A vagy AB

B B vagy AB

O O vagy A vagy B vagy AB

AB AB

Ismeretlen AB
 Összefoglalás

● A transzfúziót megelőző kompatibilitási vizsgálat-

sorozat (ABO/RhD tipizálás, ellenanyag-szűrés,
ellenanyag-azonosítás, DAT és laboratóriumi
keresztpróba) célja a transzfúzió biztonságossá
tétele
● azáltal, hogy ezek révén többségében
megelőzhetők az irreguláris antitestek okozta
azonnali típusú hemolitikus transzfúziós
reakciók.
Köszönöm a figyelmet