NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT LAMP

Hiện nay, có thể phát hiện ra vi sinh vật gây bệnh bằng nhiều phương pháp khác
nhau, bao gồm cả những phương pháp truyền thống và phương pháp phân tử hiện đại.
Tuy nhiên, các phương pháp phân lập trên môi trường chọn lọc, phát hiện vi khuẩn E. coli
bằng cách thử các tính chất sinh, hóa nhưng không thể phân biệt giữa các vi khuẩn E. coli
mang gen độc lực gây bệnh với E. coli hội sinh cư trú bình thường ở đường ruột trong
chuẩn đoán tiêu chảy do vi khuẩn E. coli.
Và phương pháp LAMP sẽ khắc phục những nhược điểm trên. Được ứng dụng để
phát hiện nhanh vi khuẩn E. coli bằng cách khuếch đại DNA với độ đặc hiệu và độ nhạy
cao, giới hạn phát hiện là 15 pg, cao gấp hơn 100 lần so với phương pháp PCR. Một bộ 4
cặp mồi đặc hiệu được thiết kế để khuếch đại đoạn gen eae (một trong những gen độc lực
của vi khuẩn E. coli) có kích thước 288 bp trong DNA genome vi khuẩn và với sự có mặt
chất chỉ thị kim loại calcein (C30H26N2O13). Ở điều kiện đẳng nhiệt, phản ứng xảy ra trong
khoảng 30 đến 60 phút, sản phẩm là các băng DNA phân bố giống như dạng bậc thang
với băng cơ sở 288 bp là kích thước thấp nhất khi điện di trên gel agarose. Bằng mắt
thường có thể quan sát được kết quả phản ứng do dung dịch phản ứng đổi màu từ màu
cam (âm tính) sang màu xanh huỳnh quang (dương tính).

Hình 1. Kết quả phát hiện sản phẩm phản ứng LAMP bằng chỉ thị màu calcein
dưới ánh sáng thường. (-): mẫu đối chứng âm, nồng độ DNA giảm từ 15 ng đến 15 fg.

Hình 2. Kết quả phát hiện sản phẩm phản ứng LAMP bằng chỉ thị màu calcein
dưới ánh sáng UV. (-): phản ứng âm tính, (+): phản ứng dương tính.
 Cho nên đây là một kỹ thuật nhạy và đặc hiệu, có khả năng phát hiện nhanh, chính
xác vi khuẩn E. coli gây bện có mang gen độc tố eae. Có rấ nhiều phương pháp khác nhai
như PCR, real time PCR hoặc microarray… để phát hiện ra sự có mặt của gen eae, tuy
nhiên các phương pháp này có nhược điểm là kết quả thường bị phụ thuộc vào kỹ thuật,
thao tác tiến hành và sử dụng các thiết bị đắt tiền. Nhờ phương pháp LAMP mà đã mở ra
tiềm năng ứng dụng nghiên cứu cơ bản về y học và dược phẩm, vệ sinh môi trường, xét
nghiệm điểm chăm sóc… Ngày nay, LAMP được xem là một phương pháp phổ biến sử
dụng trong chuẩn đoán nhanh các tác nhân virut, vi khuẩn và nấm. Với mong muốn tìm ra
một phương pháp chuẩn đoán nhanh nhưng vẫn đảm bảo độ chính xác, có thể tiến hành
bằng các thiết bị đơn giản, dễ dàng áp dụng rộng rãi tại tuyến ý tế cơ sở nhằm góp phần
nâng cao hiệu quả trong phòng chống, kiểm soát và điều trị vi khuẩn E. coli gây tiêu chảy
ở người.