NHÓM 3

Định lượng Coliform, E.coli bằng phương pháp MPN

1. Nguyên tắc
Phương pháp MPN (phương pháp có số xác suất cao nhất; số tối khả) còn
được gọi là phương pháp pha loãng tới hạn hay phương pháp chuẩn độ. Đây là
phương pháp dùng để đánh giá số lượng VSV theo số lượng VSV có xác suất lớn
nhất hiện diện trong một đơn vị thể tích mẫu. Đây là phương pháp định lượng dựa
trên kết quả định tính của một loạt thí nghiệm được lặp lại ở 1 số độ pha loãng khác
nhau. Thông thường, việc định lượng này được thực hiện lặp lại 3 lần ở 3 độ pha
loãng bậc 10 liên tiếp, tổng cộng 3x3=9 ống nghiệm. 
2. Hóa chất , thiết bị  
- Dụng cụ
+ Pipet 1 ml , 10 ml 
+ Ống nghiệm , ống durham
+ Bình tam giác , cốc thủy tinh , quả bóp 
- Thiết bị 
+ Tủ nuôi cấy , cân phân tích , bếp điện , tủ sấy 
- Hóa chất 
Coliform : LSB E.coli
Trytone: 12g  Pepton: 6g
Lactose: 3g  Cao thịt :3g
NaCl 3g NaCl : 3g
K2HP04  :1,65g H2O: 600ml 
KH2PO4 :1,65g
Lauryl Sulphate: 0,06g
H2O :600m
l                                             

3. Cách tiến hành

Tuần tự cấy 1 mL dịch mẫu đã pha loãng 10-1 vào 3 ống nghiệm giống nhau,
mỗi ống chứa 9 ml môi trường và ống Durham úp ngược. Thực hiện tương tự với
dịch mẫu đã pha loãng 10-2, 10-3 đến 10-10…Ủ ống nghiệm trong 48h/37 độ C
(Ống dương tính là ống có sinh khí bọt trong ống Durham). Ghi nhận số ống dương
tính. Ghi nhận số ống dương tính ứng với mỗi độ pha loãng. 
 4. Xử lý số liệu
Kết quả (MPN/ml) = kết quả tra bảng  f/10 
Trong đó: f là độ pha loãng thấp nhất được chọn (10n) 
Bảng tra Mac crady (MPN) dùng cho loạt 3 ống nghiệm ở 3 nồng độ pha loãng liên
tiếp.