Mikroskopovanie

Mikroskop
Funkcia – zväčšenie obrazu a rozlíšenie detailov
rozlišovacia schopnosť mikroskopu pre viditeľné svetlo je 200 nm

Optická časť – objektív, okulár,

binokulárna hlava
Osvetľovacia časť – zdroj svetla,
zrkadlo, kondenzor, irisová clona,
filtre, „stmievač“
Mechanická časť – statív, stolík,
tubus, skrutky, revolverový menič,
krížové vodiče
Mikroskop

= krížový
vodič
 Objektív
systém šošoviek obrátený k objektu
250 mm
Zväčšenie M =
f
Numerická apertúra NA = n.sin 
n – index lomu, α – polovica otvorového uhla

Achromáty, apochromáty, planapochromáty

 Načo je numerická apertúra?

• Rozlišovacia schopnosť a= λ – vlnová dĺžka
NA
(najmenšia vzdialenosť 2 bodov, ktoré sme ešte schopní rozlíšiť)
𝜆 𝜆
𝑎 = =
𝑁𝐴 𝑛 × sin 𝛼
Zlepšiť rozlišovaciu schopnosť (a ↓):
- ↓ λ (vlnová dĺžka svetla)
- ↑ n (index lomu; imerzia)
- ↑ α (objektív)
 Načo je numerická apertúra?
f
• Svetelnosť objektívu S= d – priemer optiky pri
d
plne otvorenej clone (závisí od NA), f – ohnisková vzdialenosť

• Hĺbka ostrosti • Pracovná vzdialenosť

schopnosť zobraziť ostro určitý počet rovinných vrstiev
1
H
NA
 Okulár

systém šošoviek obrátený k oku

zväčšuje obraz vytvorený objektívom (ako lupa)
(Huygensov, Ramsdenov...)
8x, 10x, 12x, 15x, 20x
 Zväčšenie mikroskopu
Celkové zväčšenie = zväčšenie objektívu  zväčšenie
okuláru  zväčšenie binokulárnej hlavy
Užitočné zväčšenie = (500 - 1000)  NA (rozsah)
Prázdne zväčšenie – mimo tohto rozsahu
(„malý objektív  veľký okulár“)
Príklad:
objektív 45x (NA = 0,62).... 500 až 1 000-násobok 0,62 = 310 – 620

+ okulár 15x – 45 x 15 = 675... 675 > 620... 

Kondenzor, clona, filter
 Potreby na mikroskopovanie
• podložné a krycie
sklíčka
• handrička
• pinzeta, preparačná
ihla, skalpel alebo
žiletka, nožnice
• fľaštička s vodou,
pipeta, prúžky
filtračného papiera
 Postup pri mikroskopovaní
1. Nastavíme si osvetlenie zorného poľa
2. Nastavíme najmenej zväčšujúci objektív
3. Upevníme preparát do svoriek a nastred
4. Stolček s preparátom priblížime k objektívu
5. Makroskrutkou odďaľujeme stolík kým sa v
okulári neobjaví obraz
6. Doostríme mikroskrutkou, zacloníme a
nastavíme vhodnú polohu kondenzora
7. Pri zmene zväčšenia obraz nastavíme do stredu
zorného poľa, zaradíme viac zväčšujúci objektív
a doostríme mikroskrutkou
 Približné hodnoty nastavení
Zväčšenie Pracovná Numerická Poloha Otvorenie
objektívu vzdialenosť apertúra kondenzora clony
3-5x 25 mm 0,1 dolu 1/8
10x 7-10 mm 0,25 dolu 1/4
40-45x 0,7-1 mm 0,65 v strede 1/2
100x 0,1-0,2 mm 1,2 hore 1/1
 Príčiny chýb pri mikroskopovaní
• zlé osvetlenie zorného poľa
nerovnomerné alebo nejasné osvetlenie, škvrny v zornom poli
zaprášený kondenzor, nevhodná veľkosť priezoru irisovej
clonky

• znečistená optika / preparát

neostrý/matný/rozmazaný obraz, s farebným nádychom...
špinavé, vlhké krycie sklíčko alebo objektív

• nemožnosť zaostriť pri väčšom zväčšení

príliš hrubé krycie sklíčko
 Rady pri mikroskopovaní
• Pri posune stolčeka makroskrutkou a pri
výmene objektívov dávať pozor, aby objektív
nenarazil do preparátu !!!

• Okuláre sa dajú nastaviť na rozpätie očí a na

rozdiely v dioptriách medzi očami