Machine Translated by Google

Tạp chí Công nghệ sinh học Châu Phi Vol. 7 (16), trang 2834-2839, ngày 18 tháng 8
năm 2008 Có sẵn trực tuyến tại http://www.academicjournals.org/
AJB ISSN 1684–5315 © 2008 Academic Journals

Bài nghiên cứu dài đầy đủ

Sản xuất in vitro cao indole alkaloid chống ung

thư từ nuôi cấy mô cây dừa cạn (Catharanthus roseus)

Azra Ataei-Azimi¹*, Babak Delnavaz Hashemloian¹ Hassan Ebrahimzadeh² và Ahmad Majd³

1
Khoa Sinh học, Đại học Islamic Azad chi nhánh Saveh, Iran.
2
Khoa Sinh học, Đại học Tehran, Iran.
3
Khoa Sinh học, Đại học Sư phạm Tehran, Iran.

Chấp nhận ngày 5 tháng 6 năm 2008

Cây dừa cạn (Catharanthus roseus) là một trong những cây cảnh và cây cảnh quan trọng nhất trên thế giới. Trong
nghiên cứu này, hạt dừa cạn sau khi khử trùng được nuôi cấy trên môi trường MS. Các đoạn cuống lá của cây con (4
ngày tuổi) được cấy truyền sang môi trường chứa các nồng độ NAA khác nhau kèm theo Kin và được cấy truyền để tái
tạo mô sẹo và rễ. Mô sẹo và rễ thu được từ cuống lá ở một số nghiệm thức. Dịch chiết của mô sẹo và rễ từ các
phương pháp xử lý khác nhau được phân tích bằng máy đo quang phổ, TLC và HPLC về khả năng sản xuất indole alkaloid.
Alkaloid được tạo ra từ mô sẹo và rễ từ cuống lá C. roseus với sự có mặt của 0,1, 5, 10 và 20 mg/l Kin và NAA. MS
với 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l Kin có khả năng hình thành cơ quan rễ vindoline, catharanthine, vincristine và cao
nhất. Nhưng mức độ của các alkaloid và ajmalicine này rất thấp so với mức độ trong cuống lá của cây còn nguyên
vẹn, và mức độ của serpentine cũng tương tự. Rễ mới, rễ mô sẹo và mô sẹo từ môi trường MS chứa 0,1 mg/l NAA + 0,1
mg/l Kin được cấy truyền trong môi trường không có hormone và 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l Kin để phát sinh và tăng
trưởng cơ quan. Lượng alkaloid nhiều nhất được tạo ra ở rễ mới và rễ mô sẹo. Mức indole alkaloid của rễ mới trong
môi trường mới cao hơn trong cuống lá của cây nguyên vẹn. Trong nghiên cứu này, gấp 10 lần catharanthine, 125 lần
serpentine, 0,5 lần vindoline và 0,34 lần ajmalicine được tạo ra bởi các rễ mới. Kết quả thú vị nhất là sự trình
bày của hai ancaloit dimeric chống ung thư quan trọng, vinblastine và vincristine với lượng gấp 20 lần vinblastine
và 6 lần vincristine để so sánh với lượng trong cuống lá của cây nguyên vẹn.

Từ khóa: vindoline, vincristin, vinblastine.

GIỚI THIỆU

Cây dừa cạn, Catharanthus roseus L. (G.) Don, tạo ra một
số chất chuyển hóa thứ cấp có giá trị thương mại bao gồm
chất chống ung thư, vinblastine, vincristine và thuốc tăng
huyết áp, ajmalicine và serpentine. Những nỗ lực kỹ thuật
sinh học để tổng hợp các indole alkaloid này trong nuôi
cấy mô thực vật của C. roseus đã
*Đồng tác giả. E-mail: Attaei@iau-saveh.ac.ir.
Chữ viết tắt: NAA, Naphtalen axit axetic; Kin, Kinetin; MS,
Murashige và Skoog; HPLC, sắc ký lỏng hiệu năng cao; TLC, sắc ký
lớp mỏng.
mang lại những phản ứng khác nhau, với serpentine và
ajmali cine dễ thực hiện nhất đối với các thao tác trong
ống nghiệm (Moreno et al., 1995; Stern, 2000; Gragg và
Newman, 2005). Đây là những alkaloid dimeric indole được
hình thành in vivo bằng cách ngưng tụ vindoline và catharanthine.
Sản lượng thấp của dimeric indole alkaloid từ cây (khoảng
0,0005%) và hậu quả là giá cao của chúng đã kích thích
nhiều nỗ lực phát triển các chiến lược thay thế bản địa để
sản xuất chúng (Kurz et al., 1985; Petiard et al., 1985;
De Luca và Kurz, 1988, Wijese-kera, 1991; Ebrahimzadeh và
cộng sự, 1996). Sinh tổng hợp vinbla stine và vincristine
trong các hệ thống nuôi cấy mô phần lớn khó nắm bắt, do
không có khả năng tổng hợp vindo-
Machine Translated by Google
Bảng 1. Sự tạo mô sẹo (Ca) và rễ (R) trong Môi trường 1 (môi trường MS có nồng độ NAA (mg/l) khác với thân (mg/l)).
N 1 2 3 4 5 6 7
NAA* 0,1 0,1 0,1 0,1 5 5 5
0,1 0,1 5
Kin** 10 20 10 20 0,1 %Ca 15 100 1005 100 10
10020
100
0,1
100 100 100
5 100 100 100 100
100 100 100
%R 85 60 9 95 100 15 - -
*axit axetic α-Naphtalen, **kinetin.
dòng, một trong những tiền thân của nó (O'Keefe et al., 1997).
Bất chấp những nỗ lực mạnh mẽ này, những nỗ lực sản xuất
alkaloid chống ung thư từ nuôi cấy tế bào C. roseus đã thất
bại (do Van der Heijden et al., 1989 xem xét lại) và được cho
là do chúng không có khả năng tổng hợp tiền chất vindoline.
Chỉ gần đây, vindoline mới được báo cáo trong môi trường nuôi
cấy tế bào C. roseus biến đổi, mặc dù ở mức độ thấp (O'Keefe
et al., 1997). Các yếu tố như sự khác biệt của mô (Constabel
và cộng sự, 1982; Hirata và cộng sự, 1987), sự điều hòa và/
hoặc sự phát triển được kích hoạt bằng ánh sáng (De Carolis
và cộng sự, 1990; De Luca và cộng sự, 1988), hoặc cả hai
( Hirata và cộng sự, 1990; Loyola-Vargas và cộng sự, 1992;
Tyler và cộng sự, 1986; Vasquez-Flota và cộng sự, 1997), được
coi là quan trọng đối với hoạt động của con đường sinh tổng hợp thành vindoline.
Để điều tra các nút cổ chai trong khả năng tổng hợp
vindoline của các hệ thống nuôi cấy mô của C. roseus, một cách
tiếp cận là làm sáng tỏ các mức độ cấu thành của tiền chất và
các con đường chuyển hướng khả năng sinh tổng hợp mong muốn,
sau đó tuân theo các phản ứng của quá trình chuyển hóa đối
với các nhiễu loạn . Tabersonine, tiền chất chính của
vindoline, thỉnh thoảng được báo cáo trong nuôi cấy mô
(Stockigt và Soll, 1980; Toivonen và cộng sự, 1989), và chỉ
mới được đo rộng rãi gần đây trong nuôi cấy rễ tơ C. roseus
(Bhadra và Shanks, 1997 ) . Tuy nhiên, khả năng tích lũy
catharan thine và serpentine ở mức cao của một số dòng tế bào
cho thấy rằng chúng có tiềm năng cao để sản xuất một số
monoterpenoid indole alkaloid (Kutney et al., 1980a; Stockigt
và Soll, 1980; Deus-Neumann và Zenk, 1984). Ở đây, chúng tôi
báo cáo rằng vinblastine và vincristine có thể tăng rễ mới từ
nuôi cấy mô cuống lá C. roseus của cây còn nguyên vẹn.
NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu thực vật và cảm ứng nuôi cấy mô sẹo và rễ
Nuôi cấy mô sẹo và rễ được tạo ra từ các đoạn cuống lá của C. roseus (Dixon
1987). Hạt giống của C. roseus được lấy từ nhà kính nội tạng của công viên
Tehran. Lá của cây con sáu tuần tuổi, nảy mầm trong nhà kính đã được sử
dụng, và các đoạn cuống lá (khoảng 2 cm) được cắt ra và sử dụng để bắt đầu
nuôi cấy mô. Các đoạn cuống lá được khử trùng bằng hypochlorite 5% trong
45 phút và được rửa bằng nước vô trùng. Các phân đoạn này được nuôi cấy
trên môi trường thạch MS (Murashige và Skoog, 1962), được bổ sung các nồng
độ khác nhau của axit naphthalene axetic (NAA) và kinetin (Kin) (Môi trường
1: số 1 - 16 của Bảng 1) và được đặt trong một buồng tăng trưởng ở thời kỳ
tối cho
Ataei-Azimi và cộng sự. 2835
số 8 9 10 11 12 13 14 15 16
5 10 10 10 10 20 20 20 20
5 10 20
50 100 - - 15 100 - -
đầu tiên trong hai tuần và thời gian chiếu sáng 24 giờ (huỳnh quang, trắng
2
ánh sáng, 7 W/m mát) trong lần thứ hai trong 4 tuần ở 35ºC. Các mẫu xử lý
N.1 (0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l Kin) và N.14 (20 mg/l NAA + 5 mg/l Kin) (Bảng
1) được cấy chuyền vào môi trường MS chứa 0,1 mg/l NAA được bổ sung 0,1 mg/
l Kin, thời gian chiếu sáng 24 giờ (Trung bình 2: N. 17, 18 và 19 của Bảng
6) và MS không chứa hormone (MS0) (Trung bình 2: N. 20, 21 , 22 và 23 của
Bảng 6). Các mẫu được sử dụng để xét nghiệm alkaloid sau 6 tuần.
chiết xuất alkaloid
Mô sẹo mới, mô sẹo rễ và rễ từ 3-5 g trọng lượng tươi được đồng nhất hóa
(1 phút trong 60-100 ml ethanol) và được đặt trong phòng tắm 60ºC trong 10
phút. Sau khi lọc, các alkaloid được chiết xuất tinh khiết theo phương
pháp sửa đổi của Renaudin (1984) theo mô tả của Miura et al. (1987). Để
tinh chế, chiết xuất etanol được làm khô bằng thiết bị bay hơi chân không
ở 60ºC và được sử dụng. Các giai đoạn phân lập alkaloid là: 1. Pha axit
được phân lập bằng axit sulfuric (5%) và ether diethelic (50/50; v/v) trong
bình gạn. 2. Tách pha axit và tạo bazơ (pH 10) bằng NaOH 10 N và chiết với
60 - 100 ml cloroform trong gạn. 3. Pha cloroformic được cô đặc bằng thiết
bị cô quay chân không ở 60ºC. Các chiết xuất ancaloit thu được được hòa tan
trong 1 ml etanol được sử dụng để xét nghiệm ancaloit.
xét nghiệm alkaloid
Sự tồn tại và hàm lượng của vindoline (vin), catharanthine (cat),
vinblastine (vib), vincristine (vcr), ajmalicine (ajc) và serpentine (ser)
của mô sẹo và rễ được phân tích bằng TLC và HPLC sau 6 tuần kể từ khi bắt
đầu từng nền văn hóa (Bảng 1). Alkaloid cuống lá của cây nguyên vẹn (1,5
tháng tuổi) cũng được phân tích để so sánh.
TLC
Các phần nhỏ của 50µl alkaloid được bôi lên các bản sắc ký sắc ký lớp mỏng
(TLC). Hệ dung môi TLC thường được sử dụng là ethyacetate:ethanol (4:1) và
bản TLC được tạo thành bởi silica gel G60 (Merck). Các alkaloid được xác
định bằng cách sử dụng TLC và phản ứng màu với Ceric Ammonium Sulfate (CAS)
và phát hiện tia cực tím (UV) (= 254 và 366 nm). Tính di động và đặc điểm
của từng alkaloid được phân tích bằng TLC được so sánh với các alkaloid
stan và được phát hiện bằng RF của chúng, phản ứng màu với CAS và máy dò
UV (λ = 254 và 366 nm). Các tiêu chuẩn là từ Fluka và 0,0025 mg từ mỗi
trong số sáu ancaloit tiêu chuẩn được hòa tan trong 1 ml etanol và được sử
dụng để xét nghiệm ancaloit.
Kết quả TLC tiêu chuẩn cho thấy ajmalicine (RF= 0,95) có màu với λ =366
nm và chất tẩy CAS có màu xanh táo; serpentine tartrate (RF= 0,1) màu với
λ =366, 254 nm là màu xanh lam và không có màu với chất tẩy CAS; Màu sulfat
vinblastine (RF= 0,35) và vincristin (RF= 0,25) với λ =366 là không màu, λ
=254 nm
Machine Translated by Google

2836 Afr. J. Công nghệ sinh học.

Bảng 2. Yếu tố loại bỏ (RF) và tiêu chuẩn phản ứng màu alkaloid bằng phân tích TLC.
Màu của alkaloid với thuốc thử UV (λ =366, λ =254) và ceric amoni sulfat (CAS).

ancaloit RF λ =366 λ =254 CAS

rắn 0,1 Màu xanh da trời Màu xanh da trời không

Vincristin 0,25 không Tối tăm hoa oải hương

Vinblastin 0,35 không Tối tăm hoa oải hương

Cataranthine 0,75 không Tối tăm Màu xanh da trời

Vindoline 0,85 không Tối tăm hoa oải hương đen

Ajmalicin 0,95 Táo Xanh Tối tăm Táo Xanh

Bảng 3. Thời gian lưu và nồng độ một số alkaloid chuẩn phân tích bằng HPLC.

ancaloit Thời gian lưu (phút) Nồng độ (mg)

rắn 20.525 2,5×10³

Vincristin 24.2 5 2,5×10³

Vinblastin 28.290 2,5×10³
Cataranthine 32,33 2,5×10³
Vindoline 35,36 2,5×10³

Ajmalicin 41,42 2,5×10³

sẫm màu và có màu hoa oải hương với chất tẩy CAS; màu catharanthine được điều chỉnh bởi các đoạn cuống lá với sự có mặt của 0,1, 5, 10
(RF= 0,75) và vindoline (RF= 0,85) với λ =366 và λ =254 nm có màu và 20 mg/l NAA được bổ sung với 0,1, 5, 10 và 20 mg/l Kin (Bảng 1).
sẫm và với chất tẩy rửa CAS, catharan thie có màu xanh lam và
Rễ mới được tái sinh trong môi trường chứa: a. 0,1 - 5 mg/l NAA với
vindoline có màu sẫm-Lavander. Catharanthin
0,1 mg/l Kin (Hình 1a) và b. 5, 10, 20 mg/l NAA với 5 mg/l Kin (Hình
và vindoline được phân tách bằng TLC 2 chiều theo các phương pháp
sửa đổi của Morris và cộng sự theo mô tả của Dixon (1987) 1b). Vết chai được tạo ra ở tất cả các nghiệm thức nhưng ở 0,1 mg/l
(Ban 2). NAA với 0,1 mg/l Kin (N.1) là thấp (15%). Rễ, mô sẹo và mô sẹo rễ
từ N.1 và N.14 được cấy truyền trong môi trường N.1 và MS0; chúng
phát triển và tạo ra mô sẹo và rễ mới (N. 17 - 23 của Bảng 6 và
HPLC
Hình 1c, d). Mô sẹo và rễ được tái sinh ở N. 18, 19, 20, 21 và 23
của môi trường 2 nhưng chỉ có mô sẹo ở N.17 và rễ ở N.18 của môi
HPLC được thực hiện với hệ thống sắc ký Shimatzu LC-6A sử dụng dung
dịch rửa giải đẳng tốc được lập trình làm từ axetonitril và đệm trường 2 được tạo ra.
amoni cacbonat pH 7,3 (1:1) trên cột pha đảo là µm bondpak C18 và
4,6 µm (15 cm × 2,5 mm , ID) duy trì ở 30˚C. Một cột bảo vệ với pha
đảo ngược 37-50 µm bondapak C18/CO bảo vệ cột khỏi sự nhiễm bẩn từ
dịch chiết mô. Trong phân tích HPLC, alkaloid được phát hiện bằng
thời gian lưu ở bước sóng 254 nm. Màu của alkaloid trong TLC (với
CAS và UV) và thời gian lưu của HPLC được so sánh với sáu alkaloid
tiêu chuẩn: thời gian lưu của vindoline (vin) 35,36 phút, Xét nghiệm alkaloid từ cuống lá, rễ và mô sẹo alkaloid
catharanthine (cat) 32,33 phút, vinblastine (vib) 28,290 phút,
vincristin (vcr) 24,25 phút, ajmalicine (aic) 41,42 phút và Kết quả TLC cho thấy dạng vindoline (vin), catharanthine (cat) và
serpentine (ser) 20,525 phút với 2,5×10³ mg mỗi loại (Bảng 3). ajmalicine (aic) của rễ và mô sẹo từ môi trường MS bổ sung 0,1 mg/l
Trong phân tích HPLC, để thu được kết quả cẩn thận, 20 µl alkaloid
NAA và 5, 10 và 20 mg/l Kin, là tương tự như mô hình cuống lá của
được tiêm ba lần: không có alkaloid chuẩn, trộn với alkaloid chuẩn
và alkaloid chuẩn không chiết xuất. Thời gian lưu và diện tích dưới cây nguyên vẹn (Bảng 4). Phân tích HPLC cho thấy kiểu di động và
đỉnh được so sánh với tỷ lệ tiêu chuẩn đặc biệt (Bảng 3). các đặc tính của vindoline, catharanthine, ajmalicine, vincristine
(vcr) và serpentine (ser) của rễ mới của cuống lá trong 0,1 mg/l NAA
tương tự như cuống lá nguyên vẹn của cây nhưng với mức độ thấp hơn
mỗi (Bảng 5).

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Mô sẹo và cảm ứng ra rễ Kết quả TLC cho thấy dạng vindoline, catharanthine và ajmalicine
của rễ và mô sẹo từ Mô sẹo (Ca), Mô sẹo ra rễ (CaR), Ra rễ cuống lá
Sau 6 tuần ủ, mô sẹo và rễ được hình thành (PR)
Machine Translated by Google

Ataei-Azimi và cộng sự. 2837

Bảng 4. Kết quả phân tích TLC: Phát hiện indole alkaloid trong các Cơ quan mới hình
thành từ cuống lá (Số 6-16 chỉ chứa serpentine).

ancaloit cuống lá N1 N2 N3 N4 N5 N6
+ + + + - + +
rắn
Vincristin + - - - - - -

Vinblastin + - - - - - -

Cataranthine + + + + + + -

Vindoline + + + + + + -

+ + + + + + -
Ajmalicin

Bảng 5. Kết quả phân tích HPLC: lượng indole alkaloid tương đối trong
các cơ quan mới được hình thành từ cuống lá (Bảng 1).

ancaloit cuống lá N1 N2 N3 N4 N5

rắn 0,08 0,09 0,97 0,29 + +

Vincristin 0,54 + - - - -

Vinblastin 0,085 + - - - -

Cataranthine 0,07 0,06 + + - -

Vindoline 1,81 0,05 0,16 - - -

Ajmalicin 7,32 0,53 5,86 5.3 5,27 0,32

của cuống lá (0,085 và 0,54%) gấp khoảng 20 và 6 lần nhưng ở

CaR (N. 23) rất thấp (Hình 2).
Kết quả của chúng tôi xác nhận rằng vib và vic được hình
thành trong môi trường nuôi cấy rễ mới của C. roseus trên
môi trường MS tự do có hormone, dưới ánh sáng, ở nhiệt độ
35°C. Krueger và Carew (1982) và Moreno et al. (1995) đã báo
cáo rất ít vib và vic từ nuôi cấy mô nhưng việc sản xuất các
ancaloit này trong môi trường nuôi cấy của chúng tôi lớn hơn
so với trong cuống lá của cây mẹ. Tuy năng suất vin thấp hơn
nhưng ở thân mèo lại cao, gấp 10 lần ở cuống lá. Mức độ ser
trong rễ và mô sẹo từ 1,31 đến 16,34%, cao hơn nhiều so với
ở cuống lá với 0,08%. Những kết quả này gợi ý rằng khả năng
tổng hợp vib và vcr cũng như đối với vin và cat có liên quan
đến sự khác biệt về hình thái, ánh sáng và nhiệt độ cao
(35°C).

Trong điều tra này, hàm lượng vin (0 - 0,9%) và ajc (0

Hình 1. Sự phát sinh cơ quan rễ từ cuống lá trên môi trường MS bổ
sung NAA và Kin: A. 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l kin, B. 5 mg/l NAA +
0,1 mg/l kin, C-callus được cấy truyền thành môi trường không có
hormone, D. rễ được cấy truyền vào môi trường không có hormone.
-5,8%) ở các mẫu đều thấp hơn ở cuống lá; vin = 1,81% và ajc
= 7,32%. Hàm lượng ser (0,09-16,34%) trong tất cả các mẫu
lớn hơn nhiều so với cuống lá (0,08%). Lá C. roseus chứa các
ancaloit kém chất lượng như vincristine và vinblastine ở
nồng độ từ 0,0004 đến 0,0003% trọng lượng khô (dw) được sử
dụng trong điều trị ung thư (Wijesekera et al., 1991).

và Rễ (R) của N.17-23 (Bảng 6) tương tự như kiểu cuống lá
của cây nguyên vẹn. Sự tồn tại của hầu hết các indole
alkaloid thông thường trong các mẫu của N. 17 - 23 đã được
xác nhận bằng phân tích HPLC (Bảng 7). Việc sản xuất vin và
ajc từ PR, Ca, R và CaR thấp (0,44 đến 0,9%) so với sản xuất
ở cuống lá (1,8%). Mức độ rung (1,6%) và vcr (3,4%) của rễ
(N.22) cao hơn so với
Cuống lá cây của chúng tôi chứa 0,0005% vinblastine và
0,00324% vincristine theo trọng lượng khô (dw) hoặc 0,000085%
vinblastine và 0,00054% vincristine theo trọng lượng tươi (fw).
Vinblastine của cuống lá tương đương với ở Wijesekera et al.
(1991) báo cáo, nhưng vincristine nhiều hơn khoảng 10 lần so
với các tác giả đã phân lập. Rễ và thân gốc rất giàu các
alkaloid đơn phân như ajmalicine và
Machine Translated by Google

2838 Afr. J. Công nghệ sinh học.

Bảng 6. Sự tăng trưởng và phát sinh cơ quan của các cơ quan được nuôi cấy dưới da.

N2 17 18 19 20 21 22 23
Med1 Ca 1 CaR 1 PR 1 Ca 1 R 1 R 1 CaR14
Med2 N.1 N.1 N. 1 MS0 MS0 MS0 MS0 CaR

Nội tạng mới Ca CaR CaR CaR CaR r

Màu wg wg w w wg tập thể hình

Med1: Cấy truyền cơ quan từ môi trường thứ nhất (Bảng 1)

Med2: Môi trường cấy truyền
MS0: Môi trường không có hormone (MS cơ bản)
N1: Số 1 của Med1, N2: Số của Med2 Cơ quan mới: cơ
quan mới từ Med2. w: trắng, y: vàng, g:
xanh, R: Rễ, Ca: Mô sẹo.

Bảng 7. Kết quả Phân tích HPLC: lượng tương đối của indole alkaloid (vin, cat, Vbl, vcr, ajc và ser) trong
các mẫu nuôi cấy sau 6 tuần (Bảng 6).

ancaloit 0 17 18 19 20 21 22 23

rắn 0,08 16,34 1,83 1,36 1.301 2,46 12.11 8..95

Vincristin 0,54 + - - - 0,15 3,4 0,156

Vinblastin 0,085 + 0,2 - 0,032 0,26 1,66 0,1

Catarantine 0,07 - - - - 0,032 1,02 0,052

Vindoline 1,81 - - 0,44 0,56 + 0..9 0,46
7,32 2,46 - 0,1 0,05 - 2.3 0,44
Ajmalicin

thu được từ cuống lá của chúng tôi. Trong nền văn hóa của chúng tôi,
serpentine nhiều hơn ở cuống lá, nhưng ajmalicin lại thấp.
Vindoline, catharantine, vinblastine và vincristine đã được quan sát

thấy trong môi trường nuôi cấy của chúng tôi, đặc biệt là ở các rễ mới
từ cuống lá trong môi trường không có hormone và điều kiện ánh sáng
(N.22, Bảng 7) và vib, vcr và ser trong mẫu này là 20, 6 và , lần lượt
là 151 lần, nhiều hơn từ cuống lá nhưng vin và ajc thấp. Endo và Goodbody
(1988) đã tạo ra sự nuôi cấy rễ và chồi từ cây con của C. roseus và báo
cáo vinblastine và vindoline trong các chồi ở điều kiện ánh sáng, với
mức độ rất thấp và Favretto và cộng sự, (2001) đã thu được vincristine

và vinblastine trong C. roseus từ quá trình phát sinh phôi soma. Kết quả
của chúng tôi cũng tương tự như báo cáo của một số tác giả (Krueger và
Carew, 1982; Naaranlahti và cộng sự, 1895; Hu và cộng sự, 2001; Suk Weon
Kim và cộng sự, 2004; Schneider, 2002). Người ta cũng đã báo cáo rằng
vinblastine xuất hiện trong môi trường nuôi cấy mô sẹo với các rễ phân

hóa. Dimeric alkaloids xảy ra trong môi trường nuôi cấy mô với sự hình
thành cơ quan, cũng như trong rễ. Việc phát hiện nồng độ cao của dimeric
alkaloid trong mô sẹo và rễ từ các nền văn hóa cuống lá cho thấy khả

năng phát triển một hệ thống sản xuất hiệu quả đối với vinblastine và
vincristine trong một quy trình công nghiệp.

Hình 2. Sắc ký đồ chiết xuất alkaloid của rễ mới (N.22, Bảng 7) trong môi
trường không có hormone; vin (23,245'), vcr (27,91'), ajc (32,373'), mèo
(36,237'), ser (41,612') và vbl (51,28').

Để sản xuất các loại thuốc chống ung thư hữu ích này hiệu quả hơn,
nhiều nhà khoa học đã thử áp dụng công nghệ nuôi cấy mô thực vật. Trên

serpentine, 0,03 đến 0,1%, được sử dụng để giảm huyết áp cao (Wijesekera thực tế, một số lượng lớn các bài báo liên quan đến phương pháp này đã

et al., 1991). Ajmalicine, 0,0439% (dw), serpentine 0,00048% (dw), được trình bày kể từ khi nghiên cứu đầu tiên được thực hiện (Vanisree et

ajmalicine, 0,0073% (fw) và serpentine, 0,00008% (fw) là al., 2004). Tuy nhiên, việc sản xuất cả hai ancaloit bởi de novo
Machine Translated by Google
sự tổng hợp sử dụng mô sẹo hoặc tế bào nuôi cấy huyền phù
của C. roseus cho đến nay không hứa hẹn vì năng suất của
các tế bào nuôi cấy được báo cáo cho đến nay là rất thấp.
Nhưng kết quả của chúng tôi cho thấy vindoline,
catharantine, vinblastine và vincristine được sản xuất
trong quá trình nuôi cấy mô, đặc biệt là ở rễ mới từ cuống
lá trong môi trường chứa hormone tự do và điều kiện ánh
sáng (N.22, Bảng 7) với số lượng lớn (vib, vcr và ser
trong mẫu này là 20 , 6 và 151 lần lượt nhiều hơn từ cuống
lá) nhưng vin và ajc thấp.
NGƯỜI GIỚI THIỆU
Bhadra R, Shanks JV (1997). Các nghiên cứu tạm thời về sự hấp thu chất dinh dưỡng,
tăng trưởng và tích lũy alkaloid indole trong môi trường nuôi cấy dị dưỡng của rễ
có lông của Catharanthus roseus. công nghệ sinh học. sinh học. 55:527-534.
Constabel F, Gaudet-La Prairie P, Kurz WGW, Kutney JP (1982).
Sản xuất alkaloid trong nuôi cấy tế bào Catharanthus roseus . XII.
Khả năng sinh tổng hợp của mô sẹo từ các mẫu ban đầu và các chồi được đánh giá
tái sinh. Plant Cell Rep., 1: 139-142.
De Carolis E, Chan F, Balsevich J, De Luca V (1990). Phân lập và mô tả đặc điểm của
dioxygenase phụ thuộc 2-oxyglutarate liên quan đến bước thứ hai đến bước cuối cùng
trong quá trình sinh tổng hợp vindoline. Vật lý thực vật. 94:1323-1329.
De Luca V, Fernandez JA, Campbell D, Kurz WGW (1988) Phát triển sự điều hòa tinh
thần của các enzyme sinh tổng hợp indole alkaloid ở Catharanthus roseus. Vật lý
thực vật. 86:447-450.
Dixon RA (1987) Nuôi cấy mô và tế bào thực vật, IRI Press, Oxford, 1-67 Ebrahimzadeh
H, Ataei-Azimi A, Noori-Daloi MR (1996). Sự phân bố indole alkaloid trong các cơ quan
khác nhau của Catharanthus roseus G.
Giảng viên đại học. (Vinca rosea L, Daru, J. Sch. Pharm. 6(1&2): 11-24 tiếng Ba Tư.
Endo T, Goodbody A (1988). Sản xuất alkaloid trong rễ và chồi
nền văn hóa, Planta. Med, 54: 470-482.
Favretto D, Piovan A, Filippini R, Caniato R (2001). Theo dõi năng suất sản xuất
vincristine và vinblastine ở Catharanthus roseus từ quá trình tạo phôi soma. Xác
định bán định lượng bằng phương pháp khối phổ ion hóa phun tia điện phun dòng
chảy, Rapid Communications in Mass Spectrometry, 15(5): 364-369.
Gragg GM, Newman DJ (2005) Thực vật là nguồn cung cấp chất chống ung thư, J.
Ethnopharmacol, 100(1-2): 72-79.
Hirata K, Yamanaka A, Kurano N, Miyamoto K, Miura Y (1987). Sản xuất indole alkaloid
trong nuôi cấy đa chồi của Cathranthus roseus (L). G. Đôn. nông nghiệp. sinh học.
hóa học. 51:1311-1317.
Krueger RJ, Carew DP (1982) Sản xuất vindolin trong quá trình tái sinh rễ
của Catharanthus roseus, Planta Med, 45:56-60.
Loyola-Vargas VM, Mendez-Zeel M, Monforte-Gonzalez M, Miranda Ham ML (1992). Tích lũy
serpentine trong quá trình phủ xanh ở các mô bình thường và khối u của Catharanthus
roseus. J. Vật lý thực vật, 140: 213-217.
Ataei-Azimi và cộng sự. 2839
Miura Y, Hirata K, Kurano N (1987). Sự hình thành vinblastine trong nhiều chồi của
Catharanthus roseus, Planta Med, 50: 18-20.
Moreno PRH, van der Heijden R, Verpoorte R (1995). Nuôi cấy tế bào và mô của
Catharanthus roseus: Khảo sát tài liệu. II. Cập nhật từ 1988 đến (1993) Plant
Cell Tiss. Giáo phái Nội tạng. 42:1–
25.
Murashige T, Skoog F (1962). Môi trường sửa đổi để tăng trưởng nhanh và thử nghiệm
sinh học với nuôi cấy mô thuốc lá, Physiol. Thực vật 15: 473-497.
Naaranlahti T, Lapinjoki A, Toivonen L (19895). Bằng chứng phổ khối về sự xuất hiện
của vindoline trong tế bào Catharanthus roseus , planta med 5:155-57 O'Keefe BR,
Mahady, GB,
Gills JJ, Beecher CWW (1997). Sản xuất vindoline ổn định trong nuôi cấy tế bào biến
đổi của Catharanthus roseus. J. Natl. sản xuất. 60:261-264.
Renaudin JP (1984). Sắc ký lỏng hiệu năng cao đảo pha, J. Chromat. 291:165-174.
Rijhwani SK, Shanks JV (1998). Ảnh hưởng của liều lượng elicitor và thời gian phơi
nhiễm đối với quá trình sinh tổng hợp các alkaloid indole bằng nuôi cấy rễ tơ
Catharanthus roseus . công nghệ sinh học. Ăn xin. 14:442-449.
25-Schneider C (2002). Tổng hợp de novo đầu tiên của vinblastine bisindole alkaloid,
Angewandte Chemie 41(22): 4217-4219.
Nghiêm khắc S (2000). Giới thiệu Sinh học thực vật, tái bản lần thứ 8, McGraw-Hill
CompaniesInc, trang 238-247.
Stockigt J, Soll HJ (1980). Indole alkaloid từ nuôi cấy huyền phù tế bào của
Catharanthus roseus và C. ovalis. Thực vật Med. 40:22-30.
Suk Weon Kim S, Su ID, Son Choi P, Liu RJ (2004). Tái sinh thực vật từ các vết chai
phôi có nguồn gốc từ hợp tử chưa trưởng thành và nuôi cấy huyền phù tế bào của
Catharanthus roseus , tế bào thực vật, tế bào mô. 76(2): 131-135.
Toivonen L, Balsevich J, Kurz WGW (1989). Sản xuất alkaloid Indole bằng cách nuôi cấy
rễ lông của Catharanthus roseus. Tế Bào Thực Vật Tế Bào Cơ Quan Cult. 18:79–
83.
Tyler RT, Kurz WGW, Panchuk BD (1986). Nuôi cấy huyền phù tế bào quang tự dưỡng của
dừa cạn (Catharanthus roseus (L.) G.
Don): Chuyển đổi từ sinh trưởng dị dưỡng sang sinh trưởng quang tự dưỡng.
Đại diện tế bào thực vật, 3: 195-198.
Vanisree M, Yue Lee C, Fung Lo S, Manohar Nalawade S, Yih Lin C, Sheng Tsay H (2004).
Các nghiên cứu về sản xuất một số chất chuyển hóa thứ cấp quan trọng, Bot. Bò
đực. học viện. Tội. 45:1-22 Vasquez-Flota F, De Carolis E,
Alarco AM, De Luca V (1997).
Nhân bản phân tử và mô tả đặc điểm của deacetoxyvindoline-4- hydroxylase, một
dioxygenase phụ thuộc 2-oxoglutarate tham gia vào quá trình sinh tổng hợp
vindoline ở Catharanthus roseus (L.) G. Don.
Nhà máy Mol. sinh học. 34:935-948.
ROB của Wijesekera (1991). The Medicinal plant industry, CRC press, pp.
52-217.