Genetic immunization->synthetic sequences are used to express antigenic peptides or proteins in situ

DNA vaccine-> 인간에게 효과 X RNA vaccine 관심

Trans 서로 다른 strand 에 있는 gene 이 서로 영향을 줌

Cis 서로 같은 strand 에 있는 gene 이 서로 영향을 줌

In vivo=in situ

T7(stable), T4,sp6 RNA polymerase from bacteriophagi

ORF(open reading frame)

UTR(untranslated region)
pDNA(plasmid)
nsp(nonstructure protein)

RNA vaccine
-mRNA vaccine 항원을 암호화한 mRNA 를 이용한 vaccine
-항원 발현은 백신 접종동안 성공적으로 전달된 기존 mRNA 전사체의 수에 비례한다.

-self-amplifying RNA vaccine

-saRNA 백신은 자가 복제 단일 가닥 RNA 바이러스에서 파생된 유전자
공학적 복제품이다.(VPR)
-VPR(virus replicon particle)(viruse RNA 를 복제하는 입자)

[11]다시읽기

 알파바이러스 복제효소 유전자는 합성 전사체를 증폭시키는 RNA 의존성 RNA

중합효소(RdRP)(RNA dependent RNA Polymerase) 복합체를 암호화한다
전통적인 mRNA 백신의 경우, 항유전자 또는 면역 조절 서열은 5' 및 3' 미번역
영역(UTR)에 의해 측면에 배치된다. 폴리(A) 꼬리는 pDNA 템플릿의 3'
말단으로부터 통합되거나, 시험관 내 전사 후 효소적으로 추가될 수 있다[19].
SaRNA 백신 pDNA 템플릿은 추가적인 알파바이러스 복제 유전자 및 보존된
서열 요소를 포함한다(그림 1). 비구조 단백질(nsp) 1, 2, 3 및 4(nsP1-4)는 RdRP
복합체를 형성하기 때문에 레플리콘 활성에 필수적이다[20]. 시험관내 전사는
선형 pDNA 템플릿에서 수행되며, 일반적으로 T7 DNA 의존성 RNA 중합효소를
사용하여 RNA 트랜스스크립트의 여러 복사본을 생성한다. RNA 가 5' 말단에서
캡을 씌우고 정제된 후, 생성 및 전달 준비가 된다.

-saRNA vaccine 의 번역을 개선-> 자연적으로 발생하는 알파바이러스의 진화에

기초한 5'와 3' UTR 의 최적화를 통한 것이다
-single strand RNA 은 다양한 2 차 구조를 형성하여 알파바이러스가 정상적인
숙주 세포 번역과정의 요구를 우회하고 면역 반응을 회피할 수 있도록 한다.

Five -prime Caps

 핵산 분해 효소로 부터 보호 & 번역 강화
  anti-reverse cap analog [34] and recent phosphor- othioate derivatives ->순방향으로 전사가
잘되도록 한다.

Post-translation capping enzyme-combined with 2′-O-methyl- transferases, generate Cap 1 structures that mimic
natural eukaryotic mRNAs  high capping efficiencies

 clean cap-cap1,cap2 and cap1 epitranscriptomic (상투적인) 우리가

사용하지 않는 캡으로 바꿈 enhance RNA stability by evading de-
capping metalloenymes

Synthetic RNA immunogenicity

-improving the in vitro transcription reaction and liquid chromatography purification-

 reduce unintended immune stimulation by spurious by-products, including double-stranded
RNA

-in saRNA vaccine new dsRNA untermediates is inevitable

The co-delivery of immune modulating transcripts, particularly pattern recognition receptors (PRRs)
antagonists, may help mitigate these effects

 dsRNA PKR stimulate eIf2(translation initiation) 인산화 inactive  translation level down

PKR 저해 단백질을 incoding 하는 mRNA 를 같이 넣어 주어서

Delivering large saRNA transcripts

-cationic lipids, LNPs, polymers, and protamine sulfate, as well as physical methods such as electroporation 
be used to deliver RNA therapeutics and vaccines

nsP1-4 replicon sequence in saRNAs

 improving the delivery of saRNAs

-pABOL

-ornithine dendrimers

-mannosylated polyethyleneimine

-multiple linear peptides

-LPPs were generatd by creating core RNA/poly-ehthylenimine poluplexes

before encapsulation in PEG-anionic liposome formulations with mannosylated
lipids.

-dimethyldioctadecylammonium (DAA) cation lipidLNP RNaseA treatment 로부터의 보호를 제공

 광견병 바이러스 당단백질을 암호화하는 saRNA 백신의 전달을 위한 리포좀,
고체 LNP, 고분자 나노입자 및 유화액을 비교하고자 했다[59]. 그들의 손에서,
저선량의 saRNA 나노입자는 비이온화성 양이온성 지질 1,2-디올레오일-3-
트리메틸암모늄-프로판(DOTAP)과 복합화되어 초기에 상업적으로 허가된
광견병 백신인 라비푸르(RabAvert)와 유사한 항체 적정을 초래했다.

-GlaxoSmithKline outperformed all DDA AND DOTAP

-transamplifying approach

Augmenting vaccine immunity

Adjuvant(보조제)적응 면역 강화 + T 세포 반응 유도

Sa RNA vaccine 이 mRNA 백신보다 더 면역체게를 자극한다.

MF59-서브유닛 백신에 대한 유사한 면역학적 반응 보임

Lipid based delivery formulation RNA 백신 면역-전위 촉진

Inclusion of mannosylated conjugates and chitosan based nanogel alginate->

수지상 세포에 의한 sa RNA 백신의 수용체 매개 내세포화 향상

Cytokine and chemokine adjuvants that augment cytolytic T-cell response

Expanding the scope of vaccines for infectious diseases

SVF replicon

Contagious respiratory viruses

전임상 평가 하에 있는 최근의 조성물은 양이온성 고분자 기반의 pAB 를

포함한다 OLs [50]
Strong antibody responses were attained with low-dose (1 μg per primer injection) saRNAs complexed with
pABOLs, and the addition of mannose improved IgG response times in LNP formulations

MLNP 는 강화된 ID 면역을 달성하여 1 가 불활성 인플루엔자 백신과 비교할 때

우수한 T 세포 반응을 보였다(?)
Insect transmitted viruses

 Samsa 등은 VEE 레플리콘의 라이브 및 불가역적으로 감쇠된 버전(LAV 및

IAV)을 생성함으로써 VEE 를 위한 CNE 공식 saRNA 백신을 개발했다[88]. 더
안전한(역전이 부족한) IAV 는 LAV 보다 면역원성이 낮았지만 VEE 에어로졸
도전 이후에도 생쥐의 70%를 보호했다

지카 바이러스 saRNA 백신 연구는 면역 능력이 있는

마우스의 IM 주입에 따라 보호 면역을 달성했지만, RNA 가 나노 구조 지질
운반체에서 공식화되었을 때만 달성되었다

animal transmitted viruses

-광견병 광견병은 최근 GSK 의 백신학 프로그램(RG-SAM GSK3903133A)의

초점이 되고 있으며, 현재까지 유일한 합성 saRNA 임상시험(NCT04062669)을
자랑한다

The promise of an HIV-1

Sequence diversity of the HIV-1 viral Env glycoprotein required for entry into
cells has presented a challenge to vaccine design

New strategies currently under investigation include novel antibody approaches

[98–100], antibody-like inhibitors [101], polyvalent immunogens [102], and
adeno-associated viral vectors [103]

VRR

The self-adjuvant effect of saRNAs may augment immunity and novel HIV-1
candidates have shown potential in preclinical models of infection (Table 1). In
2012, to highlight the flexibility of their LNP-formulated replicon, Geall et al.
[81] described the first HIV-1 Env gp140 saRNA vaccine in mice.

Conclusion

-무세포제조 파이프 라인
 saRNA 는 항원 서열을 하위 유전자 전사체로 증폭시키고, 이러한 면역 조절
단백질의 세포질에 축적은 특히 만성 감염성 질병에 대한 유전자 면역 전략을
향상시킬 수 있다

RNA modifying

More focusing  self amplifying-