RNA 분리

(RNA Extraction)
30920 이채민
목차

Ⅰ. 탐구 목적···························································································

Ⅱ. RNA 와 RNA 분리에서 쓰이는 시약 ·························································

1) RNA 의 구조·················································································

2) RNA 의 종류·················································································

3) 시약의 원리···················································································

Ⅲ. RNA 분리 과정···················································································

Ⅳ. 결론 ·······························································································
Ⅰ. 탐구 목적
RNA 는 세포 분열, 분화 및 성장과 세포 노화 및 사망에 이르는 세포 전 생애 조절의 중요한 역할을 하며,
여러 질병에 따라 특정 RNA 의 결함이나 조절이 일어난다. 또한 RNA 는 세포의 유형, 외부자극 및 질병
유무에 따라 유전자 발현 패턴과 RNA 분해 정도가 달라진다. 따라서 RNA 분리는 여러가지 분자생물학적
기초 연구 및 임상 연구에 많이 사용된다; RNA 가 사용되는 대표적인 분자생물학적 연구에는 세포 내
유전자 특정 RNA 전사의 상대적인 양의 측정, 특정 유전자의 전사율이나 RNA 프로세싱(processing)*의
경로 연구, RNA 지도 연구, mRNA 를 이용한 시험관 내 특정 펩타이드 형성 연구가 있다.

또한 RNA 는 어느 정도의 조건 하에서는 상당히 높은 안정성을 나타낼 수 있는 데, 이에 따라 체액의

식별, 사후경과시간 및 사인의 추정 등이 가능할 것을 전망되고, RNA 를 이용하는 체액 식별이 DNA
분석을 보완할 수 있을 것이라 예상되면서 법의 분야에서의 RNA 연구의 필요성도 늘어나고 있다.

따라서, RNA 연구의 필요가 늘어남에 따라 생명 및 법의 분야의 진로를 고 있는 사람으로서 RNA 를

어떻게 추출해 내는지를 알아보고자 하였다.

*RNA Processing: 1 차 전사물로부터 성숙한 mRNA 나 기능성 tRNA, rRNA 를 생산하는 과정

Ⅱ. RNA 와 RNA 분리 실험에서 쓰이는 시약

1) RNA 의 구조
RNA 의 기본단위는 뉴클레오타이드로, 인산, 리보스(5 탄당), 퓨린계나 피리미딘계 염기가 1:1:1 의
비율로 구성되며, RNA 를 구성하는 염기의 종류는 아데닌, 구아닌, 사이토신, 유라실이 있다. RNA 는
구조적으로 세 가지 측면에서 DNA 와 차이를 보인다. RNA 의 리보스는 DNA 의 디옥시리보스와는 달리
2‘C 에 OH 가 존재하고, 염기로 타이민 대신 유라실이 있고, 외가닥이다. RNA 는 리보스의 2’C-OH 가
알칼리 가수분해에 의해 쉽게 분해되므로 불안정하다.

2) RNA 의 종류
ㆍ mRNA(messenger RNA): DNA 로부터 전사되어 유전정보를 유전자에서 리보솜으로 전달하는
중개자역할을 한다.
ㆍ rRNA(ribosomal RNA): 단백질을 합성하는 리보솜을 구성한다.
ㆍ tRNA(transfer RNA): mRNA 의 코돈에 맞는 아미노산을 리보솜으로 운반하는 역할을 한다.
ㆍ siRNA(small interfering RNA): RNA 간섭에 관여하며 특정 단백질의 생산을 억제함으로써 유전자
발현을 방해한다.
ㆍ miRNA(micro RNA): 유전자 발현을 억제하며, mRNA 와 상보적으로 결합해 세포 내 발현을 조절한다,
ㆍ snRNA (small nuclear RNA): 핵 내부에서 mRNA 를 스플라이싱(splicing)*하는 역할을 담당한다
* RNA splicing: 새로 만들어진 전구체 mRNA(pre-mRNA)가 성숙한 mRNA 로 변형되는 RNA 처리의 한 형태

3) 시약의 역할
ㆍ트리졸(Trizol); 트리졸에는 페놀과 RNase* 억제제(구아니딘 티오시안산염)가 포함되어 있다. 페놀을
통해 지질말, 단백질 등을 분해하여 세포를 용해한다. 그 후 RNase 억제제가 세포 용해로 세포 내에
존재하던 RNA 를 분해할 수 있는 물질의 활성화를 억제한다. 결과적으로 RNA 는 분해되지 않고 균질화가
이루어진다.
*리보뉴클레이스(Ribonuclease, RNase) 또는 RNase 는 RNA 를 분해해서 올리고뉴클레오티드* 혹은 단일 핵산으로
만드는 반응을 촉매하는 효소
*올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)는 수 개에서 수십 개의 뉴클레오타이드 단위체가 합성된 중합체
ㆍ클로로포름(Chloroform): 남은 단백질과 지질 제거를 도와주며 상층의 페놀 성분을 없애기 위해
사용된다.
ㆍ이소프로판올(Isopropanol): RNA 는 음전하를 띄는 인산 때문에 친수성을 띄므로 물에 녹아있다. 하지만
이소프로판올을 넣으면 음전하인 인산을 중화시켜 물에 대한 용해도를 낮추어 RNA 를 침전시킨다.
 ㆍ 75% 에탄올(75% EtOH): 60~65%의 에탄올을 사용하는 경우 RNA 의 용해도가 높아져서 염을 제거하는
과정에서 RNA 알갱이가 녹아 없어질 수 있고, 에탄올의 농도가 높으면 염의 용해도가 낮아지기 때문에
염을 제대로 제거하지 못할 수 있다. 그러나 농도가 너무 낮으면 에탄올의 휘발성도 낮아지기 대문에
알갱이에서 용매를 제거하는 것이 쉽지 않아 75% 농도의 에탄올을 사용한다.
· DEPC H2O(DEPC H2O) : 에탄올을 희석할 때 사용한다. 일반적인 물에도 RNase 가 많기 때문에 RNase 를
제거한 증류수를 사용해야한다. DEPC 는 RNase 의 활성부위를 비활성화 한다. 따라서 RNase 의 기능이
상실된 증류수인 DEPC H2O 를 RNA 재용해에 사용한다.
Ⅲ. RNA 분리 과정

1) 분리 과정
① RNA 균질화 / 상 분리
: 트리졸을 세포에 넣어 세포를 용해한 후 클로로포름을 넣어 균질화한다. 이후 볼텍스 믹서로
충분히 섞으면 3 개의 층으로 분리되는데, 가장 아래 층은 단백질과 지질, 벽면에 따라 붙어있는
흰색 층은 DNA 층이고 가장 상층에 존재하는 투명한 층에 RNA 가 존재한다.

② RNA 침전
: ① 의 결과에서 가장 상층에 존재하는 투명한 층만 분리하고 새로운 튜브에 옮긴다. 그 후
이소프로판올과 섞어줌으로서 RNA 를 침전시키고, 침전히 충분히 일어나도록 얼음에 10 여분 간
보관한다. 이후 원심분리를 하면 RNA 침전물(pellet)을 확인할 수 있는데, 나머지 상층액은
버린다.
 ③ RNA 워싱
: 75% 에탄올을 넣어 불순물을 씻어내고, 더 순도 높은 RNA 를 얻어내기 위해 원심분리한다. 남은
에탄올은 제거하고 공기 중에 건조시킨다. 이후 DEPC H2O 로 RNA 침전물을 용해시킨다.
④ RNA 농도 확인
나노드롭으로 RNA 의 순도와 양을 체크한다. 나노드롭이란, 분광광도계의 한 종류로 흡광도,
순도를 측정할 수 있다. 물질의 종류와 양에 따라 흡수되는 파장과 그 양이 달라지는데, 파장의
비율에 따라 RNA 의 양과 질을 확인할 수 있다

핵산은 260nm 파장을 흡수하고, 단백질과 페놀 화합물은 280nm 에서 최대 흡수력을 갖는다.

유기물질들은 225nm 파장 주변에서 강한 흡수력을 갖는다.

A260/A280 은 단백질에 대한 핵산의 양을 보여주며 순수한 RNA 의 경우에는 1.8 의 값을 가진다.

비율이 낮을수록 단백질 함량이 높음을 보여준다. A260/A230 은 유기물질과 페놀 등에 대한
핵산의 양을 보여주며 순수한 RNA 의 경우에는 2.0 에 근접한 비율을 갖고, 비율이 1.8 보다 낮을
시에는 순수한 샘플이 획득되지 않음을 알 수 있다.

Ⅳ. 결론
RNA 는 세포 분열, 분화 및 성장과 세포 노화 및 사망에 이르는 세포 전 생애 조절에 중요한 역할을 하며
질병에 따라 RNA 의 결함, 조절, 유전자 발현 패턴, 분해 정도가 달라지기 때문에 분자생물학적 연구에서
이용가치가 높다. 또한 RNA 를 이용한 신원 확인이나 사인 및 사망추정시간을 규명해내는 등
법의분야에서도 쓰일 것이라 예상된다. 즉, RNA 는 한 인간의 삶과 죽음에 밀접한 관련을 가지며 체내
지문과도 같은 역할을 하기때문에 삶을 위한 질병 연구 뿐 아니라 죽음과 관련한 범죄 과학 수사 및
응용기술에 활용할 수 있도록 더욱 발전시켜야함을 깨달았다.