ЗАВДАННЯ Любиченко Вадим БІО-2001

1. Ознайомитися з принципом теста.

2. Оформити бланк теста за формою

Тести для самостійного опрацювання

1. Тест з лакмусовим молоком, або «штормова реакція».

2. Тест на редукцію ТТХ (хлориду трифенілтетразолю С19Н15СlN4)
3. Тест на пероксидазу.
4. Тест ONPG
5. Тест на гідроліз ескуліна.
6. Тести на утилізацію органічних кислот та малоната.
7. Тест на гідроліз гіпурата натрія.
8. Тести на ДНКазу и цистиназу (проба Пізу).
9. Тест на уреазу (проба Заксе)
10. Визначення нітратредуктази
11. САМРтест и тести на ліпази.
12. Тести на визначення рухомості і тест на спороутворення.
13. Тести на утворення піоцианіна і флуоресцуючих пігментів на середовищі Кінга.
14. Тест на утилізацію цитрату
15. Тест на ферментативний гідроліз казеїну

План підготовки бланка тесту

1. Назва .
2. Принцип тесту та методу.
3. Прописи середовищ, реактивів та реагентів.
4. Техніка постановки.
5. Облік результатів.
6. Коло мікроорганізмів, для ідентифікації яких використовується тест.

Назва Принцип тесту та Прописи Техніка Облік результатів Коло

середовищ, постановки мікроорганізмів,
 методу реактивів та для ідентифікації
реагентів яких
використовується
тест

Тест з Використовується Лакмусове молоко Підготовка Червоний колір Ідентифікації

лакмусовим для виявлення готується, додаючи лакмусового вказує на кислотну бактерій, які мають
молоком, або кислотнолужних лакмус до молока. молока. Додати реакцію. Чим здатність згортати
"штормова властивостей Воно містить декілька крапель інтенсивніший молоко. Цей тест
реакція" речовин. Цей тест є лактозу та лакмус, лакмусу до червоний колір, може
простим та який допомагає звичайного молока. тим кисліше застосовуватися для
ефективним визначити середовище.Блакит виявлення
способом кислотність або Тестування розчину ний колір вказує на молочнокислих та
визначення pH лужність розчину. Додати декілька лужну реакцію. протеолітичних
розчинів. Основний крапель розчину, Чим інтенсивніший мікроорганізмів.
принцип тесту який ви хочете блакитний колір,
полягає в тому, що перевірити, до тим лужніше Зокрема, цей тест
Реактиви такі ,як лакмусового корисний для
лакмус, який є кислота (наприклад, середовище.
природнім молока.Спостереже виявлення
соляна або оцтова) ння за зміною молочнокислих
барвником, змінює Використовується
свій колір з кольору.Якщо бактерій, таких як
для підняття реакція є кислою, види роду
блакитного до кислотності
червоного або лакмусове молоко Lactobacillus, які
розчину.Луг змінить колір на можуть
навпаки, в (наприклад, натрій
залежності від pH червоний.Якщо ферментувати
гідроксид) реакція є лужною, лактозу у молоці,
середовища. Використовується лакмусове молоко утворюючи молочну
для підняття змінить колір на кислоту. Молочна
лужності розчину. блакитний. кислота здатна
згортати білки
молока, що
призводить до зміни
консистенції молока.

Інші бактерії, такі як

види родів Proteus і
Pseudomonas,
можуть виробляти
протеази, які
розщеплюють білки
у молоці, також
призводячи до його
згортання.

Тест на редукцію Принцип полягає у Середовище Перевести Спостерігати за Такі тести можуть
ТТХ (хлориду визначенні мікроорганізми у зміною кольору використовуватися
трифенілтетразол здатності Бульйон для спеціальне середовища після для ідентифікації
ю С19Н15СlN4) мікроорганізмів до вирощування середовище, яке інкубації. мікроорганізмів, що
редукції хлориду мікроорганізмів.Реа містить ТТХ. Позитивний володіють
трифенілтетразолю ктиви/реагенти результат може редукційними
(ТТХ), що Трифенілтетразолій Інкубувати при виявлятися зміною властивостями,
супроводжується хлорид (ТТХ). оптимальних кольору внаслідок наприклад, деякі
зміною кольору умовах для редукції ТТХ. штами Escherichia
середовища. мікроорганізмів. coli.

Метод включає
витримання
мікроорганізмів в
середовищі з ТТХ і
спостереження за
зміною кольору.
 Тест на Принцип полягає у Мікроорганізми Додається Спостерігання за Тест може
пероксидазу визначенні вирощуються у індикатор для зміною кольору використовуватися
наявності ферменту спеціальному пероксидази. індикатора. для визначення
пероксидази в середовищі. Позитивний наявності
мікроорганізмах. результат може пероксидази у
Пероксидаза є виявлятися зміною бактеріях,
ферментом, який кольору внаслідок наприклад, деяких
каталізує реакції реакції. видів Staphylococcus.
звільнення кисню з
перекису водню.
Метод може
включати
використання
спеціального
індикатора, який
змінює кольори під
дією пероксидази.

Тест ONPG Тест визначає Середовище Вирощування Спостерігання за Тест може

наявність Спеціальне мікроорганізмів у зміною кольору використовуватися
бетагалактозидази в середовище з спеціальному середовища. для визначення
бактеріях, яка ONPG. середовищі з ONPG. Позитивний наявності
гідролізує ONPG, Реактиви/реагенти результат бетагалактозидази у
утворюючи жовтий ONPG. виявляється зміною бактеріях,
продукт. Зміна кольору внаслідок наприклад, у видів
кольору свідчить гідролізу ONPG. Escherichia coli.
про позитивний
результат.

Тест на гідроліз Принцип полягає в Середовище Вирощування Спостереження за Тест може

ескуліна. здатності деяких Спеціальне мікроорганізмів у зміною кольору використовуватися
мікроорганізмів середовище для спеціальному середовища. для визначення
гідролізувати гідролізу ескуліна. середовищі з Позитивний наявності
ескулін, утворюючи ескуліном та результат може ескулінгідролізуючи
есцин та глюкозу. Реактиви/реагенти індикатором. виявлятися х мікроорганізмів,
Метод може Ескулін. Індикатор темнокоричневим таких як види
включати (зазвичай забарвленням, що Enterococcus.
використання феррихлорид). свідчить про
індикатора, який гідроліз ескуліна.
реагує з утвореним
есцином, що має
темнокоричневий
колір.

Тести на Принцип полягає у Середовище Вирощування Спостереження за Такі тести можуть

утилізацію визначенні мікроорганізмів у ростом використовуватися
органічних здатності Спеціальні спеціальних мікроорганізмів у для ідентифікації
кислот та мікроорганізмів середовища для середовищах з відповідних бактерій, які мають
малоната використовувати тестів на утилізацію відповідними середовищах. конкретні
органічні кислоти органічних кислот джерелами вуглецю. Позитивний властивості щодо
або малонат як та малоната. результат може утилізації
джерело вуглецю. Реактиви/реагенти виявлятися зміною органічних кислот
Метод може кольору або pH або малоната.
включати Органічні середовища.
використання кислоти (залежно
спеціальних від конкретного
середовищ, що тесту).
містять органічні
Малонат
кислоти або
 малонат, а також (залежно від
індикатори. конкретного тесту).

Тест на гідроліз Принцип полягає в Середовище Вирощування Спостереження за Тест може

гіпурата натрія гідролізі Спеціальне мікроорганізмів у зміною кольору використовуватися
мікроорганізмами середовище для спеціальному середови для ідентифікації
гіпурата натрія, що гідролізу гіпурата середовищі з бактерій, які мають
супроводжується натрія. гіпуратом натрія та здатність
утворенням аміаку Реактиви/реагенти індикатором. ща. Позитивний гідролізувати
та барбітурової Гіпурат натрія. результат може гіпурат натрія,
кислоти. Метод Індикатор (зазвичай виявлятися зміною наприклад, деякі
може включати фенолчервоний). кольору або види Streptococcus та
використання реакцією Enterococcus.
індикаторів, таких індикатора.
як фенолчервоний.

Тести на Принцип тесту Середовище для Колонії Позитивний Тест може

ДНКазу и полягає в тесту містить мікроорганізмів результат вказує на використовуватися
цистиназу визначенні специфічні викладаються на наявність та для ідентифікації
(проба Пізу) наявності та субстрати для спеціальне активність ДНКази бактерій, грибів та
активності ДНКази та середовище для та цистинази у інших
ферментів ДНКази цистинази, а також тесту.Запускається мікроорганізмі. мікроорганізмів, які
та цистинази у індикатор реакції. реакція та мають зазначені
мікроорганізмів. Реактиви спостерігається ферменти.
Для цього включають зміна кольору або
використовується специфічні інші візуальні
специфічний субстрати та зміни.
субстрат, який індикатори.
змінює свій колір
або вид у
присутності цих
ферментів.

Тест на уреазу Тест базується на Середовище Колонії Позитивний Тест широко

(проба Заксе) виявленні містить урею як мікроорганізмів результат вказує на використовується
активності уреази, субстрат, індикатор викладаються на наявність та для ідентифікації
яка розщеплює реакції та буферні спеціальне активність уреази у бактерій, зокрема
урею на аміак та компоненти. середовище для мікроорганізмі. для виділення групи
вуглекислоту. Зміна тесту. Enterobacteriaceae.
реакційного Спостерігається
середовища в зміна кольору або
результаті індикаторної
виділення аміаку реакції.
може бути виявлена
індикатором.

Визначення Тест на визначення Середовище Колонії Позитивний Тест

нітратредуктази нітратредуктази містить нітрати як мікроорганізмів результат вказує на використовується
спрямований на субстрат та викладаються на наявність та для ідентифікації
виявлення здатності індикатори реакцій. спеціальне активність бактерій та археїв,
мікроорганізмів Реактиви можуть середовище для нітратредуктази у здатних до редукції
здійснювати включати хімічні визначення мікроорганізмі. нітратів.
редукцію нітратів сполуки для нітратредуктази.Піс
до нітритів або фіксації продуктів ля інкубації
інших продуктів. редукції. спостерігається
Зазвичай зміна кольору або
використовується індикаторної
реакція з
 використанням реакції.
спеціальних
середовищ, які
містять нітрати та
індикаторні
реагенти.

САМРтест и Принцип тесту та Середовище для Для САМРтесту Для САМРтесту САМРтест
тести на ліпази. методу САМРтест САМРтесту містить мікроорганізми спостерігається використовується
(реакція з саліцилат, амін, викладаються на зміна кольору або для ідентифікації
середовищем, що метанол та інші спеціальне індикаторної мікроорганізмів,
містить саліцилат, компоненти. Тести середовище, що реакції. Для тестів здатних
амін та метанол) на ліпази містять містить саліцилат, на ліпази розщеплювати
використовується тригліцериди або амін та метанол. спостерігається аміни. Тести на
для визначення інші ліпіди як формування зон ліпази
спроможності субстрати та Для тестів на розщеплення використовуються
мікроорганізмів індикаторні ліпази ліпідів. для виявлення ліпаз
ацетильної реагенти. мікроорганізми у бактеріях та
метилкоензиму А викладаються на грибах.
розщеплювати середовище з
аміни. Тести на ліпідами.
ліпази спрямовані
на виявлення
наявності та
активності ліпаз,
ферментів, що
розщеплюють
ліпіди.

Тести на Тест на визначення Для тесту на Для тесту на Результати тесту Такі тести можуть
визначення рухомості рухомість рухомість, культура на рухомість використовуватися
рухомості і тест використовується використовують мікроорганізмів фіксуються для ідентифікації
на для виявлення різні середовища, наноситься на спостереженням за бактерій, наприклад,
спороутворення. здатності такі як міжвузівське поверхню агару, і рухом бактерій родів
мікроорганізмів до середовище спостерігається за мікроорганізмів. Bacillus чи
руху, зокрема, до (середовище рухом. Clostridium, які
руху за допомогою солодкого агару). Результати відомі своєю
війок, флагелів або Додаткові реагенти Тест на тесту на здатністю
інших структур. можуть включати спороутворення спороутворення утворювати спори.
Тест на стимулятори росту зазвичай включає визначаються
спороутворення або різні забарвлені стерильне наявністю або
визначає здатність речовини для перенесення відсутністю спор в
мікроорганізмів легшого визначення культури на культурі.
утворювати спори руху. відповідне
стійкі до невигідних середовище, яке
умов форми, що Тест на сприяє утворенню
забезпечують їх спороутворення спор.
виживання. використовує
середовища, які
сприяють
утворенню спор.
Часто
використовують
середовища Клозера
або інші відомі
середовища для
спороутворення.

Тести на Тести на утворення Середовище Кінга Культура Результати Такі тести можуть
утворення піоцианіна і використовується мікроорганізмів фіксуються бути використані
піоцианіна і флуоресцуючих для визначення наноситься на візуально, для ідентифікації
флуоресцуючих пігментів утворення середовище Кінга, і спостерігаючи за різних груп бактерій,
пігментів на використовуються піоцианіна та інших зберігається при забарвленням або які виробляють різні
середовищі для визначення пігментів. Реактиви відповідних флуоресценцією на види пігментів,
Кінга. здатності для фіксації чи температурах та середовищі. таких як піоцианін
мікроорганізмів витягування умовах. Далі, (синій пігмент),
продукувати пігментів також проводять оцінку флуоресцеїн
пігменти, які можуть забарвлення або (зелений
можуть бути застосовуватися. флуоресценції флуоресцентний
виявлені за пігментів. пігмент) тощо.
допомогою
забарвлення чи
флуоресценції.

Тест на Тест на утилізацію Середовище Культура Якщо Тест на утилізацію

утилізацію цитрату визначає Цитратагар. мікроорганізмів мікроорганізми цитрату часто
цитрату здатність бактерій наноситься на можуть використовується
використовувати Реактиви та цитратагар, і після використовувати для ідентифікації
цитрат як єдиний реагенти Цитрат інкубації цитрат, вони бактерій, таких як
джерело вуглецю натрію, інші спостерігають за будуть виробляти члени родини
для росту. необхідні змінами у алкалічний Enterobacteriaceae,
Основний компоненти для середовищі. продукт, що змінює зокрема, роду
компонент приготування кислотність Klebsiella.
цитратагару цитрат цитратагару. середовища.
натрію, що є єдиним Результат можна
джерелом вуглецю визначити зміною
для мікроорганізмів кольору
у цьому середовищі. середовища або за
допомогою
pHіндикатора.

Тест на Тест на Середовище Культура Результати Тест на

ферментативний ферментативний Казеїнагар або інше мікроорганізмів фіксуються ферментативний
гідроліз казеїну гідроліз казеїну середовище, що розсівається на візуально шляхом гідроліз казеїну
визначає здатність містить казеїн як казеїнагар. Після оцінки зон застосовується для
мікроорганізмів основний джерело інкубації прозорості чи осаду ідентифікації
виробляти азоту. спостерігають за навколо колоній бактерій, здатних
ферменти, які утворенням зон мікроорганізмів. розкладати білки. Це
розкладають білок Реактиви та прозорості або може бути важливим
казеїн на пептиди та реагенти Казеїн, осаду, що свідчить кроком при
амінокислоти. інші компоненти про гідроліз казеїну. визначенні видів
для приготування бактерій, зокрема,
агару. при диференціації
мікроорганізмів, які
розкладають білок.