Лабораторна робота № 13

Тема: “ЯКІСНІ (КОЛЬОРОВІ) РЕАКЦІЇ НА БІЛКИ ТА АМІНОКИСЛОТИ.

ВЛАСТИВОСТІ БІЛКІВ”

Мета: Ознайомитися з якісними (кольоровими) реакціями на білки й амінокислоти. На

прикладі реакцій осадження білків вивчити їх фізико-хімічні властивості.

 Контрольні завдання для домашнього

(письмового) виконання

1. Намалюйте схематично, як утворюється первинна, вторинна, третинна та четвертинна

структура білку. Які зв’язки приймають участь в утворенні цих структур?
2. Наведіть приклади простих і складних білків. Дайте характеристику протеїнам і протеїдам.
3. Які функції виконують білки? Наведіть приклади.

Питання для обговорення

1. Амінокислоти, їх будова, класифікація.

2. Фізико-хімічні властивості амінокислот.
3. Які Ви знаєте якісні реакції на амінокислоти?
4. Білки. Функції білків.
5. Назвіть структури білка. Які типи зв'язків для них характерні?
6. Що таке висалювання і денатурація білка? Які зміни відбуваються при цьому в білковій
молекулі?
7. Класифікація білків.

ХІД РОБОТИ

Матеріали та реактиви: штатив для пробірок, пробірки, пробіркотримач, сухе пальне,

сірники; 1%-ний розчин яєчного білка, 10%-ний розчин гідроксиду натрію (NaOH), 1%-ний
розчину сульфату купруму (CuSO4), розчин нінгідрину, нітратна кислота (HNO3), волосся або
шматочок нігтя, розчин ацетату плюмбуму ((CH3COO)2Pb), розчин нітриту натрію (NaNО2),
концентрована оцтова кислота (СН3СООН конц.).
Нерозведений яєчний білок, розчин сульфату амонію ((NH 4)2SO4), хлоридна кислота (HCl).

Дослід 1. Біуретова реакція (Піотровського) відкриває пептидний зв'язок (-СО-NH-) у

білках.

Принцип методу. У лужному середовищі розчин білка при взаємодії з іонами купруму
набуває синьо-фіолетового кольору, а продукти його неповного гідролізу − пептони − дають
рожеве забарвлення.
Біуретову реакцію дають речовини, що поміщають не менше двох пептидних зв'язків.

Хід роботи. До 5 крапель 1%-ного розчину яєчного білка додають 5 крапель 10%-ного
розчину гідроксиду натрію, 2 краплі 1%-ного розчину сульфату купруму й усе перемішують.
Вміст пробірки набуває фіолетового кольору.
Примітка. Не можна додавати надлишок сульфату купруму, тому що синій осадок гідрату
окису купруму маскує характерне фіолетове забарвлення біуретового комплексу білка.

Дослід 2. Нінгідринова реакція характерна для аміногруп, що знаходяться в α-

положенні у вільних амінокислот.
 Принцип методу. α − Амінокислоти при нагріванні з нінгідрином окислюються до
альдегідів, оксиду вуглецю (IV) і аміаку. Аміак реагує з нінгідрином з утворенням комплексу, що
має фіолетово-синій колір.

Хід роботи. До 3-4 крапель 1%-ного розчину яєчного білка додають 1-2 краплі розчину
нінгідрину і нагрівають. У пробірці з'являється рожево-фіолетове забарвлення, що із часом
синішає.

Дослід 3. Ксантопротеїнова реакція (Мульдера) доводить присутність у білках

ароматичних амінокислот (триптофан, фенілаланін, тирозин).

Принцип методу. При обробці розчину білка концентрованою нітратною кислотою

бензольне кільце амінокислот нітрується з утворенням нітросполук, забарвлених у жовтий колір.

Хід роботи. У пробірку до 3-4 крапель розчину білка додають 1-2 краплі нітратної
кислоти. Пробірку обережно нагрівають і стежать за зміною забарвлення, утворюється
нітросполука жовтого кольору.

Дослід 4. Реакція Фоля на амінокислоти, що поміщають сірку (цистеїн).

Принцип методу. При нагріванні білка з лугом сірковмісні амінокислоти відщеплюють

сірку у виді сірководню, що з ацетатом свинцю дає сірчистий свинець чорного кольору (PbS).

Хід роботи. В одну пробірку поміщають трохи волосся або шматочок нігтя, а в іншу − 5
крапель 1%-ного розчину яєчного білка. У кожну з пробірок додають по 1 краплі розчину
плюмбуму ацетату (CH3COO)2Pb, і 1 краплю розчину гідроксиду натрію (NaOH) і нагрівають до
кипіння.

Дослід 5. Визначення аміногрупи - NН2 в амінокислотах і білках (реакція Ван-

Слайка).

Принцип методу. Нітратна кислота розщеплює амінокислоти із звільненням

газоподібного азоту.

Хід роботи. У пробірку наливають 3-5 мл 1%-ного розчину яєчного білка або
амінокислоти, додають рівний об’єм розчину нітриту натрію (NaNО 2) і декілька крапель
концентрованої оцтової кислоти (СН3СООН). При цьому утворюється азотиста кислота, що
вступає в реакцію з аміногрупою. Виділяються бульбашки газу – азоту.

Результати дослідів заносять у таблицю такої форми:

№ Назва Застосовувані Поява Що відкриває

з/п реакції реактиви фарбування така реакція
1 2 3 4 5

Дослід 6. Зворотне осадження білків − висалювання.

Принцип методу. Висалювання (зворотна реакція) − осадження білків із розчинів за

допомогою великих концентрацій солей лужних і лужноземельних металів: Na 2SO4, NaCl, MgSO4, а
також (NH4)2SO4. При їх додаванні до розчину білка відбувається дегідратація білкових часток, і
білки випадають в осад. При додаванні води до цього розчину гідратаційна оболонка білкових
часток відновлюється, і осад розчиняється.
 Хід роботи. У пробірку наливають 1 мл нерозведеного яєчного білка, додають такий же
об’єм розчину сульфату амонію (NH4)2SO4. Рідину збовтують і спостерігають невеличке
помутніння. Доливають 1 мл води − помутніння зникає.

Дослід 7. Незворотне осадження білків.

Принцип методу. Денатурація білка (незворотне осадження) − це порушення структури

білка і втрата ним біологічних властивостей. Осаджуються білки солями важких металів,
мінеральними й органічними кислотами, кип'ятінням.
При незворотному осадженні порушується гідратаційна оболонка і заряд білка. При
подальшому додаванні води осаджений білок не переходить у розчин.

Хід роботи.
а) осадження білків солями важких металів. У пробірки наливають по 1 мл
нерозведеного білка, в одну додають декілька крапель розчину плюмбуму ацетату − (CH 3COO)2Pb,
у другу − розчину сульфату купруму − CuSO4;
б) осадження білків мінеральними кислотами. У дві пробірки наливають по 1 мл кислот:
у першу − нітратну (НNO3), у другу − хлоридну (HCl). Потім у кожну обережно по стінці
доливають рівний об’єм розчину білка;
в) осадження білків при нагріванні. У пробірку наливають 1 мл нерозведенного білка і
кип'ятять.
Незворотність осадження в пунктах досліду 7 установлюють додаванням 0,5-1,0 мл води.
Результати дослідів заносять у таблицю такої форми:
№ Досліджу- Осаджувач Утворення Що Висновок
з/п ваний осаду відбувається
розчин після додавання
води
1 2 3 4 5 6

Зробіть висновок до всієї лабораторної роботи.