Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

3. Nuôi trồng vi tảo

Nuôi cấy vi sinh vật quang hợp

yêu cầu:
(1) ánh sáng mặt trời hoặc nguồn sáng nhân tạo, có phổ phát xạ thích
hợp trong vùng bức xạ hoạt động quang hợp (PAR), nằm trong khoảng
từ 400 đến 700 nm,

(2) nguồn carbon vô cơ, chẳng hạn như CO2 hòa tan,

(3) chất dinh dưỡng khoáng bao gồm các chất dinh dưỡng chính như N, S, P và các
chất dinh dưỡng vi lượng như Mg, Ca, Mn, Cu, Fe, v.v., và

(4) một tập hợp các điều kiện nuôi cấy thuận lợi bao gồm pH, nhiệt độ và
oxy hòa tan.

1
 Giới hạn nhiệt độ cho
đời sống vi tảo. Báo cáo
tăng trưởng tối ưu
nhiệt độ cho
vi tảo đại diện được hiển thị.
Tảo đỏ được chỉ định trong
màu đỏ, tảo xanh trong

màu xanh lá cây, tảo lam (vi

khuẩn lam) màu xanh lam và
tảo cát màu nâu.
(Varshney và cộng sự 2015)

- giới hạn pH cho

đời sống vi tảo.
Ví dụ đã biết
giới hạn pH cho
tiêu biểu
ưa axit,
mesophilic và
tảo ưa kiềm
Và
vi khuẩn lam

2
 Kỹ thuật đo lường phân tích và
nuôi cấy cơ bản
-Các nguyên tắc cơ bản của nuôi cấy vi sinh vật nói
chung có thể áp dụng cho vi tảo.
-Khả năng độc đáo của vi tảo là sử dụng năng lượng
ánh sáng.
- Việc cung cấp ánh sáng cần được đáp ứng trong
quá trình phân lập, nuôi trồng và duy trì vi tảo
quang tự dưỡng và hỗn hợp.

Phân lập vi tảo

-Nuôi cấy là một bản sao đồng nhất về mặt di truyền được nhân giống từ một tế bào hoặc sợi riêng lẻ.

Nguồn vi tảo
(Mẫu nước và đất)

cách ly trực tiếp

Sự phong phú của một nền văn hóa
(Các tế bào đơn lẻ hoặc sợi
(chất dinh dưỡng phù hợp
nhỏ có thể được nhặt dưới
trung bình)
kính hiển vi soi nổi)

Sự cách ly
Sự cách ly
(khác biệt về hình thái
(thạch vừa hoặc tươi
phân lập trên thạch
môi trường vô trùng)
trung bình)

3
 cô lập của rửa tế bào
Sinh vật sau đó được chuyển qua một loạt
của môi trường vô trùng.

vi tảo
Độ dốc mật độ Vi tảo được tách ra khỏi vi khuẩn bằng cách sử dụng
ly tâm ly tâm gradient tỷ trọng.

sản xuất Hầu hết các loại tảo có sức đề kháng cao hơn một chút đối với
chiếu tia cực tím
nền văn hóa axen tia cực tím hơn tế bào vi khuẩn.
(đơn thức là
miễn phí

Sonicate để phá vỡ tảo sợi thành chiều dài nhỏ

của cái khác
lọc (3-5 tế bào). pha loãng
sinh vật) mẫu sau đó được lọc chân không.

Để xác nhận độ tinh khiết của Nhiều loại kháng sinh đã được sử dụng hiệu quả trong
một nền văn hóa tảo, nền văn thuốc kháng sinh
loại bỏ vi khuẩn từ tảo.
hóa được cấy vào môi trường
dinh dưỡng hữu cơ và
ủ trong bóng tối 2-3 ngày.
Máy đo dòng chảy
Sử dụng phương pháp tế bào học dòng chảy
máy phân loại tế bào

Sàng lọc các phân tử hoạt tính sinh học

phương pháp trực tiếp

• phát hiện một sản phẩm mục tiêu cụ thể (sắc tố, axit béo, polysacarit,
dược phẩm và hóa chất nông nghiệp)

• Quy trình phân tích nhanh, chọn lọc và có độ nhạy cao để phát hiện
sản phẩm trao đổi chất

• HPLC, GC, MS và NMR .

phương pháp gián tiếp

• đo hoạt tính sinh học

• Xét nghiệm sinh học (hoạt tính kháng sinh và kháng u)

• Sàng lọc hoạt tính chống khối u được thực hiện với nuôi cấy tế bào khối u.

Sàng lọc hoạt tính kháng sinh được thực hiện với các vi sinh vật gây bệnh

số 8

4
 DUY TRÌ, BẢO QUẢN CÁC DẠNG VI KHUẨN

-Các chủng tảo có thể được duy trì trong môi trường thạch lỏng hoặc thạch
đặc.

-Để duy trì chủng tảo, quá trình nuôi cấy có thể được giữ ở
mức độ chiếu xạ thấp, ở nhiệt độ phòng (15–20◦C) và được
cấy truyền 6 tháng một lần.
-Để bảo quản, hầu hết các loại tảo phải được giữ ở nhiệt độ
phòng.
-Một số loài tảo có thể được giữ trong nitơ lỏng để bảo quản
lâu dài.

động học tăng trưởng

-Một tập hợp các mô hình toán học và phân tích, được sử dụng để thiết kế các
thí nghiệm về năng suất và tăng trưởng của vi sinh vật, dự đoán kết quả
của chúng và giải thích kết quả.
-Mục tiêu chính của các nghiên cứu động học tăng trưởng là dự đoán, đối với bất kỳ
tập hợp điều kiện nào, tốc độ sản xuất sinh khối, nghĩa là năng suất.
Ở đây, trọng tâm cụ thể là vi tảo phát triển theo phương pháp
quang tự dưỡng (ví dụ: năng lượng ánh sáng và CO2).
-Khái niệm trung tâm trong động học tăng trưởng là “tốc độ tăng trưởng cụ thể”, được
định nghĩa là tốc độ tăng khối lượng tế bào trên một đơn vị khối lượng tế bào.

10

5
 Thông số tăng trưởng

-Nồng độ sinh khối – X (g L-1):

-Nhân đôi thời gian/thời gian thế hệ –tđ: Thời gian cần thiết để đạt được gấp
đôi số lượng tế bào khả thi
-tốc độ tăng trưởng cụ thể- µ (h−1): phần tăng sinh khối trong một đơn vị thời
gian, nghĩa là tăng một g-sinh khối nhất định từ mỗi gam sinh khối hiện có
mỗi giờ (tốc độ tăng trưởng trung bình của tất cả các tế bào có trong môi
trường nuôi cấy)
-Năng suất sinh khối Px (kg m−3h−1). thường được thể hiện dưới dạng năng
suất thể tích

11

Thông số tăng trưởng

Eriksen, 2008

12

6
 Quy trình lên men điển hình

Stanbury, PF, Whitaker, A., & Hall, SJ (2013).Nguyên tắc công nghệ lên men.Elsevier.

13

HÌNH THỨC VĂN HÓA

-Tu luyện trên phương tiện truyền thông rắn

-Điều này có thể được thực hiện trên đĩa thạch trong đĩa petri, hoặc trên thạch nghiêng trong ống nghiệm

Bux, F., & Chisti, Y. (Eds.). (2016). Công nghệ sinh học tảo: sản phẩm và quy trình. lò xo.

14

7
 nuôi cấy hàng loạt

-Đây là phương pháp phổ biến nhất để nuôi cấy tế bào vi

tảo.
-Trong hệ thống nuôi cấy theo lô đơn giản, một lượng
giới hạn môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh và chất cấy
tảo được đặt trong bình nuôi cấy và ủ trong môi
trường thuận lợi hoặc được xác định theo cách khác
để sinh trưởng. Có yêu cầu thấp để khử trùng hoàn
toàn.
-Bình nuôi cấy có thể là bình nón đơn giản hoặc bình lên
men được kiểm soát môi trường
-Trong môi trường nuôi cấy quang hợp hoặc hỗn hợp, CO2 được cung
cấp (ví dụ 5 % v/v CO2 trong không khí).

-Môi trường nuôi cấy có thể được chiếu sáng bên ngoài bằng
nguồn sáng tự nhiên hoặc nhân tạo.
Thiết lập lên men hàng loạt

McNeil, B., & Harvey, L. (Eds.). (2008).Thực hành công nghệ lên men.John Wiley & các con trai.

15

Trộn và nhiễu loạn

-để ngăn chặn các tế bào vi tảo lắng xuống

đáy của hệ thống nuôi cấy

-nhiễu loạn cao liên quan đến gradient dinh

dưỡng và khí được hình thành xung quanh các
tế bào tảo trong quá trình hoạt động trao đổi
chất của chúng
-Sự nhiễu loạn làm cho bức xạ mặt trời tác động
lên bề mặt của hệ thống nuôi cấy được phân
bổ đồng đều hơn cho tất cả các tế bào tảo.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2016.07.108

16

số
 Các pha sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy
vi tảo quang hợp
-Giai đoạn tụt hậu:Độ trễ tăng trưởng có thể
là do sự hiện diện của các tế bào hoặc bào
tử không thể sống được trong chất cấy
hoặc giai đoạn điều chỉnh sinh lý do thay
đổi điều kiện dinh dưỡng hoặc nuôi cấy.

- Giai đoạn mũ
- Giai đoạn tăng trưởng tuyến tính

- Giai đoạn tăng trưởng ổn định

17

Các pha sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy

vi tảo quang hợp
-giai đoạn trễ
-Giai đoạn mũ:Ở giai đoạn trễ muộn, các tế
bào đã thích nghi với môi trường mới và
bắt đầu phát triển và nhân lên (giai đoạn
tăng trưởng nhanh),và cuối cùng vào số
mũ (hoặclogarit) giai đoạn tăng trưởng.Ở
giai đoạn sau, các tế bào phát triển và
phân chia theo hàm số mũ của thời gian,
miễn là các chất khoáng và năng lượng
ánh sáng được bão hòa.

- Giai đoạn tăng trưởng tuyến tính

- Giai đoạn tăng trưởng ổn định

18

9
 Các pha sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy
vi tảo quang hợp
- Giai đoạn tụt hậu:

- Giai đoạn mũ
-Giai đoạn tăng trưởng tuyến tính:Khi đạt được
nồng độ tế bào này, sinh khối tích lũy với
tốc độ không đổi (giai đoạn tăng trưởng
tuyến tính) cho đến khi một số chất nền
trong môi trường nuôi cấy hoặc chất ức
chế trở thành chất giới hạn.
nhân tố.

- Giai đoạn tăng trưởng ổn định

19

Các pha sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy

vi tảo quang hợp
-Giai đoạn trễ: Giai đoạn lũy thừa
- Giai đoạn tăng trưởng tuyến tính

- Giai đoạn tăng trưởng ổn định

-Cuối cùng, chất nền hòa tan trong môi

trường nuôi cấy cạn kiệt; nền văn hóa
bước vào giai đoạn ổn định.
Trong giai đoạn này, quá trình quang hợp
vẫn đang được thực hiện và các sản phẩm
carbon lưu trữ, chẳng hạn như tinh bột và
lipid trung tính được tích lũy.

20

10
 nuôi cấy liên tục

-Phương pháp này dựa trên các quan sát rằng các chất nền bị cạn
kiệt và các sản phẩm tích tụ trong quá trình tăng trưởng.
-Để duy trì sự phát triển của tế bào, cần bổ sung cơ chất hạn chế
sinh trưởng (nếu có) và loại bỏ hoặc pha loãng sản phẩm ức
chế sinh trưởng bằng cách bổ sung môi trường nuôi cấy mới.

-Trong môi trường nuôi cấy dòng chảy liên tục:

-môi trường nuôi cấy tươi được cung cấp cho môi trường nuôi cấy hỗn hợp đồng
nhất

-nuôi cấy được loại bỏ liên tục hoặc không liên tục.

21

Thiết lập nuôi cấy dòng chảy liên tục

Tốc độ nạp trung bình và

tốc độ loại bỏ dịch nuôi
cấy (F) là
giống nhau, và thể tích
nuôi cấy là một hằng số, V

Thuật ngữ F/V thể hiện tỷ

lệ pha loãng dịch cấy (D).

22

11
 Chemostat (môi trường hóa học
không đổi)
-Loại hình nuôi cấy liên tục đặc biệt khitỷ lệ
bổ sung trung bình Vàtỷ lệ loại bỏ văn hóa
là như nhau, và khối lượng nuôi cấy do đó
được duy trì ở mức không đổi

-Nó cho phép điều chỉnh đầy đủ sinh lý của tế

bào theo các điều kiện nuôi cấy phổ biến
và duy trì tốc độ tăng trưởng cụ thể ở các
giá trị được xác định trước.

23

Máy điều hòa độ đục (độ đục không đổi)

-Máy điều hòa độ đục là mộtnuôi

cấy liên tục thể tích không đổi,
ở đâunồng độ của nền văn hóa
được duy trì ở một giá trị đặt
trướcqua điều chỉnh tốc độ
dòng chảy trung bình thông
qua vòng điều khiển phản hồi

-Máy điều hòa độ đục là

một công phu của
hóa trị

24

12
25

xích lô (chiếu sáng theo chu kỳ

liên tục)
-Tảo trong môi trường tự nhiên tiếp
xúc với nguồn cung cấp ánh
sáng không liên tục theo kiểu
ngày đêm.
-Để mô phỏng mô hình chiếu sáng
hàng ngày, một nền văn hóa
chịu các khoảng thời gian sáng
và tối xen kẽ được gọi là
cyclostat (chiếu sáng theo chu kỳ
liên tục)

26

13
 Văn hóa Fed-batch

-Đặc điểm cơ bản của phương pháp này là kiểm soát nồng độ chất
dinh dưỡng trong bình phản ứng bằng cách thay đổi tốc độ bổ
sung chất dinh dưỡng
-Trong canh tác hàng loạt,một hoặc nhiều chất dinh dưỡng được
thêm vào một cách vô trùng,Vàvăn hóa từng bước được bổ sung
vào lò phản ứng sinh học cùng lúc thể tích của nuôi cấy lỏng
trong lò phản ứng sinh học tăng lên trong thời gian này.
-Ưu điểm chính của nuôi cấy theo mẻ so với nuôi cấy theo mẻ
-Sự gia tăng năng suất
-nâng cao năng suất bằng cách bổ sung tuần tự các chất dinh dưỡng có kiểm soát,

-khả năng đạt được mật độ tế bào cao hơn

-tổng hợp sản phẩm kéo dài.

27

Văn hóa Fed-batch

-Nuôi cấy liên tục theo mẻ là quy trình nuôi cấy dòng chảy liên
tục trong công nghiệp được sử dụng rộng rãi nhất. Khối
lượng của nền văn hóa có thể là:
-nạp môi trường hoàn chỉnh (Variable Volume FBC) hoặc hằng
số (Constant Volume FBC)
-bằng cách cung cấp chất nền hạn chế tăng trưởng ở dạng rắn,
dung dịch đậm đặc, khí hoặc ánh sáng.

-Chế độ nuôi cấy fed-batch có thể

-làm giảm hiệu quả tác dụng ức chế của chất dinh dưỡng
-Duy trì môi trường nuôi cấy thích hợp cho sự phát
triển của vi tảo.

28

14
 nuôi cấy bán liên tục
-Trong quá trình nuôi cấy bán liên tục, một mẫukhối lượng cố định
được loại bỏ tại thời điểm thường xuyêncác khoảng thời gian để
thực hiện các phép đo và/hoặc thu hoạch các thành phần nuôi cấy,
vàmột thể tích tương đương của môi trường tươi ngay lập tức được
thêm vàođến văn hóa
-tăng cường tức thời nồng độ chất dinh dưỡng và pha loãng
nồng độ tế bào.
-Kết quả là đường cong nồng độ tế bào theo thời gian có dạng
răng cưa do nồng độ tế bào được pha loãng định kỳ.

-Nuôi cấy bán liên tục đi vào trạng thái ổn định dao động hoặc
trạng thái gần như ổn định.

DOI 10.1007/s10811-016-0897-1 https://doi.org/10.1002/bit.260281002

29

Lô hàng Fed-batch bán liên tục Tiếp diễn

lợi thế đơn giản tốt hơn điều khiển cácdinh dưỡng nội dung là sự phát triển tỷ lệ Và
lứa tuổi hoạt động các tăng, các sinh học hoạt động trao đổi chất của
nồng độ của mật độ giảm, và ánh sáng các tế bào tương đối ổn
chất dinh dưỡng trong truyền qua là định, do đó đạt được
giải pháp nuôi cấy tăng - các mục đích nuôi cấy ổn định
giá thấp quang hợp hiệu quả là và nhanh chóng các
đáng kể được cải thiện và tốc độ tăng vi tảo hoặc sản xuất một
tăng các trưởng được tăng lên lượng lớn các chất chuyển
sinh khối của hóa
vi tảo Và là một trong những phương pháp
sản lượng cuối nuôi cấy tốt nhất để sản xuất
cùng mục tiêu dầu diesel sinh học trên quy mô lớn bằng cách
sản phẩm sử dụng vi tảo

Sử dụng thông thường có hiệu quả được sử dụng rộng rãi cho nuôi cấy Được sử dụng trong sản
đã sử dụng cải thiện các quy mô lớn và cho nghiên cứu trong xuất bột vi tảo với khối
canh tác tỷ lệ sử dụng của phòng thí nghiệm về vi tảo lượng lớn và trong sản xuất
phương pháp TRONG chất dinh dưỡng. ổn định một số
các các chất chuyển hóa quan trọng.
phòng thí nghiệm

30

15
 Nuôi cấy tái chế tế bào

-Các thiết bị có thể được kết hợp trong một hệ thống nuôi cấy
để giữ lại hoặc đưa các tế bào trở lại môi trường nuôi cấy,
nhằm tăng nồng độ và năng suất sinh khối.
-Cách tiếp cận này đặc biệt hữu ích đối với các môi trường nuôi cấy có tốc
độ tăng trưởng cụ thể rất chậm, các tế bào được giữ lại trong môi
trường nuôi cấy bằng hệ thống lọc tế bào

-Ngoài ra, bằng cách lắng trọng lực đơn giản của môi trường nuôi cấy
đã loại bỏ, huyền phù tế bào cô đặc được đưa trở lại môi trường
nuôi cấy.

31

Truyền dịch liên tục (nuôi cấy cố định)

Truyền dịch liên tục trong đó quần thể tế

bào bất động được tưới máu bằng môi
trường tươi
- Cái bẫy:Nhiều loài vi tảo khác nhau đã
được gắn kết thành công trong gel
polysacarit tự nhiên (canxi hoặc bari
alginate, agar, carrageenan) hoặc polyme
tổng hợp (acrylamide, nhựa có thể liên
kết ngang bằng hình ảnh, urethane) và
cho thấy tính ổn định và năng suất được
cải thiện
- hấp thụ:Các tế bào tảo có thể được hấp
thụ về mặt hóa học hoặc vật lý trên các
giá đỡ rắn, chẳng hạn như bọt
polyurethane và đá san hô.
Vi tảo quang hợp (Chorella Vulgaris) cố định trong hạt polyme sinh
trưởng trong điều kiện tự dưỡng (ánh sáng) trong bioreactor đảo
chiều xử lý nước thải.
http://www.bashanfoundation.org/gmaweb/proyectos2/ilin5.html

32

16
 Ảnh hưởng môi trường đến
thành phần tế bào
-Nhiều loại vi tảo, bất kể nguồn gốc của chúng, có thành phần sinh hóa tương tự (trên
cơ sở tổng lượng carbon hữu cơ trong tế bào), đặc biệt là lượng tương đối của
protein thô, lipid và carbohydrate, khi phát triển nhanh chóng trong điều kiện nuôi
cấy thuận lợi.

dinh dưỡng
môi trường
các nhân tố
yếu tố tài chính:
• N, độ mặn pH
• ánh sáng,
• P,
• nhiệt độ,
• Fe

33

Quá trình lên men điển hình:bộ phận cấu thành cơ bản
1.Công thức của môi trường được sử dụng trong quá trình nuôi cấy sinh vật
trong quá trình phát triển chất cấy và trong thiết bị lên men sản xuất.

2.Khử trùng môi trường, thiết bị lên men và thiết bị phụ trợ.

3.Việc sản xuất một chủng vi khuẩn thuần khiết, đang hoạt động với số
lượng đủ để cấy vào bình sản xuất.

4.Sự phát triển của sinh vật trong thiết bị lên men sản xuất trong điều kiện tối
ưu để hình thành sản phẩm.

5.Việc chiết xuất sản phẩm và tinh chế của nó.

6.Việc xử lý các chất thải được sản xuất bởi quá trình.

34

17