中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ

ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８ · ８９１ ·

·论 著·

益肾壮骨汤对糖皮质激素性骨质疏松小鼠
肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 和肠道菌群的影响
曹雪姣，孙大卫，陈建伟，王佳，严晨，李新莉
大连医科大学基础医学院生物制药教研室，辽宁 大连 １１６０４４

摘要：目的 研究益肾壮骨汤对糖皮质激素 性 骨 质 疏 松 小 鼠 肾 组 织 成 骨 细 胞 特 异 基 因 （ Ｏｓｔ

ｅｒｘ） ｍＲＮＡ
ｉ
和肠道菌群的影响。方法 ＳＰＦ 级昆明小鼠 ４０ 只，分为正常对照组 （ Ｎ 组）、益肾壮骨汤对 照 组 （ ＹＳＺＧ
组）、糖皮质激素性骨质疏松组 （ ｕ 组） 以及益肾壮骨汤低剂量组 （
Ｇｌ １ｇ／ｋｇ，Ｇｌｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组） 和 高 剂
量组 （ ４ｇ／ｋｇ，Ｇｌｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组），每组 ８ 只。除 Ｎ 组 和 ＹＳＺＧ 组，其 余 各 组 小 鼠 臀 肌 注 射 地 塞 米 松 磷
酸钠注射液 （ ５ｍｇ／ｋｇ） 建 立 糖 皮 质 激 素 性 骨 质 疏 松 模 型， 每 周 注 射 ２ 次， 连 续 ６ 周， 之 后 Ｇｌ
２． ｕ＋
ＹＳＺＧ－Ｌ 组和 Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组小鼠再分别灌胃 １ｇ／ｋｇ 和 ４ｇ／ｋｇ 益肾壮骨汤 ６ 周。ｑＲＴ－ＰＣＲ 法检测肾组
织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 水平，ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 和 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 电泳获得肠道菌 群 指 纹 图 谱，分 析 肠 道 菌 群 整 体 差 异
并鉴定优势条带序列。结果 与 Ｎ 组 小 鼠 比 较，Ｇｌ
ｕ 组 肾 组 织 Ｏｓｔｅ
ｒｉｘ ｍＲＮＡ 水 平 显 著 升 高； 与 Ｇｌｕ组
小鼠比较，益肾壮骨汤治疗组肾组织 Ｏｓ ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 水 平 明 显 降 低。ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 图 谱 显 示 ７０５ｂｐ 处 条 带
ｕ 组和益肾壮骨汤治疗组小鼠肠道菌群的差异条带。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 分 析 气 单 胞 菌 为 骨 质 疏 松 小 鼠 肠 道
为 Ｇｌ
优势菌型，益肾壮骨汤给药后小鼠肠道菌群结构 发 生 改 变，气 单 胞 菌 消 失。 结 论 益肾壮骨汤通过下调
肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 水平，抑制气单胞菌等病原菌的增殖来治疗骨质疏松症。
关键词：益肾壮骨汤；糖皮质激素性骨质疏松；成骨细胞特异基因；肠道菌群
中图分类号：Ｒ２８５．
５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５－３７６Ｘ （
２０２１）０８－０８９１－０６
ＤＯＩ编码：１０．
１３３８１／
ｊ．ｃｎｋ
ｉ．ｃ
ｊｍ．
２０２１０８００５

Ｅｆｆ
ｅｃ ｆＹ
ｔｏ ｉＳｈｅｎＺｈｕａｎｇＧｕ ｄｅ
ｃｏ ｃｔ
ｉｏｎｏｎＯｓ
ｔｅｒｉ
ｘ ｍＲＮＡａｎｄ
ｇｕｔｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｔａｉ
ｎｇｌｕｃｏｃ
ｏｒｔ
ｉｃｏｉｄ－ｉ
ｎｄｕｃｅ
ｄｏｓ
ｔｅｏｐｏｒ
ｏｓｉ
ｓｍｉ
ｃｅ
ｉ
ＣＡＯ Ｘｕｅ－ｊａｏ＊，ＳＵＮ Ｄａ－ｗｅｉ，ＣＨＥＮＪｉａｎ－ｗｅｉ，ＷＡＮＧＪ ｉａ，ＹＡＮ Ｃｈｅｎ，ＬＩＸｉ
ｎ－ｌ
ｉ
＊
Ｄｅｐａｒ
ｔｍｅｎ
ｔｏｆ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌ
ｅｇｅｏｆ Ｂａ
ｓｉｃ Ｍｅｄｉ
ｃａｌＳｃ
ｉｅｎｃ
ｅｓ，
Ｄａｌｉａｎ Ｍｅｄｉ ｃａｌＵｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ，Ｄａ ｌａｎ，Ｌｉ
ｉ ａｏｎ
ｉｎｇ１１６０４４，Ｃｈ ｉｎａ
Ｃｏｒｒ
ｅｓｐｏｎｄｉ ｎｇａｕ ｔ
ｈｏｒ：ＬＩＸｉ ｉ，Ｅ－ｍａ
ｎ－ｌ ｌ：ｌ
ｉ ｉｘｉｎｌ
ｉｂｉ
ｏ＠１６３． ｃｏｍ
Ａｂｓｔ
ｒａｃｔ：Ｏｂｊｅ
ｃｔｉ
ｖｅ Ｔｏｅ ｖａｌｕａｔｅｔ ｈｅｅ ｆ
ｆｅｃｔｏｆＹｉＳｈｅｎＺｈｕａｎｇＧｕ （ ＹＳＺＧ）ｄｅｃｏｃ
ｔｉｏｎｏｎ Ｏｓｔ
ｅｒｉ
ｘ ｍＲＮＡ ａｎｄ
ｇｕｔｍ ｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｔ
ａ ｉｎｇｌｕｃｏ
ｃｏｒｔｉｃ
ｏ ｉ
ｄ ｉ
－ ｎｄｕｃｅｄ ｏｓ
ｔｅｏｐｏｒ
ｏｓｉｓ （ＧＩＯＰ）ｍｉｃ
ｅ．Ｍ ｅ
ｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ ＫＭ （Ｋｕｎｍｉｎｇ）ｍｉ
ｃｅ
ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉ
ｄｅｄｉｎｔｏｎｏ ｒｍａ ｌｃｏｎｔｒｏ （ ）
ｌ Ｎ ｇ ｒ ，
ｏｕｐ ＧＩＯＰ ｍｏｄｅ （
ｌ Ｇｌ ）
ｕ ｇ ｒ ，
ｏｕｐ ＹＳＺＧｄｅ ｃｏｃｔ
ｉｏｎ ＹＳＺＧ）
（
ｇｒｏｕｐ，ｌ
ｏｗｃ ｏｎｃｅｎｔ
ｒａｔ
ｉｏｎ ＹＳＺＧ （
１ｇ／ｋｇ，ＹＳＺＧ－Ｌ）ｇ ｒｏｕｐｏｒｈｉｇｈｃ ｏｎｃ
ｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎ ＹＳＺＧ （
４ｇ／ｋｇ，ＹＳＺＧ－Ｈ）
ｇｒｏｕｐ，ｒｅ
ｓｐｅｃｔ
ｉｖｅｌ
ｙ．Ｔｈｅｍｉ ｃｅｗｅｒｅｉ
ｎｊｅｃｔｅｄＤｅｘａｍｅｔ
ｈａｓｏｎｅｄｉｓ
ｏｄ ｉ
ｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ２．５ｍｇ／ｋｇｉ ｎｔ
ｒａｍｕｓｃｕ
ｌａｒｌ
ｙ
ｔｗｉｃｅａｗｅｅｋｆｏｒｓｉｘ ｗｅｅｋｓｔｏｉ
ｎｄｕｃｅ ＧＩＯＰ ｍｏｄｅｌ
ｓ．Ｓｕｂ ｓ
ｅｑｕ
ｅｎｔｌｙ，ｔｈｅ ｍｉ
ｃｅｉｎ ＹＳＺＧ－Ｈ ａｎｄ ＹＳＺＧ－Ｌｇｒｏｕｐ
ｓ
ｗｅｒｅｇｉｖｅｎ４ｇ ／ｋｇａ ｎｄ１ｇ／ｋｇｏ ｆｔｈｅｄ ｅ
ｃｏｃｔｉ
ｏｎｆ ｏ
ｒ６ｗｅ ｅｋｓ，ｅｘｃｅｔｔ
ｐ ｈｅＮａ ｎｄＹＳＺＧｇ ｒｏｕｐｓ．Ｏｓｔｅｒ
ｉｘｍＲＮＡｏ ｆｋｉｄ－
ｎｅｙ ｗａｓｄｅｔｅ
ｃｔｅｄ ｗ
ｉｔ ｈｑＲＴ －ＰＣＲ （ｑｕａ
ｎｔｉｔ
ａｔｉ
ｖ ｅｒｅ
ａｌｔ
－ ｉｍｅ ｏ
ｐｙｌ ｍｅｒ
ａｓｅｃｈ
ａｉｎｒｅａ
ｃｔｉ
ｏｎ ）．Ｔｈｅｄｉｆ
ｆｅｒｅ
ｎｃｅｏｆｇｕｔｍ ｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏ－
ｔ
ａａ ｎｄｄｏｍｉ ｎａｎｔｂａｎｄｓｗｅｒｅａ ｎａｌｚ
ｙｅｄｂｙｕ ｓｉｎｇＥＲＩＣ－ＰＣＲａ ｎｄＰＣＲ－ＤＧＧＥｔ ｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ．Ｒｅ ｓ
ｕｌｔ
ｓ Ｏｓ ｔｅ
ｒｉｘ ｍＲＮＡ
ｗａｓｎｏ ｔａｂｌ
ｙｈ ｉｇｈｅｒｉｎ Ｇｌｕｇ ｒｏｕｐｒｅｌａｔ
ｉｖｅｔ ｏｎｏｒｍａ ｌｍｉ ｃ
ｅ．Ｂｕ ｔｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔ
ｈ Ｇｌｕｇ ｒｏｕｐ，ＹＳＺＧ ｇ ｒｏｕｐｈａｄ
ｓ
ｉｇｎｉｆ
ｉｃａｎｔ
ｌｙｉｎｃ
ｒｅ ａ
ｓｅｄ Ｏｓｔｅ
ｒｉｘ ｍＲＮＡ．ＥＲＩＣ－ＰＣＲａｎａ ｌ
ｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔ
ｈｅｂａｎｄａｔ７０５ｂｐ ｗａｓｔｈｅｃｈａ
ｒａｃ－
ｔｅ
ｒｉｓ
ｔｉｃｂａｎｄ ｗｈｉｃｈ ｗａｓｄ ｉ
ｆｆｅｒｅｎ
ｔｂｅ
ｔｗｅｅｎ Ｇｌ
ｕａｎｄ ＹＳＺＧ ｇ ｒｏｕｐｓ．ＰＣＲ－ＤＧＧＥ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＡｍｅｒｏｍｏｎａｓ
ｖ
ｅｒｏｎｉｉ ｗａｓｔ
ｈｅｄｏｍｉ ｎａｎ
ｔｏ ｒｇａｎｉ
ｓｍ．Ａｆ
ｔ ｅ
ｒ ＹＳＺＧ ｄｅ
ｃｏｃｔｉ
ｏｎｔ ｒ
ｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｇｕ
ｔ ｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｔ
ａｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ
ｓ ｗｅｒｅ
ｃｈａｎｇｅｄ，Ａｍｅｒ
ｏｍｏｎａｓｖｅｒ
ｏｎｉ
ｉｄｉｓａｐｐｅａｒ
ｅｄ．Ｃｏｎｃｌ
ｕｓｉ
ｏｎ ＹＳＺＧｄｅ ｃｏｃ
ｔｉｏｎｔｒｅ
ａｔｓＧＩＯＰｂｙｄｅ
ｃｒｅ
ａｓｉ
ｎｇＯｓ
ｔｅｒ
ｉｘ
ｍＲＮＡｉ ｎｋｉ
ｄｎｅｙｔ
ｉｓ ｓ，ａｎｄｉ
ｓｕｅ ｎｈ
ｉ ｂ
ｉｔｉ
ｎｇｔ ｈｅｍｕ
ｌｔｉ
ｐｌｉ
ｃａｔ
ｉｏｎｏｆＡｍｅｒ
ｏ ｍｏｎａｓｖｅｒｏｎ
ｉｉ．
Ｋｅ
ｙｗｏ
ｒｄｓ：ＹｉＳｈ
ｅｎＺｈｕａｎｇＧｕ ｄｅ
ｃｏｃ
ｔｉｏｎ；Ｇｌ
ｕｃｏ
ｃｏｒ
ｔｉｃ
ｏｉｄ－ｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄｏ
ｓｔｅ
ｏｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓ；Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ；Ｇｕ
ｔｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｔ
ａ

基金项目：辽宁省自然科学基金面上项目 （ ＬＺ２０１９０５９）；２０１９ 年辽宁省大学生创新创业指导项目 （ ２０１９１０１６１０７３）

ｓ
作者简介：曹雪姣 （
１９８６－），女，硕士，从事生物药物相关研究，Ｅ－ｍａ ｉｌ：３５１７３６３７＠ｑｑ．
ｃｏｍ
通信作者：李新莉，Ｅ－ｍａ
ｉｌ：ｌ
ｉｘｉ
ｎｌｉ
ｂｉｏ＠１６３．
ｃｏｍ
 · ８９２ · 中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ
ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８

糖皮质激素 （ ｇｌ
ｕｃｏｃｏｒ
ｔｉｃ
ｏｉｄ） 是人体重要的调节 ′），
ＡＧＴＡＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＧＴＧＡＧＣＧ－３ Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ－Ｆ （
５′－
分子，临床 用 于 治 疗 类 风 湿 性 关 节 炎 及 自 身 免 疫 疾 ＡＣＡＡＧＧＣＧＧＧＣＡＴＣＣＡ－３′），
Ｏｓｔ
ｅｒｘ－Ｒ （
ｉ ５′－ＧＧＣ－
病［１］。然而，长期大量使用糖皮质激素会导致一系列 ＡＡＡＧＴＣＡＧＡＣＧＧＧＴＡＡＧＴ－３ ′），β－ａ
ｃｔｉｎ－Ｆ （５
′－Ａ－
不良反应，尤其是会对骨质产生破坏作用，引起骨质 ′），
ＣＧＡＡＣＧＡＣＣＡＡＣＣＴＡＡＡＣＴＣＴ－３ β－ａｃ
ｔｉｎ－Ｒ （
５′－Ｔ
疏松 症 （
ｇｌｕ
ｃｏｃ
ｏｒｔ
ｉｃｏ
ｉｄ－ｉ
ｎｄｕ
ｃｅｄｏ
ｓｔｅ
ｏｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓ，ＧＩＯＰ）。 ＴＡＧＡＣＡＡＣＴＡＣＣＴＣＣＣＴＴＴＧＣ－３ ′）（英潍捷基上
超过 ５０％ 的患者在长期接受糖皮质 激 素 的 治 疗 过 程 海贸易有 限 公 司）；去 离 子 甲 酰 胺、 琼 脂 糖、 尿 素、
中会发生骨质疏松 ［
２］
。中医学认为 “肾藏精”“肾主 溴化乙 锭 （ＥＢ） （大 连 羽 铭 生 物 科 技 有 限 公 司 ）；
骨生髓”，肾中精气在保证骨骼正常机能中发挥了主 ＲＮＡ 提取试剂盒、ＤＬ２０００ Ｍａ ｒｋｅｒ （大 连 宝 生 物 工
导作用。糖皮 质 激 素 性 骨 质 疏 松 症， 属 于 “药 邪 ” 程有限公司）。
伤肾，引起肾中 精 气 损 伤， 不 能 维 持 骨 骼 的 正 常 功 ２ 仪器
１． ＨＣ－３０１８Ｒ 高速冷冻离心机 （安 徽 中 科
能，导致骨髓 失 养， 骨 枯 髓 减 而 出 现 骨 质 疏 松。 糖 中佳科 学 有 限 公 司 ），ＪＹ－ｓｐａ
ｔ 琼 脂 糖 水 平 电 泳 仪、
皮质激素使用 时 间 加 长， 肾 虚 髓 亏， 骨 失 所 养 也 随 ＤＧＧＥ 电泳仪 （大连竞迈设备有限 公 司），ＡＢＩ７５００
之加重。采用补肾中 药 治 疗 糖 皮 质 激 素 引 起 的 骨 丢 型定量 ＰＣＲ 仪 （美国应用生物 ＡＢＩ公司），ＰＣＲ 仪
失，“从肾论治” 防治骨质疏松症，符合中医 “辨证 （美国 Ｔｈｅ
ｒｍｏ 公 司），Ｂｏ－ＲＡＤ 化 学 发 光 凝 胶 成 像
ｉ
论治” 的原则。“肠 － 肾” 轴揭示了肠道微生态与肾 系统 （美国 Ｂｉｏ－ＲＡＤ 公司）。
脏相关疾病 互 相 影 响 ［３］。 慢 性 肾 脏 病 患 者 肠 道 菌 群 ３ 动物
１． ＳＰＦ 级 昆 明 （ＫＭ ） 小 鼠 ４０ 只， 雌、
与健康人相 比， 在 数 量 上 存 在 明 显 差 异 ［
。肾脏切
４］
雄各半，体质量 ２６～３０ｇ，由大连医科大学 ＳＰＦ 中
除大鼠肠道菌群的 种 类 和 数 量 与 对 照 组 相 比 差 异 具 心提供，动物 合 格 证 号：ＳＣＸＫ （辽）２００８－０００２，
有统计学意 义， 乳 杆 菌 科 细 菌 显 著 减 少 ［
。终末期
５］
实验动物伦理批号：大医伦审 ２０２０ 第 ００６ 号。
肾病动物和患者 肠 道 菌 群 紊 乱， 特 别 是 肠 杆 菌 和 肠 ４ 方法
１．
球菌比正常人 群 增 加 约 １００ 倍 ［
６］
。肠道菌群通过释 １．
４．１ 益肾壮骨汤的制备 益肾壮骨汤由川断、故
放小分子、免疫调节 和 影 响 钙 磷 的 吸 收 代 谢 从 而 对 子、牛膝、杜仲、三七按 １∶１∶１∶１∶２ 组 成。 上
骨代 谢 进 行 影 响。 肠 道 菌 群 失 调 引 起 免 疫 异 常，炎 述中药粉碎得粉末 ６０ｇ，加水 ３００ｍＬ，１００ ℃ 水浴
症因子增加，促进破骨细胞的分化，骨吸收加重，导 ２ｈ，反复 ２ 次， 过 滤， 滤 液 浓 缩 至 １５０ ｍＬ， 生 药
致骨质疏松症。综上，肾、骨、肠道菌群三者之间存 浓度为 ０．
４ｇ／ｍＬ，４ ℃ 保存备用。
在密切关系。本课题建立糖皮质激素性骨质疏松小鼠 １．
４．２ 分组与处理 小鼠随机分为正常组 （ Ｎ 组）、
模型，ｑＲＴ－ＰＣＲ 法 检 测 小 鼠 肾 组 织 成 骨 细 胞 特 异 基 糖皮质激素性 骨 质 疏 松 模 型 组 （
Ｇｌｕ 组）、益 肾 壮 骨
因 （
Ｏｓｔ
ｅｒｘ）ｍＲＮＡ，ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 和 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 法分
ｉ 汤对照组 （ ＹＳＺＧ 组）以及益肾壮骨汤治疗低剂量组
析肠道菌群结构差异并鉴定优势条带序列，以肾组织 （
１ｇ／ｋｇ，Ｇｌｕ＋ ＹＳＺＧ－Ｌ 组 ）、 高 剂 量 组 （
４ｇ／ｋｇ，
Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ和肠道细 菌 为 靶 点 初 步 探 讨 益 肾 壮 骨 汤 治 疗 ｕ＋ ＹＳＺＧ－Ｈ 组 ）， 每 组 ８ 只。 除 Ｎ 组 和 ＹＳＺＧ
Ｇｌ
糖皮质激素性骨质疏松症的作用机制。 组，其余各组小鼠臀 肌 注 射 地 塞 米 松 磷 酸 钠 注 射 液
（
２． ／ｋｇ）建立糖皮质激素性骨质疏松模型，每周
５ｍｇ
１ 材料与方法
注射２次，连续６周［７］。之后各组小鼠按 ０．
１ｍＬ／１
０ｇ
１ 材料
１． 益 肾 壮 骨 汤 （川 断、 故 子、 牛 膝、 杜 体质量再灌胃相应药物 ６ 周，末次给药 １２ｈ 后 收 集
仲、三七，大连旅顺恒心堂大药房）；地塞米松磷酸 小鼠粪便，颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剥离肾脏，分
钠注射液 （山 西 省 芮 城 科 龙 兽 药 有 限 公 司， 批 号： 别将小鼠粪便和肾脏于 －８０ ℃ 保存备用。
２０１９０２０４，规格：１ ｍｇ／ｍＬ）；ＴａｑＰＣＲｓｕｐｅ ｘ、
ｒｍｉ １．
４．３ ｑＲＴ－ＰＣＲ 检 测 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 表 达
Ｏｎｅ－Ｓ
ｔｅｐ ｇＤＮＡ ｒｅｍｏｖａｌａｎｄ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓｓｕ－ Ｔｒ
ｉｚｌ法 提 取 总 ＲＮＡ 按 照 Ｏｎｅ－Ｓ
ｏ ， ｔｅｐｇＤＮＡ ｒ
ｅ－
ｐｅ
ｒｍｉ 、
ｘ Ｔｉ ｐ Ｇｒ
ｅｅｎ ｑＰＣＲ ｓｕｐｅ
ｒｍｉｘ 试 剂 盒 （大连 ｍｏｖａ
ｌａｎｄｃＤＮＡ ｓｙｎ
ｔｈｅ
ｓｉｓｓｕｐｅ ｘ 和 Ｔｉ
ｒｍｉ ｐ Ｇｒ ｅｅｎ
万泽贸 易 有 限 公 司 ）； 粪 便 细 菌 ＤＮＡ 提 取 试 剂 盒 ｑＰＣＲ ｓｕｐｅ
ｒｍｉ
ｘ 说 明 进 行 逆 转 录 和 Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ
（成都福际生物技术有限公司）；ＧＣ－３４１Ｆ （ ５′－ＣＧＣ－ Ｑｕａｎ
ｔｉｔ
ａｔｖｅ ＰＣＲ 扩 增。 ＰＣＲ 反 应 体 系 １０ μＬ，
ｉ
ＣＣＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＣ－ ＰＣＲ 程序：９５ ℃ １０ ｍｉｎ；９５ ℃ ３０ｓ，６０ ℃ ４０ｓ，
′），５１８Ｒ （
ＧＧＧＧＧＧＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ－３ ５′－ ７２ ℃ ４０ｓ，４０ 个 循 环；７２ ℃ 终 延 伸 ５ ｍｉ
ｎ。 以
′），
ＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ－３ ＥＲＩＣ－Ｆ （５
′－ＡＴＧ－ β－ａ
ｃｔｎ为 内 参， 采 用 ２－ΔΔＣｔ 法 进 行 相 对 基 因 表 达
ｉ
′），
ＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＣＡＣ－３ ＥＲＩＣ－Ｒ （
５′－Ａ－ 分析。
中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ
ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８ · ８９３ ·

１．
４．４ ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 扩 增 按 试 剂 盒 说 明 提 取 每 只 小 处条带强度较强，而 Ｇｌ
ｕ组此处条带强度明显减弱
鼠粪便细菌 ＤＮＡ，参照文献 ［ ８］进行 ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 扩 甚至消失。 与 Ｎ 组 相 比，Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组 给 药 后
增，２％ 琼脂糖凝胶电泳检测扩 增 产 物，以 ２０００ｂｐ 小鼠肠道中优势条带数量基本不变，７０５ｂｐ 处条带
Ｍａ
ｒ ｒ为参照。
ｋｅ 强度较 强， 而 Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组 中 ７０５ｂｐ 处 条 带 消
１．
４．５ ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 电 泳 参照文献 ［
８］ 对 １６Ｓ 失。上述结果表明地塞米松建立骨质疏松模型小鼠，
ｒＲＮＡ Ｖ３ 可 变 区 进 行 ＰＣＲ 扩 增， 扩 增 产 物 使 用 其肠道菌群结构也发 生 改 变，１３００、５９０ 和 ３４７ｂｐ
２５％～５０％ 的变性梯度凝胶，６０ ℃ ７０Ｖ 电 泳 ５ｈ。 左右的条带为小鼠肠道中的共有条带，７０５ｂｐ 左右
切下 ＤＧＧＥ 图 谱 中 的 差 异 条 带， 每 条 条 带 加 入 的条带为骨质疏松 模 型 组 和 益 肾 壮 骨 汤 治 疗 组 小 鼠
２０μＬ无 菌 水 捣 碎，９５ ℃ 浸 泡 １０ ｍｉ
ｎ， 使 用 引 物 肠道中的差异 条 带。ＰＣＡ 分 析 （图 ２Ｂ） 结 果 显 示，
３４１Ｆ 和 ５１８Ｒ 以上清液为模板进行 ＰＣＲ。ＰＣＲ 产物 Ｎ 组、ＹＳＺＧ 组、Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组 和 Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－
测序结果在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行 ＢＬＡＳＴ 对比。 Ｌ 组分布于 同 一 区 域， 距 离 较 近， 与 Ｇｌ
ｕ 组 沿 ＰＣ２
５ 统计学处理
１． 采 用 Ｑｕａｎ
ｔｉｔ
ｙ Ｏｎｅ４．
６．２软件 方向显著分开，这表 明 骨 质 疏 松 小 鼠 肠 道 菌 群 结 构
进行条带分子量和 ＵＰＧＭＡ 相似性聚类分析。实 验 ｕ＋ ＹＳＺＧ－Ｈ 组、
与正常 组 相 比 具 有 显 著 差 异。 Ｇｌ
数据使用 ＳＰＳＳ１０．
０ 软 件， 正 态 分 布 的 连 续 变 量 以 ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组 与 Ｎ 组、ＹＳＺＧ 组 沿 ＰＣ１ 方 向 分
Ｇｌ
均数 ± 标 准 差 （
ｘ ±ｓ） 表 示，２ 组 之 间 比 较 采 用 开，表明地 塞 米 松 对 小 鼠 肠 道 菌 群 结 构 影 响 较 大；
Ｓ
ｔｕｄｅｎ
ｔ′ｓ－ｔ 检 验。 Ｍａ
ｔｌ ０ 软 件 对 ＥＲＩＣ－ＰＣＲ
ａｂ ｖ７． 益肾壮骨汤给药后小鼠肠道菌群结构与正常组相似。
图谱 进 行 ＰＣＡ 分 析。ｑＰＣＲ ｖ２．
４ 软 件 对 ｑＲＴ－ＰＣＲ
结果进行分析。检验水准α＝０．
０５。

２ 结 果

２．
１ 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 的 表 达 水 平
ｑＲＴ－
ＰＣＲ 法检测肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 水平。与 Ｎ 组相
比，骨质疏松模 型 小 鼠 肾 组 织 Ｏｓｔ
ｅｒｘ ｍＲＮＡ 水 平
ｉ
显著升高 ｔ＝１８．
（ ，
４０ Ｐ ＜０． ０１）。 与 Ｇｌ
ｕ 组 相 比，
益肾 壮 骨 汤 给 药 组 小 鼠 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 水 平
显著降低 （ ０１）， 且 高 剂 量 的 作 用
０６，Ｐ＜０．
ｔ＝１１．
优于低剂量。见图 １。 注：Ｎ 组为正常对照组；ＹＳＺＧ 组为益肾壮骨汤对照组；Ｇｌ
ｕ组为糖
２ ＥＩＲＣ－ＰＣＲ 图谱分析 益肾壮骨汤对糖皮质激
２． ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组为 益 肾 壮 骨 汤 高
皮质激素性骨质疏松模型组；Ｇｌ

素性骨质疏松小 鼠 肠 道 菌 群 作 用 的 ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 指 纹 剂量组；Ｇｌ

ｕ＋ ＹＳＺＧ－Ｌ 组 为 益 肾 壮 骨 汤 低 剂 量 组 。ａ 表 示 与
ｕ 组比较，ｂ 表示与 Ｎ 组比较。
Ｇｌ
图谱见 图 ２Ａ。 各 实 验 组 条 带 集 中 在 大 分 子 量 处，
图 １ 益肾壮骨汤对糖皮质激素性骨质疏松
３ 条主 要 条 带 处 于 １３００、５９０ 和 ３４７ｂｐ 附 近， 以
小鼠肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 的表达水平
５
９０ｂｐ左右的条带强度最强。Ｎ 组和 ＹＳＺＧ 组 ７０５ｂｐ

注：Ｎ 组为正常对照组；ＹＳＺＧ 组为益肾壮骨汤对照 组；Ｇｌ

ｕ 组 为 糖 皮 质 激 素 性 骨 质 疏 松 模 型 组；Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组 为
益肾壮骨汤高剂量组；Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组为益肾壮骨汤低剂量组。
图 ２ 益肾壮骨汤对糖皮质激素性骨质疏松小鼠肠道菌群作用的 ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 图谱 （
Ａ） 和 ＰＣＡ 主成分分析结果 （
Ｂ）
 · ８９４ · 中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ
ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８

３ ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 图 谱 分 析
２． 益肾壮骨汤对糖皮质 Ｇ
ｌｕ组中 明 显 减 少。气 单 胞 菌 （
Ａｍｅｒ
ｏｍｏｎａ
ｓｖ ｅ
ｒｏｎｉ，
ｉ
激素性 骨 质 疏 松 小 鼠 肠 道 菌 群 作 用 的 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 条带 ｂ）为 Ｇｌ
ｕ 组的差 异 条 带， 在 Ｇｌ
ｕ 组 中 强 度 大，
图谱见 图 ３Ａ， 优 势 条 带 测 序 结 果 见 表 １。 Ｎ 组 和 而在其他实验组 中 均 不 存 在， 这 表 明 地 塞 米 松 导 致
ＹＳＺＧ 组 泳 道 条 带 较 多， 且 亮 度 较 强， 表 明 这 ２ 组 小鼠骨 质 疏 松， 肠 道 菌 群 种 类 发 生 改 变。 ＵＰＧＭＡ
小鼠肠道菌群的数 量 和 含 量 均 较 高。 而 Ｇｌ
ｕ组条带 分析 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 图谱相似性 （图 ３Ｂ），结果显示各
数量和强度均明 显 减 少， 表 明 地 塞 米 松 导 致 骨 质 疏 组小鼠肠道菌群结构聚成两大簇，骨质疏松模型组聚
松模型小鼠肠道 菌 群 丰 富 度 和 多 样 性 也 降 低。 砂 优 成一簇，其 他 组 聚 成 另 一 簇，两 大 簇 之 间 相 似 性 较
杆菌 （ Ｅｕｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｓａｂｕｒ
ｒｅｕｍ ， 条 带 ａ）、 肠 球 菌 低，仅为０．
４６，表明地塞米松导致骨质疏松，同时也
（
Ｅｎｔ
ｅｒｏ
ｃｏｃｃｕ
ｓ ｐｈｏｅｎｉ
ｃｕｌｉ
ｃｏａ， 条 带 ｃ）、 屎 肠 球 菌
ｌ 对小鼠的肠道菌群造成明显影响。益肾壮骨汤给药组
（
Ｅｎｔ
ｅｒｏ
ｃｏｃｃｕ
ｓｆａ ｅ
ｃｉｕｍ ，条 带 ｄ） 为 Ｎ 组 和 ＹＳＺＧ 组 （
Ｇｌｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组 和 Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组） 与 ＹＳＺＧ 组
中的共有条带，是小鼠肠道中的优势菌群，其中，肠 和 Ｎ 组聚成一簇，相似性为 ０． ６１，表明益肾 壮骨汤
球菌 （条带 ｃ）在 ＹＳＺＧ 组中强度高，含量最大，在 对骨质疏松小鼠肠道菌群失调有一定的恢复作用。

注：Ｎ 组为正常对照组；ＹＳＺＧ 组为益肾壮骨汤对照 组；Ｇｌ

ｕ 组 为 糖 皮 质 激 素 性 骨 质 疏 松 模 型 组；Ｇｌ
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｈ 组 为
ｕ＋ＹＳＺＧ－Ｌ 组为益肾壮骨汤低剂量组。
益肾壮骨汤高剂量组；Ｇｌ
图 ３ 益肾壮骨汤对糖皮质激素性骨质疏松小鼠肠道菌群作用的 ＤＧＧＥ 图谱 （
Ａ） 和 ＵＰＧＭＡ 相似性聚类分析 （
Ｂ）

表 １ ＤＧＧＥ 图谱中优势条带测序与参比序列对照结果

条带编号 相似序列细菌 相似序列细菌编号 相似度 （％ ）

ａ 砂优杆菌 （
Ｅｕｂａｃ
ｔｅｒ
ｉｕｍｓ
ａｂｕｒ
ｒｅｕｍ ） ＮＺ ＧＬ６２２３１２．
１ ９６
ｂ 气单胞菌 （
Ａｍｅ
ｒｏｍｏｎａ
ｓｖｅ
ｒｏｎ
ｉｉ） ＮＺＣＰ０１２５０４．
１ ９３
ｃ 肠球菌 （
Ｅｎｔ
ｅｒｏ
ｃｏｃ
ｃｕｓｐｈｏ
ｅｎｉ
ｃｕｌ
ｉｃｏ
ｌａ） ＮＺ ＡＳＷＥ０１０００００２．
１ ９９
ｄ 屎肠球菌 （
Ｅｎｔ
ｅｒｏ
ｃｏｃ
ｃｕｓｆａｅ
ｃｉｕｍ ） ＮＺ０１７９６０．
１ ９９

３ 讨 论 分泌甲状旁腺 素 数 量 增 加、 速 度 加 快， 通 过 甲 状 旁
腺素受体作用于成骨细胞，从而诱导破骨细胞分化、
中医认为糖 皮 质 激 素 性 骨 质 疏 松 症， 根 本 病 机 增加 破 骨 细 胞 皱 褶 缘 面 积， 促 进 骨 吸 收 增 强。 研
是肾虚髓亏。肾 脏 通 过 肾 小 管 对 钙 进 行 重 吸 收， 调 究 ［９］也表明肾组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 及 蛋 白 表 达 升 高
节血钙浓度，影 响 甲 状 旁 腺 激 素 分 泌， 进 而 调 节 骨 是 ＧＩＯＰ 的发病 机 制 之 一， 补 肾 益 髓 中 药 复 方 通 过
吸收。Ｏｓ ｔｅ
ｒｉｘ 在这一过程中减少过氧化物酶体增殖 下调肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 及 蛋 白 表 达， 有 效 防 治
物激活受体 γ （ ＰＰＡＲγ） 表 达， 下 调 血 清 糖 皮 质 激 ＧＩＯＰ。本研究使用 ｑＲＴ－ＰＣＲ 法 检 测 到 骨 质 疏 松 模
素诱 导 的 蛋 白 激 酶 １ （
ＳＧＫ１）， 抑 制 钙 离 子 通 道 型小鼠肾组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 显 著 升 高， 益 肾 壮 骨
ＴＲＰＶ５） 活 性， 减 少 肾 小 管 对 钙 的 重 吸 收， 导 致
（ 汤给药后 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 显 著 降 低， 且 高 剂 量 的 作
血钙水平降低， 甲 状 旁 腺 主 细 胞 活 动 增 强， 合 成 与 用优于低剂量，推测 益 肾 壮 骨 汤 也 有 可 能 通 过 下 调
中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ
ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８ · ８９５ ·

肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 来治疗 ＧＩＯＰ。 体庞大的微生 态 系 统。 近 年 来， 肠 道 菌 群 结 构 和 骨
ＥＲＩＣ－ＰＣＲ 结果和 ＰＣＡ 分析表明正常组和益肾 代谢之间的关系 成 为 国 内 外 学 者 的 研 究 热 点。 通 过
壮 骨 汤 对 照 组 小 鼠 肠 道 中 菌 群 条 带 较 多， 处 于 调控肠道菌群 来 促 进 骨 骼 健 康、 抑 制 骨 钙 流 失， 为
１３００、５９０ 和３４７ｂｐ 附近。７０５ｂｐ 处条带为骨质疏 骨质疏松的治疗提 供 新 方 向 ［１６］。 本 研 究 利 用 ＥＲＩＣ－
松模型组与其他 实 验 组 的 差 异 条 带， 益 肾 壮 骨 汤 高 ＰＣＲ 和 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 分 析 益 肾 壮 骨 汤 对 骨 质 疏 松 小
剂量给药 后 小 鼠 肠 道 中 此 处 条 带 强 度 增 加。 因 此， 鼠肠道菌群的影 响， 发 现 骨 质 疏 松 模 型 小 鼠 肠 道 菌
推测 ７０５ｂｐ 左右的条带为 Ｇｌ
ｕ 组小鼠肠道中的特征 群组成结构发 生 改 变， 病 原 菌 大 量 增 殖， 益 肾 壮 骨
条带，可作为后续筛选治疗骨质疏松药物的切入点。 汤给药能够抑制 病 原 菌 生 长， 为 治 疗 骨 质 疏 松 导 致
本研 究 使 用 ＰＣＲ－ＤＧＧＥ 法 分 析 益 肾 壮 骨 汤 对 糖 皮 的肠道菌群失调 提 供 实 验 依 据， 可 把 肠 道 菌 群 作 为
质激素性骨质疏 松 小 鼠 肠 道 菌 群 结 构 的 影 响， 表 明 筛选治疗骨质疏松药物的新靶点。
气单胞菌为骨质 疏 松 模 型 小 鼠 肠 道 优 势 菌 型， 益 肾 本课题将 益 肾 壮 骨 汤 （川 断、 故 子、 牛 膝、 杜
壮骨汤灌胃后小 鼠 肠 道 菌 群 结 构 发 生 改 变， 气 单 胞 仲、三七） 应用于糖皮质激素性骨质疏松症的治疗，
菌消失，肠球菌 成 为 优 势 菌 型。 气 单 胞 菌 属 广 泛 分 并以 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 和 气 单 胞 菌 等 肠 道 细 菌
布于自然 界， 可 从 水 源、 土 壤 以 及 粪 便 中 分 离。 文 作为靶点来探讨益肾壮骨汤的作用机制。Ｏｓ ｔ
ｅｒｘ存
ｉ
献报道 ［
，气单胞菌对氨苄西 林、 阿 莫 西 林 具 有 较
１０］
在多 个 上 下 游 基 因， 如 锌 指 蛋 白 基 因 （
ＣＩＺ） 是
高的耐药性，导 致 小 儿 细 菌 性 腹 泻。 气 单 胞 菌 也 可 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 的上游抑制基因，敲除后会使碱性磷酸酶和
引起 皮 肤 或 软 组 织 感 染、 腹 膜 炎、 阑 尾 炎、 肺 炎、 Ｏｓｔｅ
ｒｉｘ 的 表 达 增 加。 Ｏｓ
ｔｅｒｘ 是 Ｒｕｎ
ｉ ｔ相 关 基 因 ２
溶血性尿毒综合征、炎 症 性 肠 病 等 ［
１１］
。 因 此， 地 塞 （Ｒｕｎｘ２） 的下 游 基 因，Ｏｓ ｔ
ｅｒｉｘ缺失的小鼠可表达
米松建立小鼠骨质 疏 松 模 型 的 同 时 严 重 破 坏 肠 道 菌 正常水平 Ｒｕｎｘ２，但在 Ｒｕｎｘ２ 缺 失 小 鼠 中 并 无 Ｏｓ－
群平衡， 气 单 胞 菌 显 著 增 加。 益 肾 壮 骨 汤 由 川 断、 ｔ
ｅｒｘ 的表达，Ｒｕｎｘ２ 与 之 结 合 后 可 上 调 Ｏｓ
ｉ ｔｅｒ
ｉｘ启
故子、牛膝、杜仲、三七组成，不仅具有补肾填髓、 动子活性。因此， 后 续 实 验 将 开 展 对 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 的 上、
活血接骨 之 功 效， 其 中 牛 膝、 杜 仲、 三 七 的 活 性 成 下游因子及信号 通 路 的 相 关 研 究， 同 时 使 用 实 时 定
分对肠道菌群有 较 好 的 调 节 作 用， 如 牛 膝 多 糖 显 著 量 ＰＣＲ 技术确定小鼠肠道优势菌群的含量，通过探
降低断奶仔猪 的 腹 泻 率， 提 高 免 疫 力， 维 持 肠 道 黏 讨成骨、破骨细胞相 关 的 特 异 基 因 与 肠 道 细 菌 的 关
膜屏障的完整性 ［１２］；杜仲提取物显 著 升 高 高 血 压 大 系，进一步阐明益肾 壮 骨 汤 针 对 肠 道 微 生 态 的 作 用
鼠粪便乙酸、丙酸水平， 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 ［１３］； 三 机制。
七提取物通过升高拟杆菌门／厚壁菌门比值，改善肠
参考文献
道菌 群 结 构， 进 而 降 低 血 糖 血 脂， 延 缓 血 管 衰
老 ［１４］。本实验使 用 益 肾 壮 骨 汤 灌 胃 骨 质 疏 松 小 鼠， ［
１］ Ｓｅ
ｉ ｌＭＪ，Ｃｏｏｐｅ
ｂｅ ｒＭＳ，Ｚｈｏｕ Ｈ．Ｇｌ
ｕｃｏ
ｃｏｒ
ｔｉｃ
ｏｉｄ－ｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄｏ
ｓｔｅｏ－

肠道中气单胞菌 明 显 减 少 直 至 消 失， 其 对 肠 道 菌 群 ｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓ：ｍｅ
ｃｈａｎ
ｉｓｍｓ， ｍａｎａｇｅｍｅｎ
ｔ，ａｎｄ ｆ
ｕｔｕｒ
ｅ ｐｅ
ｒｓｐｅ
ｃｔｉ
ｖｅｓ
［
Ｊ］．Ｌａｎｃ
ｅｔＤｉ
ａｂｅ
ｔｅｓＥｎｄｏ
ｃｒｉ
ｎｏｌ，２０１３，１（
１）：５９－７０．
平衡具有很好的调节作用。
［
２］ Ｉ
ｏａｎｎ
ｉｄｓＧ，Ｐａ
ｉ ｌｌａｎＳ，Ｐａｐａ
ｉｏａｎｎｏｕ Ａ，ｅ
ｔａｌ．Ｇｌ
ｕｃｏ
ｃｏｒ
ｔｉｃ
ｏｉｄｓ
Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 通过调控成骨、软骨相关基因的表达而 ｒｅｄ
ｉｃｔ１０－ｙｅ
ａｒｆ
ｒａｇ
ｉｌｉ
ｔ
ｐ ｙｆ
ｒａｃ
ｔｕｒ
ｅｒｉ
ｓｋｉ
ｎａｐｏｐｕ
ｌａｔ
ｉｏｎ－ｂａ
ｓｅｄａｍ－
促进成骨细胞 分 化、 成 熟 和 骨 形 成， 与 其 他 重 要 调 ｂｕ
ｌａｔ
ｏｒｙｃ
ｏｈｏ
ｒ ｆｍｅｎａｎｄｗｏｍｅｎ：Ｃａｎａｄ
ｔｏ ｉａｎｍｕ
ｌｔｉ
ｃｅｎ
ｔｒｅｏ
ｓｔｅ－
控因子共同参与 骨 骼 发 育 的 全 过 程， 对 防 治 骨 质 疏 ｏｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓｓ
ｔｕｄｙ（ ｓ）［
ＣａＭｏ Ｊ］．Ａｒ
ｃｈ Ｏｓ
ｔｅｏｐｏ
ｒｏｓ，２０１４，９（
２）：

松症具 有 重 要 意 义。 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ虽然促进成骨细胞分 １６９－１８３．
［
３］ ｙＴ，Ｔｚｕｋｅ
Ｋｈｏｕｒ ｒｔＫ，Ａｂｅ
ｌｅＲ，ｅ
ｔａｌ．Ｔｈｅｇｕ
ｔ－ｋ
ｉｄｎｅ
ｙａｘ
ｉｓｉ
ｎ
化，但对成 骨 细 胞 的 增 殖 却 是 起 到 负 向 调 控 作 用。
ｃｈｒ
ｏｎｉ
ｃｒｅｎａ
ｌｆａ
ｉｌ ｅ：ａｎｅｗ ｐｏ
ｕｒ ｔｅｎ
ｔｉｌｔ
ａ ａ
ｒｇｅ
ｔｆｏ
ｒｔｈｅ
ｒａｐｙ［
Ｊ］．
敲除小鼠 颅 骨 细 胞 中 的 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 后， 颅 骨 细 胞 的 增
Ｈｅｍｏｄ
ｉａｌＩ
ｎｔ，２０１７，２１（
３）：３２３－３３４．
殖反而更 加 旺 盛， 而 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ在颅骨细胞中过表达 ［
４］ ｕ ＷＬ，Ｖａ
Ｌａ ｚｉｉＮＤ，Ｎｕｎ
ｒ ｅｓ ＡＣＦ，ｅ
ｔａｌ．Ｔｈ
ｅｐｈｏ
ｓｐｈ
ａｔｅｂ
ｉｎｄ
ｅｒ
却能显 著 抑 制 小 鼠 颅 骨 细 胞 的 生 长， 说 明 Ｏｓ ｔ
ｅｒｉｘ ｆ
ｅｒｒ
ｉｃｃ
ｉｔｒ
ａｔｅａ
ｌｔｅ
ｒｓｔ
ｈｅｇｕ
ｔｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｍｅｉ
ｎｒａ
ｔｓｗ
ｉｔｈｃ
ｈｒｏｎ
ｉｃｋ
ｉｄｎ
ｅｙ
抑制 成 骨 细 胞 的 增 殖 ［１５］。 本 研 究 表 明 肾 组 织 Ｏｓ－ ｄ
ｉｓｅ
ａｓｅ［
Ｊ］．ＪＰｈ
ａｒｍａ
ｃｏｌＥｘｐＴｈ
ｅｒ，２０１８，３６７（
３）：４５２－４６０．
［
５］ ｉＡ，ＷａｋｎｏＳ，Ｉ ｅＪ，ｅ
ｔ
ｅｒｘ 表达升高可能是 ＧＩＯＰ 的 发 病 机 制 之 一， 益 肾
ｉ Ｙｏ
ｓｈｉ
ｆｕｊ ｉ ｒｉ ｔａｌ．Ｏｒ
ａｌａｄｓ
ｏｒｂｅｎ
ｔＡＳＴ－１２０
ａｍｅ
ｌｉｏ
ｒａｔ
ｅｓｇｕ
ｔｅｎｖ
ｉｒｏｎｍｅｎ
ｔａｎｄｐ
ｒｏｔ
ｅｃｔ
ｓａｇａ
ｉｎｓ
ｔｔｈｅｐ
ｒｏｇ
ｒｅｓ－
壮骨汤通过 下 调 小 鼠 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ 来 治 疗 ＧＩＯＰ。
ｓ
ｉｏｎｏ
ｆｒｅｎａ
ｌｉｍｐａ
ｉｒｍｅｎ
ｔｉｎ ＣＫＤ ｒ
ａｔｓ［
Ｊ］．Ｃ
ｌｉｎ Ｅｘｐ Ｎｅｐｈｒ
ｏｌ，
以肾组织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 为 靶 点， 为 进 一 步 开 展 益
２０１８，２２（
５）：１０６９－１０７８．
肾壮骨汤相关药理研究提供新思路。 ［
６］ 蒋红利 ．慢性肾脏病的肠道 微 生 态 变 化 ［
Ｊ］．肾 脏 病 与 透 析 肾
肠道菌群与 其 宿 主 相 互 作 用、 相 互 影 响 成 为 人 移植杂志，２０１７，２６（
２）：１５５－１５６．
· ８９６ · 中国微生态学杂志 ２０２１ 年 ８ 月第 ３３ 卷第 ８ 期 Ｃｈ
ｉｎＪ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ，Ａｕｇ２０２１，Ｖｏ
ｌ．３３Ｎｏ．８

Ｊ
ＩＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｌ
ｉ．Ｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉｏｌ
ｏｇｉ
ｃａｌｃｈａｎｇｅ
ｓｉｎｔ
ｈｅｉ
ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌｔ
ｒａｃ
ｔ 态及肠黏膜屏障功能 的 影 响 ［
Ｊ］．中 国 兽 医 学，２０１９，３９（
１）：
ｎ ｃｈｒ
ｉ ｏｎｉ
ｃｋｉ
ｄｎｅｙ ｄ
ｉｓｅ
ａｓｅ［
Ｊ］．Ｊ Ｎｅｐｈｒ
ｏｌ Ｄｉ
ａｌｙ Ｔｒ
ａｎｓｐ
ｌ ｔ，
ａｎ １５０－１５７．
２０１７，２６（
２）：１５５－１５６．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） ＸＩＥ Ｈｏｎｇ－ｂ
ｉｎｇ，ＺＯＵ Ｙｕｎ，ＬＩＵ Ｌ
ｉ ｉ，ｅ
－ｌ ｔａｌ．Ｅｆ
ｆｅｃ
ｔｓｏ
ｆｂｏ
ｔａｎ
ｉｃ
［
７］ Ｈａｎ Ｎ，ＸｕＪＨ，ＸｕＦ，ｅ
ｔａｌ．Ｔｈｅｉ
ｎｖｉ
ｖｏｅ
ｆｆｅ
ｃｔｓｏ
ｆａｆ
ｒａｃ
ｔｉｏｎ ｐｏ
ｌｙｓ
ａｃｃｈａ
ｒｉ ｓｏｎｉ
ｄｅ ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌｍｕｃ
ｏｓａ
ｌｍｏ
ｒｐｈｏ
ｌｏｇｙａｎｄｉ
ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌ
ｆ
ｒｏｍ Ｄｉ
ｏｓｃ
ｏｒｅ
ａｓｐｏｎｇ
ｉｏｓ
ａｏｎｇ
ｌｕｃ
ｏｃｏ
ｒｔｉ
ｃｏｉ
ｄ－ｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄｏ
ｓｔｅｏｐｏ
ｒｏ－ ｂａ
ｒｒｉ
ｅｒｆ
ｕｎｃ
ｔｉｏｎｉ
ｎｗｅ
ａｎｅｄｐ
ｉｇｌ
ｅｔｓ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎＪＶｅ ｉ，２０１９，３９
ｔＳｃ
ｓ
ｉｓ［
Ｊ］．ＪＥｔ
ｈｎｏｐｈａ
ｒｍａ
ｃｏｌ，２０１６，１８５（
６）：５３－５９． （
１）：１５０－１５７．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
［
８］ 吴曼曼，王佳，李娜，等 ．大蒜 素 对 急 性 酒 精 性 肝 损 伤 小 鼠 肠 １３］ 亓英姿，姜月华，姜凌 宇，等 ．杜 仲———刺 蒺 藜 对 老 龄 自 发 性
［
道菌群失调的 预 防 作 用 研 究 ［
Ｊ］．中 国 微 生 态 学 杂 志，２０１８， 高血压大鼠肠道微生物组的影响［
Ｊ］．中华高血压 杂 志，２０１９，
３０（
４）：４０９－４１３． ２７（
５）：４５４－４６２．
ＷＵ Ｍａｎ－ｍａｎ， ＷＡＮＧ Ｊ
ｉａ，ＬＩ Ｎａ，ｅ
ｔａｌ．Ｔｈｅ ｐ
ｒｅｖｅｎ
ｔｉｖｅ ｉ，Ｊ
ＱＩＹｕａｎ－ｚ ＩＡＮＧ Ｙｕｅ－ｈｕａ，Ｊ
ＩＡＮＧ Ｌ
ｉｎｇ－ｙｕ，ｅ
ｔａｌ．Ｅｆ
ｆｅｃ
ｔｓ
ｅ
ｆｆｅ
ｃｔｓｏ
ｆａｌ
ｌｉ
ｃｉｎｏｎｔ
ｈｅｉ
ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌｍｉ
ｃｒｏ
ｆｌｏ
ｒａｉｍｂａ
ｌａｎｃ
ｅｉｎａ
ｃｕｔ
ｅ ｆＥｕｃ
ｏ ｏｍｍｉ
ａｕｌｍｏｄｉ
ｅｓ－Ｔｒ
ｉｂｕ
ｌｕｓ
ｔｅｒ
ｒｅｓ
ｔｒｉ
ｓｏｎｉ
ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉ－
ａ
ｌｃｏｈｏ
ｌ－ｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄ ｈｅｐａ
ｔｉｃｉ
ｎｊｕｒ
ｙ ｍｉ
ｃｅ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎ Ｊ Ｍｉ
ｃｒｏｅ
ｃｏｌ， ｏ
ｔａｉ
ｎａｇｅｄｓｐｏｎ
ｔａｎｅｏｕｓ
ｌｙｈｙｐｅ
ｒｔｅｎｓ
ｉｖｅｒ
ａｔｓ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎＪＨｙｐｅ
ｒ－
２０１８，３０（
４）：４０９－４１３．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） ｔ
ｅｓ，２０１９，２７（
５）：４５４－４６２．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
９］
［ 王剑，郑洪新，刘研，等 ．补肾 益 髓 中 药 复 方 对 糖 皮 质 激 素 性 １４］ 王 佳 丽，修 成 奎，杨 静，等 ．人 参 三 七 川 芎 提 取 物 对 高 糖 高 脂
［
骨质疏 松 症 大 鼠 肾 组 织 Ｏｓ
ｔｅｒ
ｉｘ ｍＲＮＡ 及 蛋 白 表 达 的 影 响 Ｊ］．中国中药 杂 志，２０２０，
诱导血管衰老小鼠肠道菌群的影响［
Ｊ］．光明中医，２０１２，２７（
［ ４）：６７３－６７７． ４５（
１２）：２９３８－２９４６．
ＷＡＮＧＪ
ｉａｎ，ＺＨＥＮＧ Ｈｏｎｇ－ｘ
ｉｎ，ＬＩＵ Ｙａｎ，ｅ
ｔａｌ．Ｅｆ
ｆｅｃ
ｔｏｆｒ
ｅ－ ＷＡＮＧ Ｊ
ｉ ｉ，ＸＩＵ Ｃｈｅｎｇ－ｋｕ
ａ－ｌ ｉ，ＹＡＮＧ Ｊ
ｉｎｇ，ｅ
ｔａｌ．Ｅｆ
ｆｅｃ
ｔｏｆ
ｉ
ｎｆｏ
ｒｃｉ
ｎｇｋ
ｉｄｎｅｙｔ
ｏｒｅｐ
ｌｅｎ
ｉｓｈ ｍａ
ｒｒｏｗ ｈｅ
ｒｂｓｃ
ｏｍｐｏｕｎｄｏｎ ｍＲ－ Ｇｉ
ｎｓｅｎｇＲａｄ
ｉｘｅ
ｔＲｈ
ｉｚｏｍａ，Ｎｏ
ｔｏｇ
ｉｎｓ
ｅｎｇＲａｄ
ｉｘｅ
ｔＲｈ
ｉｚｏｍａａｎｄ
ＮＡａｎｄｐ
ｒｏｔ
ｅｉｎｅｘｐ
ｒｅｓ
ｓｉｏｎｏ
ｆＯｓ
ｔｅｒ
ｉｘｉ
ｎｋｉ
ｄｎｅｙｔ
ｉｓｓｕｅ
ｓｏｆｒ
ａｔｓ Ｃｈｕａｎｘ
ｉｏｎｇＲｈ
ｉｚｏｍａｅｘ
ｔｒａ
ｃｔｓｏｎｉ
ｎｔｅ
ｓｔｉ
ｎａｌｆ
ｌｏｒ
ａｏｆｖａ
ｓｃｕ
ｌａｒａｇ－
ｗｉ
ｔｈｇ
ｌｕｃ
ｏｃｏ
ｒｔｉ
ｃｏｉ
ｄ－ｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄ ｏ
ｓｔｅｏｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓ［
Ｊ］． Ｇｕａｎｇｍｉ
ｎｇ Ｊ ｉ
ｎｇ ｍｉ
ｃｅｉ
ｎｄｕｃ
ｅｄ ｂｙ ｈ
ｉｇｈ ｇ
ｌｕｃ
ｏｓｅａｎｄ ｈ
ｉｇｈｌ
ｉｐｄ［
ｉ Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎａＪ
Ｃｈ
ｉｎ Ｍｅｄ，２０１２，２７（
４）：６７３－６７７．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） Ｃｈ
ｉｎ Ｍａ
ｔｅｒ Ｍｅｄ，２０２０，４５（
１２）：２９３８－２９４６．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
１０］ 劳远司，梁盛，滕高彬 ．儿童细菌性腹泻的病原 微 生 物 检 验 结
［ １５］ 吴添龙，程细高 ．成骨细 胞 特 异 性 转 录 因 子 Ｏｓ
［ ｔｅｒ
ｉｘ对骨形成
果分析［
Ｊ］．中国实用医药，２０２０，１５（
１１）：１９７－１９８． 作用 的 研 究 进 展 ［
Ｊ］． 中 国 骨 质 疏 松 杂 志，２０１４，２０（
５）：
ｉ，ＬＩＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ，ＴＥＮＧ Ｇａｏ－ｂ
ＬＡＯ Ｙｕａｎ－ｓ ｉｎ．Ａｎａ
ｌｙｓ
ｉｓｏ
ｆ ５５７－５６１．
ｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉａｌｔ
ｅｓｔｒ
ｅｓｕ
ｌｔｓｏ
ｆｂａ
ｃｔｅ
ｒｉａ
ｌｄｉ
ａｒｒｈｅ
ａｉｎｃｈ
ｉｌｄ
ｒｅｎ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎａ ＷＵ Ｔｉ ｏｎｇ，ＣＨＥＮＧ Ｘｉ－ｇａｏ．Ｒｅ
ａｎ－ｌ ｓｅａ
ｒｃｈ ｐ
ｒｏｇ
ｒｅｓｏ
ｓ ｆｔ
ｈｅ
Ｐｒ
ａｃｔ Ｍｅｄ，２０２０，１５（
１１）：１９７－１９８．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） ｅ
ｆｆｅ
ｃｔｏ
ｆｏｓ
ｔｅｏｂ
ｌａｓ
ｔｓｐｅ
ｃｉｆ
ｉｃｔ
ｒａｎｓ
ｃｒｉ
ｐｔｉ
ｏｎｆ
ａｃｔ
ｏｒＯｓ
ｔｅｒ
ｉｘｉ
ｎｂｏｎｅ
１１］ 张晓艳，陈雨 ．粪便气单胞菌培养在小儿炎症性肠病严重程度
［ ｆ
ｏｒｍａ
ｔｉｏｎ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎＪＯｓ
ｔｅｏｐｏ
ｒｏｓ，２０１４，２０（
５）：５５７－５６１．（
ｉｎ
和临床结局中 的 价 值 ［
Ｊ］．中 国 中 西 医 结 合 消 化 杂 志，２０２０， Ｃｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
２８（
１）：４７－５１． １６］ 董 万 涛，黄 凯，宋 敏，等 ．肠 道 微 生 态 失 衡 为 骨 质 疏 松 症 发 病
［
ａｏ－ｙａｎ，ＣＨＥＮ Ｙｕ．Ｔｈｅ ｃ
ＺＨＡＮＧ Ｘｉ ｌｉｎ
ｉｃａ
ｌｖａ
ｌｕｅ ｏ
ｆ Ａｅ
ｒｏ－ Ｊ］．中国骨质疏松杂志，２０１８，２４（
的易感因素［ ３）：３９４－３９８．
ｍｏｎａ
ｓｃｕ
ｌｔｕｒ
ｅｉｎｔ
ｈｅｓ
ｅｖｅ
ｒｉｔ
ｙ ａｎｄ ｏｕ
ｔｃｏｍｅｏ
ｆｉｎ
ｆｌａｍｍａ
ｔｏｒ
ｙ ＤＯＮＧ Ｗａ
ｎ－ｔ
ａｏ，ＨＵＡＮＧ Ｋａ
ｉ，ＳＯＮＧ Ｍｉ
ｎ，ｅ
ｔａｌ．Ｔｈ
ｅｉｍｂ
ａｌａ
ｎｃｅ
ｂｏｗｅ
ｌｄｉ
ｓｅａ
ｓｅｉ
ｎｃｈ
ｉｌｄ
ｒｅｎ［
Ｊ］．Ｃｈ
ｉｎＪＩ
ｎｔｅｇ
ｒ Ｔｒ
ａｄ Ｗｅ
ｓｔ Ｍｅｄ ｆｇｕ
ｏ ｔｍｉ
ｃｒｏ
ｅｃｏ
ｌｏｇｙｍａ
ｙｂｅａｓ
ｕｓｃ
ｅｐｔ
ｉｂｌ
ｅｆａ
ｃｔｏ
ｒｏｆｏ
ｓｔｅ
ｏｐｏ
ｒｏｓ
ｉｓ［
Ｊ］．
ｇ，２０２０，２８（
Ｄｉ １）：４７－５１．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） Ｃｈ
ｉｎＪＯｓ
ｔｅｏｐｏ
ｒｏｓ，２０１８，２４（
３）：３９４－３９８．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
１２］ 谢 红 兵，邹 云，刘 丽 莉，等 ．植 物 多 糖 对 断 奶 仔 猪 小 肠 黏 膜 形
［ 收稿日期：２０２０－１１－２０ 修回日期：２０２０－１２－２８ 本文编辑：李兵

櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙
（上接第 ８９０ 页） Ｃｏ
ｒｄｅｍｏ
ｙａｉ
ｎｔｅ
ｇｒｉ
ｆｏｌ
ｉａ［
Ｊ］．Ｆｕｎｇ
ａｌＤ
ｉｖｅ
ｒｓｉ
ｔｙ，２００２，１１：１６９－１７５．
１１］ 王贵生，陆娟，唐娟，等 ．１ 株 毫 菊 内 生 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 生
［ １６］ 崔宇，郑春英，刘松梅，等 ．药用植物内生菌研究概况［
［ Ｊ］．黑
物活性分析［
Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学 版），２０１９， 龙江医药，２００７，２０（
１）：４１－４４．
４７（
４）：１３８－１５４． １７］ 董 建 伟，蔡 乐，李 雪 娇，等 ．中 药 材 的 微 生 物 发 酵 改 性 研 究 进
［
１２］ 余波，赵力，曹建波，等 ．植 物 内 生 菌 活 性 物 质 研 究 进 展 ［
［ Ｊ］． 展［
Ｊ］． 云 南 大 学 学 报 （自 然 科 学 版 ），２０１８，４０ （
６）：
安徽农学通报，２００８，１４（
３）：３１－３２． １２０７－１２１２．
１３］ 曾 松 荣，徐 倩 雯，叶 保 童，等 ．虎 杖 内 生 真 菌 的 分 离 及 产 抗 菌
［ ＤＯＮＧＪ
ｉａ ｉ，ＣＡＩＬｅ，Ｌ
ｎ－ｗｅ ＩＸｕ
ｅ－ｊ
ｉａｏ，ｅ
ｔａｌ．Ｐｒ
ｏｇｒ
ｅｓｓｉ
ｎｆｅ
ｒｍｅ
ｎ－
活性物质的筛选［
Ｊ］．菌物研究，２００５，３（
２）：２４－２６． ｔ
ｅｄｔ
ｒａｄ
ｉｔ
ｉｏｎ
ａｌＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅｍｅ
ｄｉｃ
ｉｎｅ
ｓｗｉ
ｔｈｍｉ
ｃｒｏ
ｏｒａ
ｇｎｓｍ［
ｉ Ｊ］．ＪＹｕｎｎ
ａｎ
１４］ 张鑫，张凤英，陈 卫 平 ．无 花 果 内 生 菌 ＷＨＧ１ 及 其 胞 外 蛋 白
［ Ｕｎ
ｉｖ（
Ｎａｔ
ｌＳｉ），２０１８，４０（
ｃ ６）：１２０７－１２１２．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
的分离鉴定和抗菌作 用 的 研 究 ［
Ｊ］．中 国 食 品 学 报，２０１２，１２ １８］ 王耀新，陈丽娜，韩国庆，等 ．中药发酵技术研究概况［
［ Ｊ］．中
（
６）：１０２－１０８． 医药信息，２０１８，３５（
６）：１２０－１２４．
ｎ，ＺＨＡＮＧ Ｆｅｎｇ－ｙ
ＺＨＡＮＧ Ｘｉ ｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｗｅ
ｉ－ｐ
ｉｎｇ．Ｉ
ｄｅｎ
ｔｉｆ
ｉ－ ＷＡＮＧ Ｙａｏ－ｘ
ｉｎ，ＣＨＥＮ Ｌ
ｉ－ｎａ，ＨＡＮ Ｇｕｏ－ｑ
ｉｎｇ，ｅ
ｔａｌ．Ｒｅｖ
ｉｅｗ
ｃ
ａｔｉ
ｏｎｏ
ｆｅｎｄｏｐｈｙ
ｔｉｃｂａ
ｃｔｅ
ｒｉ ｎＦｉ
ｕｍ ＷＨＧ１ｉ ｃｕｓｃａｒ
ｉｃａ
ｌａｎｄｉ
ｓｏ－ ｏ
ｆＴＣＭ ｆ
ｅｒｍｅｎ
ｔａｔ
ｉｏｎｔ
ｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ［
Ｊ］．Ｉ
ｎｆｒｍ ＴＣＭ，２０１８，３５
ｏ
ｌ
ａｔｉ
ｏｎｏ
ｆｉｔ
ｓａｎ
ｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ
ｉａｌｐ
ｒｏｔ
ｅｉｎ［
Ｊ］．Ｊ Ｃｈ
ｉｎＩ
ｎｓｔ Ｆｏｏｄ Ｓｃ
ｉ （
６）：１２０－１２４．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ）
Ｔｅ ｌ，２０１２，１２（
ｃｈｎｏ ６）：１０２－１０８．（
ｉｎＣｈ
ｉｎｅ
ｓｅ） 收稿日期：２０２０－０５－３１ 修回日期：２０２０－０８－２９ 本文编辑：李兵
［
１５］ Ｔ
ｏｏｆ
ａｎｅ ＳＢ，Ｄｕ
ｅ ｌｙｍａｍｏ
ｄｅＲ．Ｆｕｎｇ
ａｌｅ
ｎｄｏｐｈｙ
ｔｅｓａ
ｓｓｏ
ｃｉａ
ｔｅｄｗ
ｉｔｈ