You are on page 1of 67

‫علم المناعة العملي ‪Practical Immunology‬‬

‫اسماء تدريسي علم المناعة العملي‬ ‫اسماء المشرفين‬


‫‪ .‬انعا عبد القادر حسن‬ ‫أ‪.‬د‪ .‬انوار ادريس س ي ا‬
‫‪ . .‬امنه عبد الجبار اب اهيم‬ ‫أ‪. .‬د‪ .‬حا مة موس خ يل‬
‫أ‪. .‬د‪ .‬سح سعد غ يب‬
‫‪.‬د‪ .‬حنا ياسين محسن‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 1‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫خايا الجها المناعي )‪(Cells of the immune system‬‬

‫(م طط يوضح خايا الج ا ال ناعي)‬

‫ال ية الج عية ال كونة‬ ‫ماحظة‪ :‬ج يع خايا الج ا ال ناعي تنشأ من خ ية احد في ن اع العظم تس‬
‫ل د )‪.(Heamatopoietic stem cell‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 1‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫خايا الجها المناعي‬


‫‪ -1‬الخايا البيضاء غير المحببة ])‪ [A granulocytes (mononuclear leukocytes‬وتشمل‪:‬‬

‫أ‪ -‬ال ايا ال فية ‪Lymphocytes‬‬

‫نوات ا دائ ية مف د غامقة الصبغة تحتل معظم حجم ال ية‪.‬‬ ‫‪)1‬‬


‫شائعة الوجود في الج ا ال في‪.‬‬ ‫‪)2‬‬
‫نسبت ا باإنسا الطبيعي ‪.%30-20‬‬ ‫‪)3‬‬
‫توجد ثاثة انواع من ال ايا ال فية هي‪:‬‬ ‫‪)4‬‬

‫‪ -1‬ال ايا ال فية التائية )‪ (T-lymphocytes‬تقسم ال ‪-:‬‬

‫ية التائية ال ساعد )‪.(T- helper CD4‬‬ ‫ال‬ ‫‪‬‬


‫ية التائية الس ية )‪.(T-cytotoxic CD8‬‬ ‫ال‬ ‫‪‬‬
‫ية التائية ال نظ ة )‪.(T- regulatory‬‬ ‫ال‬ ‫‪‬‬
‫)‪(DTH‬‬ ‫ية التائية التي تشت في تفاعا ف الحساسية ال تأخ‬ ‫ال‬ ‫‪‬‬

‫‪ -2‬ال ايا ال فية البائية )‪.(B- lymphocytes‬‬

‫‪ -3‬ال ايا القات ة الطبيعية )‪.(Natural killer cells NK‬‬

‫‪ -‬ال ايا الوحيد النوا ‪.Monocytes‬‬

‫من‬ ‫ك ية كبي‬ ‫ع‬


‫‪ )1‬كبي الحجم‪ ،‬نوات ا ك وية الشكل تحتو‬
‫السيتوبا ‪.‬‬
‫‪ )2‬نسبت ا ‪.%6-1‬‬
‫‪ )3‬ت بع يا ت ايز عند خ ج ا من مج الد ال اانسجة‪ ،‬تكسب ا ه الع يا القدر ع‬
‫االت ا فتدع حين ا بال ايا الب ع ية ‪.Macrophages‬‬

‫‪ -2‬الخايا البيضاء المحببة [ ‪granulocytes (polymorphonuclear‬‬


‫‪ ])leukocytes‬وتشمل‪:‬‬

‫‪Neutrophils‬‬ ‫أ‪ -‬العدا‬

‫‪ )1‬تعتب ال ط الدفاعي اا ل ج ا ال ناعي‪.‬‬


‫‪ )2‬س يعة ااستجابة تصل ال موقع االت ا خا ساعة‪.‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 1‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ )3‬ل ا القدر ع االت ا ‪.‬‬


‫‪ )4‬ل ا سيتوبا محبب‪ ،‬توجد ب كز نوا مفصصه ‪.multi-lobed nucleus‬‬
‫‪ )5‬اك خايا الد البيض شيوعا تصل نسبت ا ال ‪.% 70-50‬‬

‫‪Eosinophils‬‬ ‫ا‬ ‫‪ -‬الح‬

‫بالصبغة‬ ‫السيتوبا‬ ‫حبيبا‬ ‫تو‬‫اكتسبت اس ا بسبب شد‬ ‫‪)1‬‬


‫الحام ية‪.‬‬
‫نوات ا ا فصين ‪ bi-lobed nuleus‬متص ة ب يط نحيف‪.‬‬ ‫‪)2‬‬
‫يحتو السيتوبا ع حبيبا مد ر خشنة ا حجم احد‪.‬‬ ‫‪)3‬‬
‫نسبت ا ‪.%3-2‬‬ ‫‪)4‬‬
‫يفت ا هي الق اء ع الطفي يا ‪ ،‬حيث ت اجم ي قا الديدا التي‬ ‫‪)5‬‬
‫تغز الجسم‪.‬‬
‫تزداد نسبت ا في حالة تفاعا الحساسية ‪.allergic reactions‬‬ ‫‪)6‬‬

‫‪ -‬القعدا ‪Basophils‬‬

‫تت يز حبيبا سيتوبا م ا بت ون ا الغامق بالصبغة القاعدية‪.‬‬ ‫‪)1‬‬


‫يفت ا ال ساه ة في احدا الع ية االت ابية باانسجة‪ ،‬حيث ان ا‬ ‫‪)2‬‬
‫ت عب د ر رئيسي في تفاعا الحساسية‪ ،‬خاصة من النوع اا من‬
‫ف الحساسية ‪.Type Ӏ hypersensitivity reactions‬‬
‫ا ت بس ولة‪.‬‬ ‫نوات ا ثنائية ا ثاثية الفصو‬ ‫‪)3‬‬
‫حبيبا السيتوبا خشنة كبي ‪.‬‬ ‫‪)4‬‬
‫نسبت ا ‪.%1-0.5‬‬ ‫‪)5‬‬

‫ماحظة‪ :‬هنا خايا اخ في الج ا ال ناعي ل ا اه ية كبي في ع ية تنظيم ااستجابة ال ناعية‬


‫تقديم ال ست د ‪ Antigen presentation‬هي الباعم ‪ Macrophages‬ال ايا الشجي ية‬
‫‪.Dendritic cells‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 1‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫تحضير المسحة الدموية )‪(Preparation of the blood smear‬‬

‫‪ -1‬أه ية ال سحة الدموية‬

‫‪ .1‬حسا العدد التف يقي )‪ (differential count‬ل ايا الد البيض ‪.WBC‬‬
‫‪ .2‬دراسة ال كونا ال وية ل د من حيث الشكل ‪ morphology‬الت كيب ‪.structure‬‬
‫‪ .3‬تش يص ااصابة ببعض اام اض م ل ‪ ،anemia ،leukemia‬غي ها من اام اض‪.‬‬

‫‪ -2‬ال واد الا مة لتح ي ال سحة الدموية‬

‫ال شار ال عق ة ‪.sterilized lancets‬‬ ‫‪.1‬‬


‫عدد من الش ائح الزجاجية ال ج ية النظيفة ‪.clean glass microscopic slides‬‬ ‫‪.2‬‬
‫الكحو ااثي ي ‪ %75‬ل تعقيم ‪.ethyl alcohol‬‬ ‫‪.3‬‬
‫قطن بي‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫ماء مقط ‪ dislled water‬يست د ك ح و منظم ‪( buffer‬يست د لت فيف الصبغة ي نع‬ ‫‪.5‬‬
‫التغي في اا ال يدر جيني ‪.pH‬‬
‫م ل ‪ giemsa stain‬ا‬ ‫صبغة لش ا ‪( leishman's stain‬قد تست د صبغا اخ‬ ‫‪.6‬‬
‫‪ wright’s stain‬غي ها‪.‬‬
‫مج ضوئي ‪.light microscope‬‬ ‫‪.7‬‬
‫يت السيدار ‪.cedar oil‬‬ ‫‪.8‬‬

‫‪ -3‬تح ي مسحة الد‬

‫بعد مناسب‬ ‫ع‬ ‫الش يحة الزجاجية ال ج ية (توضع القط‬ ‫من الد ع‬ ‫توضع قط صغي‬ ‫‪.1‬‬
‫عن حافة الش يحة)‪.‬‬
‫تنش قط الد ع الش يحة الزجاجية بواسطة الش يحة الناش ‪( spreader slide‬توضع‬ ‫‪.2‬‬
‫الش يحة الناش بزا ية ‪ °35-30‬اما قط الد )‪.‬‬
‫يجب ا تتامس حافة الش يحة الناش مع قط الد ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تسحب الش يحة الناش ل ار بحيث تت مكان ا مسحة رقيقة من الد ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫تت ال سحة لتجف ثم تصبغ بصبغة لش ا ‪.‬‬ ‫‪.5‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 1‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫(صور توضح خطوا تح ي مسحة الد )‬

‫‪ -4‬تصبيغ مسحة الد‬

‫تغط ال سحة بصبغة لش ا (مع حسا عدد قط ا الصبغة ال افة)‪.‬‬ ‫‪.1‬‬


‫افة) يت‬ ‫بعد ‪ 2‬دقيقية ي اف ال اء ال قط (عدد القط ا مسا لعدد قط ا الصبغة ال‬ ‫‪.2‬‬
‫ل د ‪ 7-5‬دقيقة مع التح يك ل ز ال اء ال قط مع الصبغة‪.‬‬
‫تغسل ال سحة ب اء الحنفية ‪.tap water‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تت الش يحة لتجف ثم تفحص تحت ال ج ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬

‫حاا الزياد والنقصا في العدد الكلي والتفريقي لخايا الد البيض‬

‫‪ ‬يب غ العدد الك ي ‪ total count‬ل ايا الد البيض ‪ 11000-4000‬خ ية في ال ايك ليت الواحد‬
‫من الد ‪ ،‬في حالة نقصا العدد عن الحد الطبيعي تس الحالة ‪ ،leukopenia‬اما في حالة‬
‫ياد العدد فتس الحالة ‪.leukocytosis‬‬
‫‪ ‬اما عند تأث العدد التف يقي ل ايا الد البي اء (النسبة ال وية لكل نوع من انواع ال ايا)‬
‫فتس الحاا ك ا ي ي‪-:‬‬
‫أ‪ -‬ان فاض عدد ال فيا (‪.)lymphopenia‬‬
‫‪ -‬ان فاض عدد العدا (‪.)neutropenia‬‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 1 Practical Immunology 2020-2019

.)lymphocytic leukocytosis ‫ ا‬lymphocytosis( ‫عدد ال فيا‬ ‫ياد‬ -


.)neutrophilic leukocytosis ‫ ا‬neutrophilia( ‫عدد العدا‬ ‫ياد‬ -
.)monocytic leukocutosis ‫ ا‬monocytosis( ‫عدد ال ايا الوحيد‬ ‫ياد‬ -
.)eosinophilic leukocytosis ‫ ا‬eosinophilia( ‫عدد الح ا‬ ‫ياد‬ -
.)basophilic leukocytosis ‫ ا‬basophilia( ‫عدد القعدا‬ ‫ياد‬ -


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫اعضاء وانسجة الجها المناعي )‪(Organs and Tissues of the Immune System‬‬

‫يع ل الج ا ال ناعي في ج يع انحاء الجسم‪ ،‬ع ال غم من لك هنا ت اكيب خاصة في مواقع معينة‬
‫من الجسم يتم في ا تنظيم خايا الج ا ال ناعي‪ .‬تصنف ه ااع اء اانسجة ال ااع اء اانسجة‬
‫ال فا ية ال كزية ‪ Central or Primary Lymphoid Organs and Tissues‬التي تش ل‬
‫ن اع العظم ‪ Bone Marrow‬غد التوثة ‪ Thymus‬ااع اء اانسجة ال فا ية الط فية‬
‫‪ Peripheral or Secondary Lymphoid Organs and Tissues‬التي تش ل العقد ال فا ية‬
‫‪ Lymph Nodes‬الطحا ‪ Spleen‬واانسجة ال فا ية ال تبطة بالغشاء ال ا ي ‪Mucosa‬‬
‫‪.Associated Lymphatic Tissues‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫اع اء الج ا ال ناعي‬

‫أ‪ -‬ااعضاء واانسجة اللمفاوية المركزية ‪Central or primary lymphoid organs and‬‬
‫‪tissues‬‬

‫‪ -1‬ن اع العظم ‪Bone Marrow‬‬

‫‪Hematopoietic stem‬‬ ‫‪ ‬تشتق ج يع خايا الج ا ال ناعي من ن اع العظم من خ ية تس‬


‫‪ cell‬بع ية توليد الد ‪.Hematopoiesis‬‬
‫‪ ‬ينتج ن اع العظم ال ايا ال فا ية البائية الناضجة ‪ Mature B-Cells‬ال ايا التائية غي‬
‫الناضجة ‪ Prothymocytes‬التي تن ج في ا بعد في غد التوثة ‪.Thymus‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -2‬غد التوثة ‪Thymus‬‬

‫في ال نصف اامامي‪ ،‬اما الق ب ‪Superior mediastinum,‬‬ ‫‪ ‬تقع في التجويف الصدر‬
‫‪.anterior to heart‬‬
‫فية غد التوثة هي ان ا ال ايا التائية غي الناضجة ‪ Prothymocytes‬التي ت اج من‬ ‫‪‬‬
‫ن اع العظم ال غد التوثة حيث تن ج تتع م ه ال ايا قبل انطاق ا في الد ر الدموية‬
‫تس ‪.Mature T-Cells‬‬
‫‪ ‬تت كب التوثة نسجيا من بقتين‪-:‬‬
‫‪ )1‬القش ‪ Cortex‬تظ تحت ال ج غامقة ال و (لك عدد ال ايا ال فا ية)‪.‬‬
‫‪ )2‬ال ب ‪ Medulla‬تظ تحت ال ج فاتحة ال و (لق ة عدد ال ايا ال فا ية)‪.‬‬
‫‪ )3‬يت ل نسيج التوثة منا ق يط ق ع ي ا جسي ا هاسل ‪.Hassall's corpuscles‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -‬ااعضاء واانسجة اللمفاوية المحيطية ‪Peripheral or Secondary Lymphoid Organs‬‬


‫‪and Tissues‬‬

‫‪ -1‬العقد ال فا ية ‪Lymph nodes‬‬

‫ت اكيب تشبه حبة الفاصوليا‪.‬‬ ‫‪‬‬


‫ية تتج ع في مواقع خاصة م ل ال قبة‪ ،‬اابطين‪،‬‬ ‫اا عية ال فا‬ ‫و مج‬ ‫تتواجد ع‬ ‫‪‬‬
‫ال اص تين غي ها‪.‬‬
‫تع ل ب ابة م شحا ل جسي ا الغ يبة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ة في ع ية الب ع ة‬ ‫غي ها من ال ايا ال ناعية ال‬ ‫ت ل مواقع م ة ل ايا التائية البائية‬ ‫‪‬‬
‫تقديم ال ست د‪.‬‬
‫تت كب العقد ال فا ية نسجيا من‪-:‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ Trabeculae‬باتجا ال كز مكونة شبكة‪.‬‬ ‫‪ .1‬محفظة ليفية ت تد من ا الحويجزا‬
‫القش ‪ ،Cortex‬جار القش ‪ ،Paracortex‬ال ب‬ ‫‪ .2‬الحشو ‪ Parenchyma‬تش ل‬
‫‪.Medulla‬‬

‫أ‪ -‬القش ‪ : Cortex‬تقسم ال‬


‫‪ ‬قش خارجية ‪ : Outer cortex‬ت م ال ايا ال فا ية البائية ‪ B-lymphocytes‬داخل‬
‫الج يبا ال فا ية ‪ ،lymphoid follicles‬تكو الج يبا ال فا ية اما ا لية ‪ primary‬ا‬
‫ثانوية ‪ Secondary‬تحتو ع م اكز انتاشيه ‪ Germinal center‬التي هي منا ق تت ايز‬
‫في ا ال اايا ال فا ية البائية ال خايا با مية مكونة ااضداد‪.‬‬
‫‪ ‬القش الع يقة ‪ :Deep cortex‬ت م ال ايا التائية‪.‬‬

‫غي ها من ال ايا ال ساعد‬ ‫‪ :Paracortex‬ت م ال ايا التائية‬ ‫‪ -‬منطقة جار القش‬


‫‪.Accessory cells‬‬

‫‪ -‬منطقة ال ب ‪ :Medulla‬ت م حبا لبية ‪ ،Medullary cord‬جيو دموية ‪ ،Sinuses‬ا عيه‬


‫دموية كبي ‪ ،Large blood vessels‬يعتب ال ب منطقة مشت كة ا يحتو ع ل فا يا‬
‫بائية تائية باعم كبي ‪.‬‬

‫ماحظة ‪ :‬يدخل ال ف ال العقد ال فا ية عن يق اا عية ال فا ية الوارد ‪Afferent vessels‬‬


‫يت شح عن يق الجيو الدموية ‪ Sinuses‬يغادر العقد ال فية عن يق اا عية ال فا ية الصادر‬
‫‪.Efferent vessels‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫(شكل يوضح الت كيب النسيجي ل عقد ال فا ية)‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -2‬الطحا ‪Spleen‬‬

‫يفته هي ا الة ك يا الد التالفة من الد ر الدموية اضافة ال تصنيع الك يا الدموية‬ ‫‪‬‬
‫ت زين ا‪ ،‬ك ا يقو بتكوين الك يا الح اء في الجنين‪.‬‬
‫يت كب الطحا نسجيا من‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫ال ب اابيض ‪White pulp‬‬ ‫‪.1‬‬
‫تحد فيه ااستجابة ال ناعية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ي كن ت ييز من موقع الش ين ال كز ‪.Central arteriol‬‬ ‫‪‬‬
‫يحو كا النوعين من ال ايا ال فا ية التائية البائية‪ ،‬حيث تقع ال ايا ال فا ية التائية ‪T-‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ lymphocytes‬في ال نطقة ال حيطة بالش ين ال كز ال س ا ‪Periarterial lymphoid‬‬
‫‪ ،sheath‬اما ال ايا ال فا ية البائية فتقع داخل الحويصا ال فا ية ‪. Lymphoid follicles‬‬

‫الجيو الدموية الحبا الطحالية ‪Splenic‬‬ ‫‪ .2‬ال ب ااح ‪ : Red pulp‬يحو ع الد‬
‫‪ cords‬ك يا الد الح اء بعد التحطم خايا د بي اء نسيج ضا ‪.‬‬

‫‪ .3‬ال نطقة الحد دية (الحامية) ‪Marginal zone‬‬


‫‪ ‬منطقة تفصل ما بين ال ب اابيض ال ب ااح ‪ ،‬البعض يعتب ها جزءا من ال ب ااح‬
‫تقع حافات ا في ال ب اابيض‪ ،‬البعض ااخ يعتب ها منطقة مستق ة ليس ل ا عاقة‬
‫بال نا ق السابقة‪.‬‬
‫‪ ‬الو يفة ااساسية ل ال نطقة هي احتجا ال ست دا الحبيبية ‪Particulate antigens‬‬
‫ال وجود في الد تقدي ا ل ايا ال فا ية في الطحا ‪.‬‬

‫صور توضح ال نا ق ال ئيسية في الطحا‬

‫‪ヶ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫صور توضح مقطع في الطحا تحت ال ج‬

‫‪Α‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 2‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -3‬النسيج ال في ال تبط بال ا ية )‪Mucosa-associated lymphatic tissues (MALTs‬‬

‫‪ ‬يوجد ه ا النسيج في كل من اامعاء ‪ ،Gut‬الب عو ‪ ،Pharynx‬القصبا ‪ ،Bronchi‬الزائد‬


‫الد دية ‪ ، Appendix‬ال و ا ‪.Tonsils‬‬
‫‪ ‬ت ل لطخ باي ‪ Peyer's patches‬م ا ع النسيج ال في ال تبط بالطبقة ال ا ية‪.‬‬

‫لطخ باي ‪.Peyer's patches‬‬

‫‪ ‬تقع ال ايا ال فا ية البائية ‪ B-lymphocytes‬داخل الحويصا ال فا ية ‪Lymphoid‬‬


‫‪ ،follicles‬اما ال ايا ال فا ية التائية ‪ T-lymphocytes‬فتقع بين الحويصا ال فا ية‪.‬‬
‫‪ ‬يوجد في ه ا النسيج خايا م ة تدع ‪ M-cells‬ا ‪ Microfold cells‬ل ا اه ية في التقا‬
‫ال ست د تقدي ه ل ايا التائية البائية‪.‬‬

‫لط ا باي ‪Peyer's patches‬‬

‫‪Β‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫طرائق اعطاء المستضدا وسحب الد في الحيوانا المختبرية‬


‫‪Routs of antigen administration and bleeding of laboratory animals‬‬

‫تعت د ااستجابة ال ناعية في الحيوانا ال نعة ع ‪-:‬‬

‫ج عة ال ست د ‪Dosage‬‬ ‫‪.1‬‬
‫يقة اعطاء ال ست د ‪Rout of administration‬‬ ‫‪.2‬‬
‫‪Type of animal‬‬ ‫نوع الحيوا‬ ‫‪.3‬‬
‫القاب ية الجينية ‪Genetic ability‬‬ ‫‪.4‬‬

‫‪Types of laboratory animals‬‬ ‫انواع الحيوانا المختبرية‬

‫الج ا ‪ ،Rats‬الف ا ‪ ،Mice‬اارانب ‪ ،Rabbits‬خنا ي غينيا ‪ ،Guinea pigs‬الدجا‬


‫‪ ،Chickens‬الق د ‪....... Monkeys‬الخ‪.‬‬

‫‪Types of mice‬‬ ‫انواع الف را‬

‫الف را المعطلة جينيا ‪ :Knockout mice‬هي الف ا التي ت ت ك جين معطل ا مزا‬ ‫‪.1‬‬
‫(يستبد بقطعة من ‪.)DNA‬‬
‫الف را العارية ‪ :Nude mice‬تعاني من ف جينية تؤد ال فقدا التوثة ‪ ،Thymus‬يت يز‬ ‫‪.2‬‬
‫بانعدا الشع ‪.‬‬ ‫ا ها ال ظ‬
‫الف را المعدلة وراثيا ‪ :Transgenic mice‬هي الف ا التي تحور ا تعد جينات ا بواسطة‬ ‫‪.3‬‬
‫ال ندسة الوراثية‪.‬‬
‫‪ :Inbred mice‬هي الف ا التي تكو متطابقة جينيا نتيجة لتزا ج ا مع بع ا لفت ا‬ ‫‪.4‬‬
‫وي ة‪.‬‬

‫خصائص الحيوانا المختبرية ‪Properties of laboratory animals‬‬

‫‪Weight‬‬ ‫الو‬ ‫‪.1‬‬


‫الع ‪Age‬‬ ‫‪.2‬‬
‫الجنس ‪Sex‬‬ ‫‪.3‬‬
‫النقاء الجيني ‪Genetic purity‬‬ ‫‪.4‬‬
‫حيوا صحي ‪( Healthy‬غي مصا بأم اض)‬ ‫‪.5‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫طرائق التعامل مع الحيوا المختبري (الحمل والتثبيت)‬


‫‪Handling and Restraint‬‬

‫‪ -1‬ح ل ت بيت الحيوا يد يا ‪Manual‬‬

‫‪ ‬يح ل الحيوا اما بيد احد ‪ Single-handed‬ا باليدين ‪.Double handed‬‬

‫‪ -2‬يح ل ي بت الحيوا باستع ا ادا خاصة ‪Restrainer device‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -1‬اعطاء المستضد عن طريق اامعاء‬

‫يق الفم ‪Oral administration‬‬ ‫اعطاء ال ست د عن‬ ‫أ‪-‬‬

‫‪ ‬ابسط يقة‪.‬‬
‫‪ ‬يعط ال ست د عن يق ماء غ اء الحيوا ‪.‬‬
‫‪ ‬يجب مع فة ك ية ال اء الغ اء ال ست كة من قبل الحيوا قبل اعطاء ال ست د‪.‬‬

‫ية )‪Intragastric administration (Oral gavage‬‬ ‫‪ -‬ادخا ال ست د بداخل القنا ال‬

‫‪.‬‬ ‫ك‬ ‫ا رأ‬ ‫‪ ‬تستع ل محقنة خاصة لتج يع الحيوا غالبا ما تكو‬
‫ية‪.‬‬ ‫‪ ‬يتم ادخا ال ست د مباش ال القنا ال‬
‫‪ ‬تحدد ج عة ال ست د ال عطا ‪.‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -2‬اعطاء المستضد بطرائق اخر غير اامعاء ‪Parenteral administration‬‬

‫طرائق الحقن ‪ Injection‬ومنها‪-:‬‬ ‫أ‪-‬‬

‫‪ .1‬الحقن داخل الوعاء الدمو ‪Intravenous injection‬‬


‫‪ ‬يحقن ال ست د السائل داخل الوعاء الدمو مباش ‪.‬‬
‫‪ ‬اس ع يقة ل حقن‪.‬‬
‫‪ ‬يحقن ال ست د داخل الوعاء الدمو ال نبي الجانبي ‪.Lateral tail vein‬‬

‫(الحقن داخل الوعاء الدمو الجانبي ل فأر)‬

‫‪ .2‬الحقن تحت الج د ‪Subcutaneous injection‬‬


‫‪ ‬حقن ال ست د تحت الج د ‪( Sub cutis‬بين الج د ‪ Skin‬الع ا ‪.(Muscles‬‬
‫يقة س ة غي مؤل ة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫(الحقن تحت الج د في الف ا )‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ .3‬الحقن داخل التجويف الب يتوني ‪Intraperitoneal injection‬‬


‫‪ ‬حقن ال ست د داخل تجويف الجسم ‪.Body cavity‬‬
‫يقة بسيطة ت تا بالس ولة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫(الحقن داخل التجويف الب يتوني في الف ا )‬

‫‪ .4‬الحقن داخل اادمة ‪Intradermal injection‬‬


‫‪ ‬حقن ال ست د خا الج د (‪)Dermis‬‬

‫(الحقن داخل اادمة في الف ا )‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ .5‬الحقن داخل الع ة ‪Intramuscular injection‬‬


‫‪ ‬يحقن ال ست د في الع ة مباش‬
‫‪ ‬يتم الحقن في ع ة الف ‪Thigh muscle‬‬

‫في الج ا )‬ ‫ة الف‬ ‫(الحقن في ع‬

‫‪Inhalation‬‬ ‫‪ -‬ااستنشا‬

‫‪ ‬تستع ل ه الط يقة في التجار ال تع قة بال بو ‪ Asthma‬ت و ال واء غي ها‪.‬‬

‫يقة ااستنشا في الف ا )‬ ‫(‬


‫‪ヶ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 3 Practical Immunology 2020-2019

Bleeding in animals ‫طرائق سحب الد في الحيوانا‬

Heart puncture ‫ عنة الق ب‬-1

Vein puncture ‫ عنة الوريد‬-2

Α
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 3‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫(سحب الد من الوريد الوداجي ‪)Jugular vein‬‬

‫‪Β‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 4 Practical Immunology 2020-2019

Antigen-Antibody Interaction ‫التفاعل بين المستضد والجسم المضاد‬


)Agglutination Reactions ‫(تفاعا التا‬
‫) يدع بالتفاعل‬Specific Antibody( ‫ مع الجسم ال اد ال ا به‬Antigen ‫ا ارتبا ال ست د‬
‫ ينتج عن ه ا اارتبا تكوين ال عقد‬Ag-Ab Interaction ‫بين ال ست د الجسم ال اد ي تص بـ‬
.Immuno-Complex ‫ال ناعي‬

Ag+Ab Immuno-Complex

‫اد هو ارتبا‬ ‫ا ااس م ال تعاكسة في ال عادلة اعا تد ع ا اارتبا بين ال ست د الجسم ال‬
-:‫) ضعيفة هي‬Binding Forces( ‫ضعيف تتحكم به قو ارتبا‬

.Van der Waals forces .1


.Electrostatic forces .2
.Hydrogen bonds .3
.Hydrophobic forces .4

The types of Ag-Ab reactions ‫أنواع التفاعا بين المستضد والجسم المضاد‬

.Agglutination ‫ تفاعا التا‬-1

.Precipitation ‫ تفاعا الت سيب‬-2

.Complement fixation ‫ ت بيت ال ت م‬-3

Enzyme Linked Immunosorbent Assay ‫ال تبط باإنزيم‬ ‫ تفاعل س س ة الب‬-4


.)ELISA(

.Immunofluorescence (IM) ‫ التألق ال ناعي‬-5

Characteristics of Antigens ‫خصائص المستضدا‬

،Hormones ،Cell surface structure ،enzymes( Polypeptides & Proteins )1


.)Exotoxins
.)Cell membrane( Lipoproteins )2
)Blood cell markers( Glycoproteins )3
.)DNA complexed to protein but not pure DNA( Nucleoproteins )4
.)Bacterial capsule( Polysaccharides )5


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Agglutination Reaction‬‬ ‫تفاعل التا‬

‫التا ا الت ا ‪ :‬هو تكتل الجسي ا ‪ Clumping of particles‬ه ا ال صط ح مشتق من الك ة‬


‫بال ست د ا يكو حبيبي (غي ائب)‬ ‫الاتينية ‪ Agglutinare‬التي تعني الغ اء‪ ،‬يشت‬
‫‪ )Non soluble( Particulate Ag‬م ل البكت يا‪ ،‬ال ست دا ال وجود ع سطح ك يا الد الح‬
‫غي ها‪.‬‬

‫‪Particulate antigen + Antibody = Agglutination‬‬

‫‪Applications of Agglutination reaction‬‬ ‫تطبيقا تفاعل التا‬

‫‪ -1‬مجاميع الد ‪ABO &Rh Systems‬‬

‫لإنسا م ا م ل ا خايا بوجود م كبا الب تينا السك ية‬ ‫تت يز ك يا الد الح‬
‫‪ Glycoproteins‬الب تينا الدهنية ‪ Glycolipids‬ع سطح الغشاء ال و ه ال كونا ل ا‬
‫خاصية مست دية‪ ،‬م ا لك الب تينا السك ية ال وجود ع سطح ك يا الد الح لإنسا التي‬
‫تنتج نظا الد ا ما تس مج وعة الد ‪ .ABO‬تصنف فصائل الد بحسب نظا ‪ ABO‬ال الفصائل‬
‫ال وضحة في الشكل التالي‪-:‬‬

‫شكل (‪ :)1‬فصائل الد حسب نظا ‪ABO‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫اما نظا ‪ Rh‬فيعت د ع جود ا انعدا ب تين يس بال ست د ‪ D‬فعند جود ع سطح ك يا الد‬
‫الح تعط فصي ة الد اشار موجبة ‪ ، Rh+ve‬عند انعدامه تعط اشار سالبة ‪ Rh-ve‬ك ا موضح في‬
‫الشكل التالي‪-:‬‬

‫شكل (‪ :)2‬نظا ‪Rh‬‬

‫النظامين اعا ال ما ي ي‪-:‬‬ ‫‪ ‬تقسم فصائل الد اعت ادا ع‬

‫شكل (‪ :)3‬فصائل الد اعتمادا‬


‫على نظامي ‪ ABO‬و ‪Rh‬‬
‫حيث تشير المنطقة المحببة الى‬
‫حدو التا ‪.‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫المواد المستعملة‬

‫بق خا بالفحص يحتو ع حف ‪.‬‬ ‫‪.1‬‬


‫امصا م اد ‪.)ABO kit( Anti D ،Anti B ،Anti A‬‬ ‫‪.2‬‬
‫عيدا ل تح يك‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫اب خز ‪.Lancets‬‬ ‫‪.4‬‬
‫كحو قطن ل تعقيم‪.‬‬ ‫‪.5‬‬

‫شكل (‪ABO kit :)4‬‬

‫طريقة العمل‬

‫الد ‪.‬‬
‫عقم ف ااصبع بالكحو ثم اع ل خزا في فه ل حصو ع‬ ‫‪.1‬‬
‫ضع قط د في ‪ 3‬حف من الطبق (قط في كل حف )‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫اضف ال صل ال اد فو القط ا (تو ع اامصا ‪ Anti D ،Anti B ،Anti A‬ع‬ ‫‪.3‬‬
‫القط ا ) مع الح ر من ت و القطار بالد ‪.‬‬
‫امز الد مع ال صل ال اد باستع ا العيدا ثم ح الطبق‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫اق أ النتيجة ك ا في الشكل (‪.)3‬‬ ‫‪.5‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -2‬اختبار الح ل ‪Pregnancy test‬‬

‫ال ح ض ل قند ‪Human‬‬ ‫ال ورمو ااك شيوعا في تش يص الح ل هو ال ورمو البش‬
‫‪ ،)HCG( Chorionic Gonadotropin‬هو عبار عن ب تين سك ‪ Glycoprotein‬يف من‬
‫ال شي ة يظ في د الحامل بعد ‪ 6‬ايا من الح ل‪ ،‬اما في البو فيظ بعد ‪ 12-10‬يو ‪ .‬يعد ه ا‬
‫ال ورمو من العاما ااساسية لتش يص الح ل في ال احل ال بك ‪.‬‬

‫الش يحة ‪Direct Latex Agglutination Slide test‬‬ ‫ع‬ ‫‪ -1‬التش يص ال باش باختبار الت ا‬

‫تستع ل في ه ا ااختبار ك يا الاتكس ‪ Latex beads‬ال غ فة بال صل ال اد ( ‪Anti HCG‬‬


‫‪ )serum‬ت ز مع مصل ا بو ال أ ال اد تش يص الح ل لدي ا ك ا موضح في ا ي ي‪-:‬‬

‫)‪Ab-coated latex + urine with Ag HCG → Agglutination (positive test‬‬

‫)‪Ab-coated latex + urine without Ag HCG → No agglutination (negative test‬‬

‫‪Agglutination inhibition test‬‬ ‫‪ -2‬التش يص غي ال باش باختبار ت بيط الت ا‬

‫في ه الط يقة ي ز مصل ا بو ال أ ال اد تش يص الح ل لدي ا مع ال صل ال اد ( ‪Anti‬‬


‫‪ )HCG serum‬من ثم ي اف عالق من ك يا الاتكس ال غ فة ب ورمو ‪ HCG‬ك ا موضح في ا‬
‫ي ي‪-:‬‬

‫‪Anti HCG serum + urine with Ag HCG + Ag-coated latex→ No agglutination‬‬


‫)‪(positive test‬‬

‫‪Anti HCG serum + urine without Ag HCG + Ag-coated latex→ Agglutination‬‬


‫)‪(negative test‬‬

‫‪ -3‬العامل ال ثواني ‪)RF( Rheumatoid Factor‬‬

‫وج ة ضد ‪ Fc portion‬ل جسم ال اد ‪IgG‬‬ ‫هو ااضداد ال اتية ‪ IgM( Autoantibody‬غالبا) ال‬
‫اد ‪ IgG‬فتتكو معقدا مناعية ‪Immune‬‬ ‫لانسا ‪ ،‬حيث ي تبط العامل ال ثواني ‪ RF‬مع الجسم ال‬
‫ا ااختبار لتش يص م ض الت ا ال فاصل‬ ‫‪ complexes‬تؤد ال تطور ااصابة‪ .‬يستع ل ه‬
‫ام اض ال ناعة ال اتية‪ ،‬قد يكو ‪ RF‬دليل‬ ‫ال ثواني (‪ )Rheumatoid Arthritis‬ال يعد من‬
‫لإصابة بأم اض اخ ‪.‬‬

‫النسبة الطبيعية ل عامل ال ثواني هي اقل من ‪.ml/IU 14‬‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫شكل (‪Rheumatoid factor :)5‬‬

‫عد ااختبار ‪RF kit‬‬

‫مكونا العد ‪Contents of RF kit‬‬

‫اد‬ ‫‪ :Reagent‬ك يا الاتكس مغ فة بالجسم ال‬


‫‪ IgG‬لإنسا ‪.‬‬
‫‪ :Positive control‬مصل عيار موجب‬
‫يحتو ع العامل ال ثواني (‪.)IgM‬‬

‫‪ :Negative control‬مصل عيار سالب‬

‫شكل (‪RF kit :)6‬‬

‫يوضح الشكل التالي مبدأ ااختبار‬

‫شكل (‪ :)7‬مبدأ عمل اختبار ‪RF‬‬


‫شكل (‪ :)Α‬مبدأ عمل اختبار ‪RF‬‬

‫‪ヶ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -4‬اختبار يدا ‪Widal test‬‬

‫الح‬ ‫التيفوئيدية (‪)Typhoid fever‬‬ ‫يستع ل لتش يص ااصابة ب ض الح‬ ‫‪‬‬


‫الباراتيفوئيدية (‪.)Paratyphoid fever‬‬
‫يكشف عن ااجسا ال اد ال اصة ببكت يا ‪ Salmonella‬في حالة ااصابة بال ض‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫س ي الفحص ع اسم الطبيب عالم الج اثيم الف نسي ‪Georges Fernand Isidore‬‬ ‫‪‬‬
‫‪.Widal‬‬
‫من بكت يا السال ونيا ك ا موضح في‬ ‫تستع ل في ه ا ااختبار مست دا م ت فة مح‬ ‫‪‬‬
‫الجد التالي‪-:‬‬

‫البكتريا‬ ‫المستضد‬
‫‪Salmonella typhi‬‬ ‫‪Salmonella typhi H‬‬
‫‪Salmonella typhi O‬‬
‫‪Salmonella paratyphi A‬‬ ‫‪Salmonella paratyphi A-H‬‬
‫‪Salmonella paratyphi A-O‬‬
‫‪Salmonella paratyphi B‬‬ ‫‪Salmonella paratyphi B-H‬‬
‫‪Salmonella paratyphi B-O‬‬

‫حيث ‪ H‬هو ال ست د السو ي (‪ )Flagellar‬ل بكت يا‪ ،‬بين ا ‪ O‬هو ال ست د الجس ي )‪.(Somatic‬‬

‫يقتين إج اء ااختبار ه ا‪-:‬‬ ‫‪ ‬هنا‬

‫يقة الش يحة الزجاجية ‪Slide Agglutination test‬‬ ‫‪-1‬‬

‫يقة نوعية ‪ ،Qualitative‬ا تستع ل ل ع فة نوع ااصابة ا تحدد شد ااصابة‪ ،‬ي كن توضيح ا‬
‫بالشكل التالي‪-:‬‬

‫شكل (‪Slide Agglutination test :)8‬‬

‫‪Α‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫مكونا العد ‪Widal test kit‬‬

‫‪ :Reagent‬ال ست دا ‪ H O‬أنواع‬
‫جنس السال ونيا ك ا موضح في الجد‬
‫السابق‪.‬‬

‫‪ :Positive control‬مصل عيار موجب‪.‬‬

‫‪ :Negative control‬مصل عيار سالب‪.‬‬

‫شكل (‪Widal test kit :)9‬‬

‫‪Tube agglutination test‬‬ ‫باانبو‬ ‫يقة الت ا‬ ‫‪-2‬‬

‫هي يقة ك ية ‪ Quantitative‬تستع ل ل ع فة ت كيز ااجسا ال اد في مصل ال يض حيث‬


‫ي فف ال صل بط يقة الت فيف ال تس سل (‪ )Serial dilutions‬ت اف اليه ك ية محدد من ال ست د‬
‫تؤخ النتيجة ك ق و أع ت فيف يظ نتيجة ايجابية ا ما يس بال عيار ‪.Titer‬‬

‫‪)RBT( Rose Bengal Test -5‬‬

‫الحيوا ‪ ،‬يوضح الشكل‬ ‫اختبار ت ا يستع ل لتش يص الح ال الطية (‪ )Brucellosis‬في اانسا‬
‫التالي صور لاختبار عد التش يص ال اصة به‪-:‬‬

‫مكونا العد ‪Contents of RB kit‬‬

‫البكت يا‬ ‫‪ :Reagent‬مست دا‬


‫ال صبوغة بصبغة ‪.Rose Bengal‬‬
‫‪ :Positive control‬مصل عيار‬
‫موجب‪.‬‬
‫‪ :Negative control‬مصل عيار‬
‫سالب‪.‬‬

‫شكل (‪Rose Bengal test :)10‬‬

‫‪Β‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 4‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -6‬اختبارا م اد الحالة العقدية ‪)ASOT( Antistreptolysin O Titer‬‬

‫يستع ل ه ا ااختبار في تش يص ااصابة ببكت يا ال كورا العنقودية ‪Streptococcal infection‬‬


‫باأخص ‪ . Streptococcus pyogenes‬يوضح الشكل التالي صور لعد التش يص‪-:‬‬

‫مكونا العد ‪Contents of ASO kit‬‬

‫‪ :Reagent‬ك يا اتكس مغ فة بال ست د‬


‫‪.Antistreptolysin O Ag‬‬
‫‪ :Positive control‬مصل عيار موجب‬
‫يحو اجسا م اد ‪Antistreptolysin O‬‬
‫‪.Ab‬‬
‫‪ :Negative control‬مصل عيار سالب‪.‬‬

‫شكل (‪Antistreptolysin O kit :)11‬‬

‫تعاريف م ة‬

‫ت فيف يعطي نتيجة موجبة‪.‬‬ ‫المعيار ‪ :Titer‬هو مق و اع‬

‫التخفيف المتسلسل‪ :‬هو س س ة من ال حاليل ال تس س ة ل اد في مح و ‪.‬‬

‫معامل التخفيف‪ :‬هو عدد م ا ت فيف مح و قياسا ال ال ح و ااص ي‪.‬‬

‫‪Γ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 5‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫التفاعل بين المستضد والجسم المضاد ‪Antigen-Antibody Interaction‬‬


‫(تفاعا الترسيب ‪)Precipitation Reactions‬‬
‫اد‪ ،‬فيتكو معقد مناعي ع‬ ‫الت سيب‪ :‬هو التفاعل بين ال ست د السائل ‪ Soluble Ag‬الجسم ال‬
‫شكل راسب ‪.Precipitant‬‬

‫)‪Soluble antigen + Antibody = Precipitation (Lattice‬‬

‫م احل الت سيب ‪Stages pf precipitation‬‬

‫من ال عقدا ال ناعية‬ ‫اد ‪ Abs‬تتكو شبكة صغي‬ ‫‪ .1‬ي تبط ال ست دا ‪ Ags‬مع ااجسا ال‬
‫‪ Small lattice‬خا ثواني‪.‬‬
‫‪ Large lattice‬تت سب‬ ‫‪ .2‬تفاعل بطيء يؤد ال ارتبا ال عقدا ال ناعية تكوين شبكا كبي‬
‫خار ال ح و ‪.‬‬

‫‪ ‬يحد الت سيب في ال نطقة التي تتكافأ في ا ك ية ال ست دا ‪ Ags‬ااجسا ال اد ‪Abs‬‬


‫تدع ه ال نطقة ب نطقة التكافؤ ‪ .Equivalent Zone‬يوضح الشكل التالي ه‬
‫ال نطقة‪-:‬‬

‫شكل (‪Equivalent zone :)1‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 5‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫انماط تفاعل الترسيب ‪Types of precipitation‬‬

‫‪ -1‬الت سيب في ال حاليل‬

‫ااختبار الح قي ‪Ring Test or Interfacial Test‬‬

‫اختبار مص ي بسيط يوضح ع ية الت سيب في ال حاليل‪.‬‬ ‫‪‬‬


‫ي اف ال ست د فو الجسم ال اد ببطؤ ا بالعكس‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫عد مز ال ست د مع الجسم ال اد‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫مع‬ ‫خا فت الح انة تتكو ح قة من ال اسب في ال نطقة التي تتكافا في ا ك ية ال ست دا‬ ‫‪‬‬
‫ااجسا ال اد ‪.Equivalent zone‬‬
‫ااختبار م م في تش يص ال ست دا ااجسا ال اد ال ج ولة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫شكل (‪Ring test :)2‬‬

‫اه ية ااكار م ا ي ي‪-:‬‬ ‫‪ -2‬الت سيب في جل ااكار ‪ Precipitation in Agar Gel‬تظ‬

‫‪ ‬يوف ااكار ر ية جيد ل اسب‪.‬‬


‫‪ ‬ي كن حفظ ال اسب ل د وي ة‪.‬‬
‫ع يه‪.‬‬ ‫‪ ‬ي كن صبغ ال اسب ا ا الته اج اء دراسا اخ‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 5‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫أ‪ -‬اانتشار ال نائي‪ -‬اخت لوني ‪1953 )Ouchterlony( Double Diffusion Method‬‬

‫ليتص ب‪.‬‬ ‫يت‬ ‫يصب ااكار في بق بت‬ ‫‪‬‬


‫يقطع ااكار ال تص ب بشكل حف ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫توضع ال ست دا ااجسا ال اد في الحف ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ياحظ ا ال ست دا ااجسا ال اد تنتش باتجا بع ا‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫له اه ية كبي في مع فة العاقة ال ست دية بين ال واد ال ت فة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تظ خطو الت سيب ع ثا ان ا هي‪-:‬‬ ‫‪‬‬

‫(تتشابه بال حددا‬ ‫تتطابق ال ست دا‬ ‫عندما‬ ‫‪ -1‬ن ط التطابق ‪ :Pattern of identity‬يتكو‬
‫ال ست دية ‪.)Share identical epitopes‬‬

‫(ا تتشابه‬ ‫‪ -2‬ن ط عد التطابق ‪ :Pattern of non-identity‬يتكو عندما ا تتطابق ال ست دا‬


‫بال حددا ال ست دية ‪.)Share no common epitopes‬‬

‫‪ -3‬ن ط التطابق الجزئي ‪ :Pattern of partial identity‬يتكو عندما تتشابه ال ست دا في‬


‫ال حددا ال ست دية لكن ي ت ك احده ا محدد مست دية احد ع ااقل خاصة به م ا يؤد ال‬
‫ور خط ت سيب يس بال ا ‪.Spur‬‬

‫شكل (‪Ouchterlony :)3‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 5‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -‬اانتشار ااحاد الشعاعي ‪1965 )Mancini( Single Radial Diffusion Method‬‬

‫يقة ك ية ‪ Quantitative‬ا ي كن تقدي ك ية ال ست د ا الجسم ال اد‪.‬‬ ‫‪‬‬


‫بت اكيز‬ ‫يو ع الجسم ال اد في ااكار بشكل متسا بين ا يوضع ال ست د داخل الحف‬ ‫‪‬‬
‫م ت فة ( العكس صحيح)‪.‬‬
‫تتكو دائ من ال اسب عند منطقة التكافؤ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ال اسب‬ ‫ي كن است ا الت كيز ال ج و من رسم العاقة بين الت كيزال ع و قط دائ‬ ‫‪‬‬
‫ال تكونة ك ا في الشكل (‪.)5‬‬

‫شكل (‪Mancini )4‬‬

‫شكل (‪ )5‬العاقة بين التركيز وقطر دائر الترسيب في اختبار ‪Mancini‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 6‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫التفاعل بين المستضد والجسم المضاد ‪Antigen-Antibody Interaction‬‬


‫(نظا المتمم ‪)Complement System‬‬
‫نظا المتمم ‪ Complement System‬او ‪ :Complement Cascade‬هو جزء من الج ا‬
‫ال ناعي الفط )‪ (Innate Immune System‬ال يعز ا يت م ع ل ااجسا ال اد ال ايا‬
‫الب ع ية ‪ Phagocytic cells‬في الق اء ع الكائنا ال ضة تحطي ا‪ .‬يتكو ال ت م من عدد من‬
‫الب تينا الصغي ي ق معظ ا في الكبد يصل عددها ال اك من ‪ 30‬ب تين توجد في السوائل‬
‫الجس ية م ل ال صل غي من السوائل ك ا توجد ع اغشية ال ايا‪.‬‬

‫قو ال صل القات ة ل ج اثيم ‪The Bactericidal power of Serum‬‬

‫يج ع ال صل‪.‬‬ ‫يت الد ليت‬ ‫‪ ‬يج ع الد في انابيب ا تحو ماد مانعة ل ت‬
‫‪ ‬تس ن ك ية محدد من ال صل بدرجة ‪ º56‬ل د ‪ 30‬دقيقة لت بيط ال ت م‪.‬‬
‫ع ااقل خ سة ت فيفا عش ية لبكت يا ‪.Staphylococcus epidermidis‬‬ ‫‪ ‬تح‬
‫‪Nutrient‬‬ ‫‪ ‬ي اف ‪ 0.1‬مل من البكت يا ال ففة ال بقين بت يحويا ع ااكار ال غ‬
‫‪.Agar‬‬
‫‪ ‬ي اف ‪ 0.1‬مل من ال صل الطا ‪ Fresh Serum‬ال الطبق رقم ‪ 0.1 ،1‬مل من ال صل‬
‫ال س ن ال الطبق رقم ‪ 2‬تح ن الطبا بدرجة ‪ º37‬ل د ‪ 24‬ساعة‪.‬‬
‫‪ ‬يشي الف في اعداد ال ستع ا البكتي ية بين الطبقين ال قو ال صل القات ة ل بكت يا ‪The‬‬
‫‪.Bactericidal power of Serum‬‬
‫‪No. of colonies in plate 2 – No. of colonies in plate 1 = The bactericidal‬‬
‫‪power of the serum.‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 6 Practical Immunology 2020-2019

The Bactericidal power of Serum )1( ‫شكل‬


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 6‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫اختبار ت بيت ال ت م ‪Complement Fixation Test‬‬

‫يقة مص ية لتش يص العوامل ال سببة ل عديد من اام اض‪.‬‬ ‫‪‬‬


‫يسحب ال صل من ال يض‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يس ن مصل ال يض في ح ا مائي بدرجة ‪ º56‬ل د ‪ 30‬دقيقة لت بيط ال ت م‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ت اف ك ية محدد من ال ت م (تؤخ من خنزي غينيا) ال مصل ال يض‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ي اف ال ست د ال ت صص ‪.Specific Antigen‬‬ ‫‪‬‬
‫ف م تبطة مع اجسا م اد نوعية‬ ‫اضافة معقد مناعي مكو من ك يا الد الح ل‬ ‫‪‬‬
‫‪.SRBCs+Anti SRBCs Antibodies‬‬
‫ق اء النتائج‪-:‬‬ ‫‪‬‬

‫اجسا م اد ) سوف تتفاعل ااجسا‬ ‫(يحتو ال صل ‪ Serum‬ع‬ ‫‪ ‬ا ا كا الش ص مصا‬


‫مناعية ‪Immune Complexes‬‬ ‫افة تتكو معقدا‬ ‫النوعية ال‬ ‫اد مع ال ست دا‬ ‫ال‬
‫تؤد ال تنشيط نظا ال ت م ارتبا ه مع ه ال عقدا ال ناعية (ت بيت ال ت م)‪ ،‬فيستنف ال ت م‬
‫اف‬ ‫اف (ك ية محدد مع ومة من خنزي غينيا) يبق ال عقد ال ناعي ال اني (الكاشف) ال‬ ‫ال‬
‫ف‬ ‫ل‬ ‫الد الح‬ ‫تح ل لك يا‬ ‫ا يحد‬ ‫)‪ (SRBCs+Anti SRBCs Antibodies‬ح‬
‫فب لك تكو النتيجة موجبة (‪ .)No Hemolysis-Positive‬شكل (‪)2‬‬

‫مناعية‬ ‫اجسا م اد ) ا تتكو معقدا‬ ‫(ا يحتو ال صل ع‬ ‫‪ ‬ا ا كا الش ص غي مصا‬


‫‪SRBCs+Anti‬‬ ‫اف ح في تبط مع ال عقد ال ناعي ال اني (الكاشف)‬ ‫ال ت م ال‬ ‫يبق‬
‫ف تح ا فب لك تكو‬ ‫ل‬ ‫الد الح‬ ‫ال تحطيم ك يا‬ ‫‪ SRBCs Antibodies‬يؤد‬
‫النتيجة سالبة (‪ .)Hemolysis-Negative‬شكل (‪)2‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 6 Practical Immunology 2020-2019

Complement Fixation Test :)2( ‫شكل‬


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 7‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫الفحوصا المناعية (‪)Immuno-Assays‬‬

‫‪Enzyme-Linked‬‬ ‫‪ -1‬فحص اليزا او فحص الممتز المناعي المرتبط باإنزيم‬


‫‪. )ELISA( Immunosorbent Assay‬‬

‫حساسيه‪ ،‬ي كنه الكشف عن ت اكيز‬ ‫يعتب فحص اليزا من الفحوصا ال ناعية الشائعة اأك‬ ‫‪‬‬
‫ا ة من ال واد ال فحوصة‪.‬‬
‫له اه ية في ايجاد نوع ت كيز ال اد ال اد تح ي ا (‪ Ab‬ا ‪ Ag‬غالبا) ال وجود في مح و ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يستع ل في تش يص الك ي من اام اض م ل اايد داء ال قوسا غي ها‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫له اه ية في الصناعا الغ ائية خصوصا تش يص ال واد ال سببة ل حساسية في ااغ ية م ل‬ ‫‪‬‬
‫الح يب الجو البيض غي ها‪.‬‬
‫يستع ل في ع م الس و كفحص س يع أصناف معينة من العقاقي ‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫المواد ااساسية المستعملة في فحص ‪ELISA‬‬

‫تستع ل في فحص ‪ ELISA‬مواد م ت فة اه ا ج ا اليزا القارئ (‪ )ELISA Reader‬الطابعة‬


‫(‪ )Printer‬العد ال اصة بالفحص (‪ )ELISA kit‬لكن ت ت ف مكونا العد حسب الش كة ال صنعة‬
‫اهم مكونات ا هي ااجسا ال اد ا ال ست دا النوعية (‪ )Specific Abs or Ags‬محاليل الغسل‬
‫بق ال عاي الدقيق (‪)Microtiter plate‬‬ ‫الغ ق الكشف غي ها من ال حاليل ك ا قد تحتو ع‬
‫غي ها من ال كونا ‪ .‬من ال واد ااخ ال ستع ة هي ال اصة الدقيقة (‪ .)Micropipette‬في ا ي ي‬
‫صور اهم ال واد ال ستع ة في تح يل ‪-:ELISA‬‬

‫‪Printer‬‬ ‫‪ELISA Reader‬‬

‫‪Micropipette‬‬ ‫‪Microtiter plate‬‬ ‫‪ELISA Kit‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 7‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫خطوا فحص اليزا ‪Steps of ELISA‬‬

‫الدقيق ‪ Microtiter plate‬ب ح و‬ ‫‪ -1‬التغ يف ا الطاء ‪ :Coating‬تغ ف الحف في بق ال عاي‬


‫الجسم ال اد أ ال ست د‪.‬‬

‫‪ -2‬ااغا ‪ : Blocking‬تغط ج يع ااماكن غي ال غ فة في ال طو اا ل ب ح و ب تيني ي ت ف‬


‫ت اما عن الب تين في خطو التغ يف (الجسم ال اد ا ال ست د) غالبا ما يستع ل مح و دارئ‬
‫الفوسفا ال تعاد ‪.PBS‬‬

‫اد النوعي ال تبط باإنزيم‪ ،‬حيث ي تبط مع‬ ‫‪ -3‬الكشف ‪ :Detection‬اضافة ال ست د ا الجسم ال‬
‫الجسم ال اد ا ال ست د ال ست دف‪.‬‬

‫‪ -4‬ق اء النتائج ‪ :Read results‬ت اف ال اد ااسا ‪ Substrate‬التي يع ل ع ي ا اانزيم‪ ،‬تقا‬


‫ااشار (تغي ال و ) الناتجة من تفاعل اانزيم مع ال اد ااسا ا ا كانت النتيجة موجبة (تقا‬
‫امتصاصية ال وء الناف من خا ال ح و بج ا ‪.)ELISA Reader‬‬

‫ع ية الت ص من ال ح و الزائد الغسل بعد كل خطو من خطوا الفحص‪.‬‬ ‫ماحظة‪ :‬تج‬

‫‪Steps of ELISA‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 7‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫انواع فحص اليزا ‪Types of ELISA‬‬

‫‪ -1‬فحص اليزا ال باش ‪Direct ELISA‬‬

‫‪ ‬يغ ف الطبق بال ست د ال اد تش يصه ‪.Antigen of interest‬‬


‫‪ ‬ي اف الجسم ال اد ال تبط باإنزيم (‪ )Primary Conjugated Ab‬مباش ‪.‬‬

‫‪Direct ELISA‬‬

‫‪ -2‬فحص اليزا غي ال باش ‪Indirect ELISA‬‬

‫‪ ‬يغ ف الطبق بال ست د ال اد تش يصه ‪.Antigen of interest‬‬


‫‪ ‬ي اف الجسم ال اد اا غي ال تبط باإنزيم ‪.Primary Unconjugated Ab‬‬
‫‪ ‬ي اف الجسم ال اد ال اني ال تبط باإنزيم ‪.Secondary Conjugated Ab‬‬

‫‪Indirect ELISA‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 7‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Sandwich ELISA‬‬ ‫‪ -3‬فحص اليزا الشطي‬

‫‪ ‬يغ ف الطبق بجسم م اد غي م تبط باإنزيم يس ‪.Capture Ab‬‬


‫‪ ‬ي اف ال ست د ال اد تش يصه ‪.Antigen of interest‬‬
‫‪ ‬ي اف الجسم ال اد ال تبط باإنزيم يس ‪.Detection Ab‬‬

‫‪Sandwich ELISA‬‬

‫حسا النتائج‬

‫مح و قياسي بت اكيز م ت فة مع ومة تقا اامتصاصية لكل ت كيز من الت اكيز‬ ‫يجب ا يح‬
‫تستع ل ه ال ع وما في رسم ال نحن القياسي ‪ ،Standard Curve‬بعد لك تقا اامتصاصية‬
‫ل اد ال اد الكشف عن ا ت بت قيم اامتصاصية ع ال حور الصاد من ثم ي سم خط ي تد ال‬
‫الت كيز ال ج و‬ ‫ال نحن القياسي من ثم خط آخ من ال نحن القياسي ال ال حور السيني يست‬
‫ك ا موضح في الصور التالية‪.‬‬

‫‪3‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪1‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 7‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪ -2‬التألق المناعي ‪)IF( Immunofluorescent‬‬

‫‪ ‬اسا الفحص هو التفاعل بين ال ست د ال وجود في النسيج ا ال ايا ال ف د مع الجسم‬


‫ال اد‪.‬‬
‫‪ ‬ي بط الجسم ال اد مع الصبغة ال تألقة ‪Fluorochrome ،Fluorescent dye‬‬
‫ا ‪ Fluorophore‬م ا ع ي ا صبغة ‪. (FITC) fluorescein isothiocyanate‬‬
‫يق انواع م ت فة من ال جاه من ا ‪Ultraviolet‬‬ ‫‪ ‬تشاهد ال عقدا ال ناعية عن‬
‫‪ Fluorescent Microscope Microscope‬غي ها من ال جاه ‪.‬‬

‫أنواع فحص التالق المناعي‬

‫‪ :Direct IF‬يستع ل فيه جسم م اد احد ‪ Primary Ab‬مع م بالصبغة‬ ‫‪ -1‬التألق ال ناعي ال باش‬
‫قت ق يل إنجا بسبب ق ة عدد خطواته دقته اقل لكن تك فته من ف ة قياسا‬ ‫ال تألقة‪ ،‬ل ا ف و يحتا ال‬
‫بالنوع ااخ ‪.‬‬

‫‪ -2‬التالق ال ناعي غي ال باش ‪ :Indirect IF‬يستع ل فيه نوعين من ااجسا ال اد اا غي مع م‬


‫بالصبغة ال تألقة يس ‪ Primary Ab‬بين ا يكو الجسم ال اد ال اني مع م بالصبغة ال تألقة يس‬
‫‪ Secondary Ab‬ب ا ا خطواته اك بسبب جود نوعين من ااجسا ال اد ل ا فا تك فته اع‬
‫قت اك لكن دقته اع من النوع اا ‪.‬‬ ‫يستغ‬

‫‪Types of IF‬‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 7 Practical Immunology 2020-2019

Fluorescent Microscope

Ultraviolet Microscope


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 8‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫عملية البلعمة ‪Phagocytosis‬‬

‫‪ :Phagocytosis‬هي ع ية ابتاع ااجسا الغ يبة م ل البكت يا‪ ،‬الطفي يا ال ايا ال يتة‪ ،‬بالنسبة‬
‫ل ج ا ال ناعي هي احد من آليا الدفاع ال ئيسية ل ناعة الفط ية تقو ب ا خايا مت صصة هي الب عم‬
‫الكبي ‪ ،Macrophage‬ال ية العدلة ‪ ،Neutrophil‬ال ية عديد التغصنا ‪ Dendritic cell‬ال ية‬
‫البائية ‪ B cell‬اي ا‪ .‬ع ية الب ع ة ليست فقط ابتاع الجسم الغ يب ه ه الت ص من بقايا لكن‬
‫في الج ا ال ناعي هي‬ ‫هي ع ية معالجة ال ست د (‪ )Ag processing‬تقدي ه ال خايا اخ‬
‫ال ايا التائية‪ ،‬ل ا ف ي ت عب د ريا حيويا في ال ناعة الفط ية (‪ )Innate immunity‬ك ا تقو بد ر‬
‫اساسي في نشوء ال ناعة التكيفية (‪.)Adaptive immunity‬‬

‫ه ال ايا نسبة ال موقع ا في‬ ‫الخايا البلعمية الثابتة في النسيج ‪ :Fixed Macrophages‬تس‬
‫النسيج ك ا ي ي‪-:‬‬

‫‪Location‬‬ ‫‪Cell name‬‬ ‫‪Fixed macrophages in the tissues‬‬

‫‪Liver‬‬ ‫‪Kupffer's‬‬
‫‪cell‬‬

‫‪Connective tissue‬‬ ‫‪Histiocyte‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 8 Practical Immunology 2020-2019

Lung Alveolar
macrophage
(dust cell)

Peritoneum Peritoneal
macrophage

Brain Microglial
cell

Kidney Mesangial
cell


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 8‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Bone‬‬ ‫‪Osteoclast‬‬

‫‪Skin and Mucosa‬‬ ‫‪Langerhans‬‬


‫‪cell‬‬

‫)‪Spleen (red pulp‬‬ ‫‪Sinusoidal‬‬


‫‪cell‬‬

‫مراحل عملية البلعمة ‪Stages of phagocytosis‬‬

‫بال ية الب ع ية‪.‬‬ ‫اانج ا الكي يائي التصا ال ايك‬ ‫‪)1‬‬


‫تكوين الجسيم الب ع ي‪.‬‬ ‫ابتاع ال ايك‬ ‫‪)2‬‬
‫اندما الجسيم الحا مع الجسيم الب ع ي تكوين الجسيم الب ع ي الحا ‪.‬‬ ‫‪)3‬‬
‫بواسطة اانزي ا ‪.‬‬ ‫ه م ال ايك‬ ‫‪)4‬‬
‫‪.‬‬ ‫ومة ل ايك‬ ‫تكوين ما يس ‪ Residual body‬ال يحتو ع البقايا غي ال‬ ‫‪)5‬‬
‫عن يق ال ايا ال قدمة ل ست د ‪Antigen Presenting‬‬ ‫تقديم اجزاء من ال ايك‬ ‫‪)6‬‬
‫‪.Cells‬‬
‫‪.‬‬ ‫ال فا الباقية ل ايك‬ ‫‪)7‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 8 Practical Immunology 2020-2019

Steps of phagocytosis


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 8‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫تجربة ‪ :1‬عملية البلعمة داخل التجويف البريتوني ‪Intraperitoneally phagocytosis‬‬

‫ال واد ال ستع ة‬

‫ف ا م تب ية بي اء‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫عالق خ ي ال بز‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫حقن بية ‪ 1‬مل‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫مح و م حي بيعي ‪.Normal Saline‬‬ ‫‪.4‬‬

‫يقة الع ل‬

‫يحقن ‪ 0.5‬مل من عالق ال ي داخل التجويف الب يتوني ل فأر مع ع ل مسا ‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫تت الفأر ‪ 10‬دقائق في ح ار الغ فة‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫يحقن ‪ 0.5‬مل من ال ح و ال حي الطبيعي داخل التجويف الب يتوني ل فأر مع ع ل مسا ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تقتل الفار يشق الج د ثم يسحب السائل الب يتوني الحا ع ال ايا الب ع ية ال ي ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫ع ش يحة جاجية تت لتجف‪.‬‬ ‫تؤخ قط من السائل الب يتوني تف‬ ‫‪.5‬‬
‫تصبغ ال سحة بصبغة لش ا ‪ Leishman’s stain‬ل د ‪ 3‬دقائق‪.‬‬ ‫‪.6‬‬
‫ي اف ال اء ال قط فو الصبغة ي زجا معا ل د ‪ 10‬دقائق‪.‬‬ ‫‪.7‬‬
‫تغسل ال سحة ب اء الحنفية ل د ‪ 2‬دقيقة‪.‬‬ ‫‪.8‬‬
‫تت ال سحة لتجف ثم تفحص تحت ال ج ‪.‬‬ ‫‪.9‬‬

‫‪Intraperitoneally Phagocytosis‬‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 8‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫تجربة ‪NBT test 2‬‬

‫ال واد ال ستع ة‬

‫‪ )1‬صبغة ‪.Nitro Blue Tetrazolium‬‬


‫‪.‬‬ ‫مانع ت‬ ‫‪ )2‬د ا ‪ Fresh Blood‬مج وع في انابيب حا ية ع‬

‫ماحظة‪ :‬صبغة ‪ NBT‬صف اء ال و في حالة التأكسد لكن عند مزج ا مع الد بعد فت الح انة فا‬
‫ال ايا الب ع ية في الد تبت ع الصبغة ت تزل ا تحول ا ال ماد سوداء ال و تدع فورما ا‬
‫‪.Formazan‬‬

‫يقة الع ل‬

‫‪ %0.1‬من الصبغة بإ ابة ‪ 0.1‬غم من الصبغة في ‪ 100‬مل من ال ح و ال حي‬ ‫يح‬ ‫‪)1‬‬


‫الطبيعي‪.‬‬
‫ي ز ‪ 0.1‬مل من الصبغة مع ‪ 0.1‬مل من الد ‪.‬‬ ‫‪)2‬‬
‫يح ن مزيج الد الصبغة بح ار ‪ º37‬ل د ‪ 10‬دقائق‪.‬‬ ‫‪)3‬‬
‫يتم ع ل مسحا من ال زيج (اتباع يقة مسحة الد ) ثم تصبغ ال سحة بصبغة لش ا ا‬ ‫‪)4‬‬
‫كي زا‪.‬‬
‫ياحظ تكو ماد الفورما ا داخل ال ايا العدلة‬ ‫تفحص الش ائح تحت ال ج‬ ‫‪)5‬‬
‫‪.Neutrophils‬‬

‫‪NBT test‬‬
‫‪ヶ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫االتها ‪Inflammation‬‬

‫ت ي ة النسيج ل شفاء‬ ‫االت ا ‪ :‬هو ااستجابة الطبيعية لأنسجة الحية ضد ااصابة‪ ،‬يع ل ع‬
‫ااصا ‪.‬‬

‫‪Types of inflammation‬‬ ‫أنواع االت ا‬

‫‪ .1‬االت ا الحاد ‪.Acute Inflammation‬‬


‫‪ .2‬االت ا ال زمن ‪.Chronic Inflammation‬‬

‫االتها الحاد ‪Acute Inflammation‬‬

‫‪ ‬استجابة س يعة تحد خا دقائق ا ساعا ‪.‬‬


‫‪ ‬يحفز ه ا النوع من االت ا عن يق ما ي ي‪-:‬‬
‫‪( Infections‬بكت يا‪ ،‬فاي سا ‪ ،‬في يا ‪ ،‬س و ااحياء‬ ‫‪ )1‬ااصابا ا العد‬
‫ال ج ية)‪.‬‬
‫الكي يائية ا الفيزيائية ا‬ ‫‪ )2‬ض ر ا ج النسيج ‪( Tissue Injury‬ال ضوض‪ ،‬الج‬
‫الح ارية ااشعاعية‪ ،‬اضافة ال بعض ال واد الكي يائية في البي ة)‪.‬‬
‫‪ )3‬ااجسا الغ يبة ‪( Foreign Bodies‬الشظايا‪ ،‬اا سا ‪ ،‬ااد ا الحاد )‪.‬‬
‫‪ )4‬التفاعا ال ناعية ‪ Immune Reactions‬م ل تفاعا ف الحساسية‪.‬‬

‫(‪)Acute inflammation‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫االتها المزمن ‪Chronic Inflammation‬‬

‫‪ ‬استجابة بطي ة تحد خا اسابيع ال اش ‪.‬‬


‫‪ ‬يحفز بواسطة ما ي ي‪-:‬‬
‫‪ )1‬العد ا ااصابة ال ست ‪.Persistent Infection‬‬
‫وي ة‪.‬‬ ‫‪ )2‬التع ض ل عوامل الس ية لفت ا‬
‫‪ )3‬ام اض ال ناعة ال اتية ‪.Autoimmunity‬‬

‫ماحظة‪ :‬ا الصفة ال يز لالت ا ال زمن هي االت ا الحبيبي ‪Granulomatous‬‬


‫بتج ع م كز من‬ ‫‪ Inflammation‬ا ما يدع اي ا بالتحبب ‪ Granuloma‬هو احا ة ال ايك‬
‫ال ايا الب ع ية ال نشطة ‪ Activated Macrophages‬التي تتحو ال ما يس بال ايا شبه‬
‫الظ ارية ‪ Epithelioid Cells‬ي م اي ا ماد بينية ‪ Matrix‬خايا اخ م ل ‪،Lymphocytes‬‬
‫‪ ،Eosinophils ،Neutrophils‬ال ايا الع اقة متعدد اأنوية ‪Multinucleated Giant Cells‬‬
‫(هي عبار عن باعم كبي ‪ Macrophages‬تندمج مع بع ا لتكو خ ية احد ع اقة متعدد‬
‫لك م ض السل‬ ‫اأنوية)‪ ،‬ك ا توجد ار ما ليفية ‪ Fibroblasts‬كواجين ‪ .Fibers‬م ا ع‬
‫‪ Tuberculosis‬الج ا ‪ Leprosy‬غي ها‪.‬‬

‫)‪Granulomatous Inflammation (Granuloma‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Chronic Inflammation‬‬

‫تعاريف م ة‬

‫‪ :Apoptosis‬هو ال و ال ب مج ل ايا (ع ية بيعية)‪.‬‬

‫ال بك ل ايا النسيج الحي بسبب عوامل خارجية م ل‬ ‫يقصد به ال و‬ ‫‪ :Necrosis‬معنا الن‬
‫العد ا ااصابا الس و ال ضوض‪.‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Diagnosis of Inflammation‬‬ ‫تشخيص االتها‬

‫‪.)ESR( Erythrocyte Sedimentation Rate‬‬ ‫‪ -1‬معد ت سيب ك يا الد الح‬

‫‪ ‬اختبار د بسيط‪.‬‬
‫‪ ‬ليس خاصا ب ض معين‪.‬‬
‫له اه ية في تتبع عا اام اض االت ابية‪.‬‬ ‫‪ ‬يعد دليا عاما ع جود االت ا‬

‫ائق لقيا معد ت سيب ك يا الد الح م ل ‪،Wintrobe Method‬‬ ‫ماحظة‪ :‬توجد عد‬
‫‪ Landau-Adams Method ،Westergren Method‬ج يع ه الط ائق تتشابه في اسا الع ل‬
‫لكن ا ت ت ف في ك ية الد ال ستع ة النسب الطبيعية ل ا نظ ا اختاف ا في ا وا احجا اانابيب‬
‫ال ستع ة في ا‪.‬‬

‫‪Wintrobe Method -1‬‬

‫ال ‪ 100‬عند القاعد ‪.‬‬ ‫انبو ‪ Wintrobe‬مدر من الصف في ااع‬ ‫‪‬‬


‫يح ل اانبو عاموديا في حامل خا به‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫‪.EDTA‬‬ ‫يستع ل الد ال ج وع في انابيب حا ية ع مانع ت‬ ‫‪‬‬
‫تستع ل ماصة باستور وي ة ل أ اانبو بالد ال الصف ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يت اانبو في الحامل ال ا به ل د ساعة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ص ت له بعد‬ ‫تحسب ال سافة الك ية (مسافة هبو ك يا الد الح من الصف ال ال قم ال‬ ‫‪‬‬
‫تقدر بوحد م ي يت ‪/‬ساعة‪.‬‬ ‫ساعة) هي ت ل معد ت سيب ك يا الد الح‬

‫النسب الطبيعية ‪ Normal Value‬لطريقة ‪.Wintrobe‬‬

‫‪Age/Sex‬‬ ‫‪Normal rate mm/hour‬‬

‫‪Males‬‬ ‫‪0-9‬‬

‫‪Females‬‬ ‫‪0-20‬‬

‫‪Children‬‬ ‫‪0-13‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 9 Practical Immunology 2020-2019

(Wintrobe method)

(Wintrobe tubes and rack)


‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫‪Westergren Method -2‬‬

‫ال ‪ 200‬عند القاعد ‪.‬‬ ‫انبو ‪ Westergren‬مدر من الصف في ااع‬ ‫‪‬‬


‫يح ل اانبو عاموديا في حامل خا به‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫‪.EDTA‬‬ ‫يستع ل الد ال ج وع في انابيب حا ية ع مانع ت‬ ‫‪‬‬
‫ي فف الد ال ج وع (الد ‪ )EDTA+‬بإضافة ‪ 2‬مل من الد في انبو يحو ‪ 0.5‬مل من‬ ‫‪‬‬
‫ست ا الصوديو ‪ ،Sodium Citrate‬يجب ا ا ي ز اك من ‪ 2‬ساعة في جو الغ فة ا ‪6‬‬
‫ساعا في ‪.º4‬‬
‫الجزء ال طا ي من‬ ‫ي أ اانبو بالد ال الصف ي بت اانبو في ال شبك من ااع‬ ‫‪‬‬
‫ااسفل ال وجود في الحامل ال ا به‪.‬‬
‫يت اانبو في الحامل ال ا به ل د ساعة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ص ت له بعد‬ ‫تحسب ال سافة الك ية (مسافة هبو ك يا الد الح من الصف ال ال قم ال‬ ‫‪‬‬
‫تقدر بوحد م ي يت ‪/‬ساعة‪.‬‬ ‫ساعة) هي ت ل معد ت سيب ك يا الد الح‬

‫النسب الطبيعية ‪ Normal Value‬لطريقة ‪.Westergren‬‬

‫‪Age/Sex‬‬ ‫‪Normal rate mm/hour‬‬

‫‪Males‬‬ ‫‪0-15‬‬

‫‪Females‬‬ ‫‪0-20‬‬

‫‪Children‬‬ ‫‪0-10‬‬

‫‪ヶ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫)‪(Westergen method‬‬

‫‪ ESR‬هي استع ا ج ا ‪ ESR Analyzer‬ال وضح في الصور التالية‪-:‬‬ ‫من الط ائق ااحد لقيا‬

‫‪Α‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 9‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫ماحظة‪ :‬يعكس ‪ ESR‬التغي في ب تينا البا ما (‪ )Globulins Fibrinogen‬ال ي افق‬


‫االت ا ‪ ،‬ا الزياد في نسب ه الب تينا يؤد ال تكو ما يس بالن ائد ‪( Rouleaux‬تتج ع‬
‫ك يا الد الح مع بع ا تكو تج عا كبي ) م ا يؤد ال ت سب ا‪.‬‬

‫تكوين الن ائد‬

‫‪ -1‬ب تين الطور الحاد ‪C-Reactive Protein‬‬

‫ب تين موجود في مصل الد ‪.‬‬ ‫‪‬‬


‫ي ق عن يق الكبد‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ي تفع مستوا عند حصو االت ا ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يعتب دليا عاما ع جود االت ا ليس خاصا ب ض معين‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫‪Β‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 9 Practical Immunology 2020-2019

Normal value Contents of RB kit ‫مكونا العد‬


‫النسبة الطبيعية‬ .CRP ‫ حبيبا اتكس مغ فة بأجسا م اد لب تين‬:Reagent
0.8-3 mg/L .‫ مصل عيار موجب‬:Positive control
.‫ مصل عيار سالب‬:Negative control

CRP kit

Γ
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 10‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫تفاعا فرط الحساسية ‪Hypersensitivity Reactions‬‬


‫استجابة غي بيعية ينتج ا الج ا ال ناعي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫رب ا تكو محط ة ا غي م يحة ا حت قات ة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحتا ال ش ص مع ض ل ست د مسبقا ‪.Pre-sensitized or Immune person‬‬ ‫‪‬‬
‫تحد عند ا ش ص لديه استعداد جيني ل تحسس‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫أنواع تفاعا فرط الحساسية‬

‫‪ -1‬الن ط اا من تفاعا ف الحساسية (ف الحساسية العاج ة)‬


‫])‪[Type Ι-Immediate Type of Hypersensitivity (Anaphylaxis‬‬

‫اد ‪.IgE‬‬ ‫‪ ‬استجابة س يعة تتوسط ا ال ية البدينة ‪ Mast Cell‬الجسم ال‬


‫‪ ‬تحد خا دقائق من التع ض ل ست د‪.‬‬
‫االت ا م ل ال ستامين‬ ‫‪ ‬بعد التع ض ل ست د تط ق ال ية البدينة ‪ Mast Cell‬مواد تحث ع‬
‫‪ Histamine‬سائط اخ خا ع ية تدع ‪.Degranulation‬‬

‫(‪Type Ι-Immediate Type of Hypersensitivity (Anaphylaxis‬‬

‫‪ヱ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 10‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫الحساسية ‪(Cytotoxic hypersensitivity( Type Π‬‬ ‫‪ -2‬الن ط ال اني من تفاعا ف‬

‫تتواسطه ااجسا ال اد ‪.IgM IgG‬‬ ‫‪‬‬


‫تحد عندما يكو ال ست د ال ست دف جزء من سطح ال ية ا النسيج ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تحد بعد عد ساعا ال ايا ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ت تبط ااجسا ال اد ‪ IgM IgG‬بال ست دا ال وجود ع سطح ال ية ا النسيج مكونة‬ ‫‪‬‬
‫معقدا مناعية تؤد ال تحفيز ال ت م بالتالي تحطم ال ية ا النسيج تحفيز التفاعا الس ية‬
‫ال تواسطة بال ايا ال عت د ع الجسم ال اد ‪Antibody Dependent Cell-( ADCC‬‬
‫‪.)Mediated Cytotoxicity‬‬

‫(‪Type Π (Cytotoxic hypersensitivity‬‬

‫‪ヲ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 10‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫الحساسية ‪Type Ш‬‬ ‫‪ -3‬الن ط ال الث من تفاعا ف‬

‫تتواسطه ااجسا ال اد ‪.IgM IgG‬‬ ‫‪‬‬


‫يحد عندما يكو ال ست د ال ست دف ائب‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يحد بعد ساعا ا ايا ا حت اسابيع‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫استجابة‬ ‫تت سب ال عقدا ال ناعية في م ت ف انسجة الجسم تؤد ال تحفيز ال ت م حد‬ ‫‪‬‬
‫الت ابية ارتشا ال ايا العدلة بالتالي تحطيم النسيج‪.‬‬

‫‪Type Ш‬‬

‫‪ン‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 10‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫الحساسية اآج ة)‬ ‫‪ -4‬الن ط ال ابع من تفاعا ف الحساسية (تفاعا ف‬


‫‪(Delayed type of hypersensitivity) Type ΙV‬‬

‫خايا الج ا ال ناعي ااخ‬ ‫ال ية التائية ‪ T-cell‬التي تقو بد رها بج‬ ‫‪ ‬يعت د حد ث ا ع‬
‫ال منطقة التحفيز‪.‬‬
‫‪ ‬تحد بعد ‪ 12‬ساعة ا اك ‪.‬‬

‫‪)Delayed type hypersensitivity( Type ΙV‬‬

‫‪ヴ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
‫‪Lab 10‬‬ ‫‪Practical Immunology‬‬ ‫‪2020-2019‬‬

‫ااختبار الجلدي ‪Skin Test‬‬

‫تحقن ك يا صغي من ال ست د ال فف داخل اادمة ‪. Intradermal Injection‬‬ ‫‪‬‬


‫يج ااختبار ع الجزء البطني (الداخ ي) من ال راع‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ت طط ال راع حسب عدد ال ست دا ال اد فحص التحسس ضدها تكتب ااح ف اا ل من‬ ‫‪‬‬
‫ه ال ست دا ‪ ،‬تحقن ك يا صغي من ا داخل اادمة‪.‬‬
‫ا ا كانت النتيجة موجبة يحد اح ار انتفا في منطقة الحقن‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يقا قط اانتفا ال تكو بعد ‪15‬دقيقة من التع ض ل ست د لتش يص ن ط الحساسية اا‬ ‫‪‬‬
‫(‪ )Anaphylaxis‬بعد ‪ 48-24‬ساعة لتش يص ن ط الحساسية ال ابع (‪.)Delayed Type‬‬

‫‪Skin Test‬‬

‫‪ヵ‬‬
‫علم المناعة العملي‬
Lab 10 Practical Immunology 2020-2019

)AGT( Antiglobulins Test ‫ او‬Coombs Test ‫اختبار كومبس‬

. ‫ اختبار د‬
.Indirect ‫ غي ال باش‬Direct ‫ يوجد نوعين من ااختبار مباش‬
‫) م ل فق الد‬Cytotoxic( Type Π ‫ يستع ل لتش يص تفاعا الحساسية من الن ط ال اني‬
Hemolytic Disease of Newborn ‫ تح ل د الوليد‬،Hemolytic Anemia ‫التح ي‬
.‫غي ها‬

Coombs Test

You might also like