Machine Translated by Google

Bản thảo được chấp nhận

Tổng hợp các dẫn xuất Benzimidazole ổn định mang pyrazole có tác dụng chống ung thư

và chất ức chế thụ thể EGFR

Md Jawaid Akhtar, Ahsan Ahmed Khan, Zulphikar Ali, Rikeshwer Prasad

dewangan, Md Rafi, Md Quamrul Hassan, Md. Sayeed Akhtar, Anees Ahmad

Siddiqui, Sangh Partap, Santosh Pasha, M Shahar Yar

PII: S0045-2068(17)30871-4
DOI: https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2018.03.002
Thẩm quyền giải quyết: YBIOO 2292

Để xuất hiện trong: Hóa hữu cơ sinh học

Ngày nhận: 18 tháng 11 năm 2017

Ngày sửa đổi: ngày 4 tháng 2 năm 2018

ngày 2 tháng 3 năm 2018

Ngày được chấp nhận:

Vui lòng trích dẫn bài viết này là: M. Jawaid Akhtar, A. Ahmed Khan, Z. Ali, R. Prasad dewangan, M. Rafi, M. Quamrul

Hassan, Md. Sayeed Akhtar, A. Ahmad Siddiqui, S. Partap, S. Pasha, M. Shahar Yar, Tổng hợp ổn định

Dẫn xuất của Benzimidazole mang pyrazole có tác dụng chống ung thư và ức chế thụ thể EGFR, Hóa hữu cơ sinh học

(2018), doi: https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2018.03.002

Đây là tệp PDF của một bản thảo chưa chỉnh sửa đã được chấp nhận xuất bản. Là một dịch vụ cho khách hàng của chúng tôi

chúng tôi đang cung cấp phiên bản đầu tiên của bản thảo này. Bản thảo sẽ được sao chép, sắp chữ và

xem xét bằng chứng thu được trước khi nó được công bố ở dạng cuối cùng. Xin lưu ý rằng trong quá trình sản xuất

các lỗi có thể được phát hiện có thể ảnh hưởng đến nội dung và tất cả các tuyên bố từ chối trách nhiệm pháp lý áp dụng cho tạp chí đều có liên quan.
Machine Translated by Google

Tổng hợp các dẫn xuất Benzimidazole ổn định mang pyrazole có tác dụng chống ung thư và ức chế thụ thể EGFR

MD Jawaid Akhtar1 , Ahsan Ahmed Khan1 , Zulphikar Ali1, Rikeshwer Prasad dewangan2 ,
bác sĩ Rafi1 , Ngài Quamrul Hassan3 , Ông Sayeed Akhtar3 , Anees Ahmad Siddiqui1 , Sangh
Phần1 , Santosh Pasha2 và M Shahar Yar*1

1Khoa Hóa Dược, Trường Đào tạo & Nghiên cứu Dược (trước đây là Khoa Dược),
Jamia Hamdard, Hamdard Nagar, New Delhi-110062, Ấn Độ

2
Phòng thí nghiệm số 405, Viện Genomics và Sinh học Tích hợp, New Delhi, Ấn Độ

3Khoa Dược, Trường Đào tạo & Nghiên cứu Dược (Trước đây là Khoa Dược), Jamia
Hamdard, Hamdard Nagar, New Delhi-110062, Ấn Độ

*Đồng tác giả; Email: yarmsy@rediffmail.com

TRỪU TƯỢNG:

Một loạt dẫn xuất pyrazole liên kết với benzimidazole mới được tổng hợp bằng phương pháp

phản ứng ngưng tụ vòng thông qua phản ứng đa thành phần một bình trong etanol tuyệt đối. Tất cả

các hợp chất tổng hợp được đã được thử nghiệm về hoạt tính chống ung thư in vitro trên năm loại ung thư ở người

các dòng tế bào bao gồm MCF-7, HaCaT, MDA-MB231, A549 và HepG2. Ức chế thụ thể EGFR

các hoạt động đã được thực hiện đối với tất cả các hợp chất. Phần lớn các hợp chất đều tỏ ra có hiệu lực

hoạt động chống tăng sinh chống lại các dòng tế bào ung thư được thử nghiệm. Hợp chất 5a thể hiện nhiều nhất

hoạt động hiệu quả chống lại các dòng tế bào ung thư phổi (IC50 = 2,2µM) và liên kết với EGFR (IC50 =

0,97µM) so với các thành viên khác trong chuỗi. Hợp chất 5a ức chế sự tăng trưởng của

Tế bào ung thư A549 bằng cách gây ra sự bắt giữ pha G2/M mạnh. Ngoài ra, hợp chất tương tự còn ức chế

sự phát triển của tế bào ung thư A549 bằng cách gây ra apoptosis. Trong nghiên cứu lắp ghép phân tử hợp chất 5a

được liên kết với túi hoạt động của EGFR (PDB 1M17) bằng năm liên kết hydro chính và hai

Tương tác π-π với năng lượng liên kết ΔG = -34,581Kcal/mol.

Từ khóa: Benzimidazole liên kết pyrazole, Chống ung thư, Apoptosis, Nghiên cứu lắp ghép,

Nghiên cứu bệnh cơ tim

Machine Translated by Google

1. Giới thiệu

Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGFR), một thụ thể tyrosine kinase (RTK), có vai trò

vai trò quan trọng trong các hoạt động truyền tín hiệu của tế bào bao gồm phân chia tế bào, tăng trưởng, biệt hóa,

chuyển hóa, bám dính, vận động và chết [1]. Bốn thụ thể tyrosine kinase có liên quan (EGFR,

HER2, HER3 và HER4) được phân loại vào họ HER. Người đồng tính và/hoặc

quá trình dị hóa các thụ thể HER dẫn đến quá trình phosphoryl hóa các gốc tyrosine quan trọng trong

miền nội bào và dẫn đến sự kích thích của nhiều sự truyền tín hiệu nội bào

con đường liên quan đến sự tăng sinh, bám dính, biệt hóa, di cư và sống sót của tế bào [2-8].

Việc bãi bỏ quy định về tín hiệu họ HER thúc đẩy sự tăng sinh, xâm lấn, di căn, hình thành mạch,

và sự sống sót của tế bào khối u và đã được mô tả trong nhiều bệnh ung thư ở người, bao gồm cả ung thư

phổi, đầu, cổ và vú [9-10]. Do đó, EGFR và các thành viên gia đình của nó đã nổi lên như

mục tiêu hấp dẫn cho liệu pháp chống ung thư, đặc biệt là điều trị phổi không phải tế bào nhỏ

ung thư (NSCLC) [11-12]. Do đó, họ thụ thể HER đại diện cho một loại cơ quan lý trí

mục tiêu phát triển thuốc chống ung thư và một số phân tử nhỏ nhắm mục tiêu EGFR và

HER2 hiện đã có sẵn trên lâm sàng, bao gồm thuốc ức chế thuận nghịch gefitinib, erlotinib và

lapatinib và các chất ức chế không thể đảo ngược Canertinib, Afatinib và Dacomitinib (Hình 1).

Benzimidazole có cấu trúc liên quan đến indole và là phối tử của thụ thể serotonin (5-HT),

thụ thể histamine (H4), thụ thể bradykinin (B2) và thụ thể dopamine (D4) [13].

Ngoài ra, benzimidazole là một đồng vị của nucleoside purine và là một khung quan trọng trong

các phân tử có hoạt tính sinh học khác nhau được khám phá rộng rãi để phát triển các tác nhân chống ung thư

[14-15]. Một số dẫn xuất benzimidazole có tác dụng chống ung thư mạnh với các dẫn xuất dị vòng khác

giàn giáo ví dụ bentamustine (1) [16], selumetinib (2) [17], PPTMB (3) [18] và

Hoechst-33258 (4) [19] được trình bày trong (Hình 2). Trong những năm gần đây, Pyrazole và

Nhóm thuốc pyrazoline đã thu hút được nhiều sự chú ý sau khi phát hiện ra chất kháng khuẩn mạnh

tác nhân pyrazole C-glycoside, pyrazofurin. Sau khi thử nghiệm trên các dòng tế bào ung thư, nó chỉ được

được sử dụng lâm sàng như một tác nhân chống ung thư [20]. Một dẫn xuất khác của pyrazoline (5) đã được chọn

trong số loạt sản phẩm của nó như là chất ức chế chọn lọc B-Raf kinase [21].

Cấu trúc đồng tinh thể của gefitinib hoặc erlotinib với EGFR đã mang lại cấu trúc có giá trị

thông tin giúp thiết kế hợp lý các chất ức chế EGFR mạnh. Phân tích chế độ liên kết của

Gefitinib gợi ý một số tương tác chính với túi liên kết ATP của EGFR, bao gồm

liên kết H quan trọng của phần quinazoline với vùng bản lề, túi kỵ nước được lấp đầy bởi
Machine Translated by Google

nhóm thế anilin 3-chloro-4-fluoro và chiếm vùng dung môi của 6-

nhóm morpholinopropoxy. Vùng dung môi thường chứa nhiều loại chức năng phân cực

nhóm ít quan tâm đến hiệu quả [11, 22-23]. Các thiết kế hợp lý để tổng hợp

các hợp chất cuối cùng được trình bày trong Hình 3.

Trên cơ sở những quan sát này, chúng tôi đã thiết kế và tổng hợp một nhóm thuốc mới, trong đó

pyrazoline mạnh được liên kết với benzimidazole có hoạt tính sinh học ở vị trí C-2 thông qua một

liên kết carbonyl và aryl khác nhau được thế ở vị trí C-3 và C-5 của pyrazolin. Các

các hợp chất đã điều chế được đã được đánh giá về khả năng ức chế EGFR và hoạt tính chống ung thư chống lại năm

dòng tế bào ung thư ở người, HepG2 (gan), MCF-7 (vú), MDA-MB231 (vú), A549 (phổi),

HaCaT (da). Phân tích sâu hơn về chu trình tế bào và nghiên cứu quá trình tự hủy của hợp chất mạnh nhất

đã được thực hiện để biết cơ chế chính xác của sự chết tế bào. Hơn nữa hồi tưởng

nghiên cứu cho thấy rằng một số lượng đáng kể bệnh nhân bị nhiễm độc tim trong hoặc

ngay sau khi dùng Sunitinib [25]. Vì vậy, hợp chất mạnh nhất là

được phân tích cho các nghiên cứu về bệnh cơ tim, một trong những tác dụng phụ của thuốc ức chế kinase đối với

điều trị CML hoặc các bệnh ung thư liên quan [24]. Các nghiên cứu lắp ghép phân tử cũng được bắt đầu cho

hiểu rõ sự ràng buộc và xác nhận các quan sát dược lý.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Tổng quan

Tất cả các hóa chất được sử dụng đều thuộc loại dùng trong phòng thí nghiệm và được mua từ E. Merck (Darmstadt,

Đức) và SD Fine Chemicals (Mumbai, Ấn Độ). Điểm nóng chảy được xác định bằng cách mở

ống mao dẫn trong thiết bị điểm nóng chảy Hicon (Hicon, New Delhi, Ấn Độ) và

chưa được sửa chữa. Độ tinh khiết của các hợp chất được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng (TLC)

(silica gel G) sử dụng hệ dung môi toluene: etyl axetat: axit formic (5:4:1, v/v/v) và

benzen: axeton (9:1, v/v). Các đốm được hình dung bằng cách tiếp xúc với hơi iốt hoặc dưới

tia cực tím. Phổ FTIR được ghi lại trên máy quang phổ FTIR (có ái lực IR SHIMADZU) sử dụng viên KBr;

Giá trị υmax được tính bằng cm-1 và phổ 1H NMR

được chụp trên phổ NMR được ghi lại trên máy quang phổ NMR DRX-400 MHz kiểu Bruker (1H ở 300 MHz, 13C ở

75 MHz) ở DMSO-d6 hoặc CDCl3. Độ dịch chuyển hóa học (δ)

được biểu thị bằng phần triệu (ppm) so với tetramethylsilane (TMS) dưới dạng nội bộ

hằng số chuẩn và hằng số ghép ( giá trị J) được biểu thị bằng Hz. Các mẫu phân chia được viết tắt

được sử dụng là: s, singlet; bs, singlet rộng; d, ống đôi; đ, cặp đôi; t, bộ ba; q, sinh bốn; tôi,

bội số. Các proton có thể trao đổi (NH) được xác nhận bằng việc bổ sung D2O. Phổ khối đã
Machine Translated by Google

thu được trên thiết bị Synapt LC/MS của Water sử dụng phương pháp ion hóa tác động điện tử được trình bày dưới dạng

m/z. Phân tích nguyên tố (C, H và N) được thực hiện bằng máy phân tích Perkin-Elmer model 240C.

Các phân tích về C, H, N nằm trong khoảng ± 0,4% giá trị lý thuyết.

2.2. tổng hợp

2.2.1. Quy trình chung để tổng hợp các hợp chất (3a)

Hỗn hợp 4-Cl acetophenone 1,29 mL (0,01 mol) (1a) và 4-Cl benzaldehyde (2a) 1,40g

(0,01 mol) được khuấy trong etanol (10-20 mL) (cho đến khi cả hai hòa tan) sau đó thu được NaOH 30% (5 mL).

thêm vào, khuấy nhẹ từng giọt cho đến khi xuất hiện kết tủa. Kết tủa thu được là

trung hòa bằng HCl loãng. Nó được lọc và làm khô trong không khí và kết tinh lại bằng etanol để

thu được hợp chất (3a). Các quy trình tương tự cũng được thực hiện để tổng hợp hợp chất (3b-l).

2.2.1.1. (E)-1,3-bis(4-clophenyl)prop-2-en-1-one (3a, C15H10Cl2O); mp 188-190oC ; Rf = 0,82 [chloroform:

metanol (9:1)]; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 6,9 (d, 1H, CH-phenyl), 7,4 (d, 1H, CH-C=O),

7,5-7,8 (m, 8H, phenyl). IR (KBr) (cm-1 ): 1655 (CO str), 2954

(CH2 str). Hậu môn. Tính toán: C, 65,01; H, 3,64; Đã tìm thấy: C, 65,02; H, 3,62.

2.2.2. Quy trình chung để tổng hợp các hợp chất (5a-l)

Dung dịch gồm các chalcon khác nhau, 3a-l (0,01mol) và 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-

yl)acetohydrazide (0,01mol) (4) trong etanol khô (30 mL) được hồi lưu trong 24 giờ, được theo dõi bởi

vết đơn trong TLC (Chloroform: metanol = 9:1) sau đó làm nguội và đổ vào vật liệu đã nghiền

đá. Chất rắn thu được được lọc và kết tinh lại.

2.2.2.1. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(3,5-bis(4-chlorophenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-

yl)etanol (5a, C24H18Cl2N4O); mp 130-132oC ; Rf = 0,69 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,22 (dd, 1H, J = 9,3, 7,8, pyrazoline-CH2), 3,40 (s, 2H, -

CH2), 3,99 (dd, 1H, J = 11,4, 10,8 pyrazolin-CH2), 4,84 (dd, 1H, J = 7,2, 7,2, pyrazolin-CH),

7,03 (dd, 2H, J = 2,4, 9,0, H-5,6-benzimidazole), 7,53 (m, 4H, phe), 7,70 (m, 4H, phe), 8,01 (d, 2H, J =

8,4, H -4,7-benzimidazole), 12,36 (bs, 1H, NH, D2O có thể trao đổi). 13C NMR (75 MHz,

CDCl3) δ(ppm): 169,89, 152,61, 143,89, 138,28, 136,31, 133,63, 132,27, 129,91, 129,84, 129,01, 126,87,

125,57, 125,03, 121,96, 51,15, 42,28, 32,70. IR (KBr) (cm-1 ): 3300 (NH str), 2989 (CH2

str), 1710 (C=O str), 1690, 1685 (C=N str); ESI MS (m/z): 448 (M+ ), 450 (M+2); Hậu môn. Tính toán.:

C, 64,15; H, 4,04; N, 12,47; Đã tìm thấy: C, 64,19; H, 4,05; N, 12,43.

Machine Translated by Google

2.2.2.2. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-bromophenyl)-3-(4-chlorophenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5b, C24H18BrClN4O); mp 134-136oC ; Rf = 0,73 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,10 (dd, 1H, J = 18,1, 8,6, pyrazolin-

CH2), 3,69 (s, 2H, -CH2), 3,90 (dd, 1H, J = 18,2, 14,5, pyrazolin-CH2), 4,85 (dd, 1H, J = 14,0,

8.1, pyrazolin-CH), 7,08 (dd, 2H, J = 4,7, 7,5, H-5,6-benzimidazole), 7,55 (m, 4H, phe), 7,89

(m, 4H, phe), 8,03 (d, 2H, J = 7,5, H-4,7-benzimidazole), 12,11 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi được). 13C

NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,22, 151,0, 141,62, 138,59, 140,11,

136,50, 134,73, 131,57, 128,59, 128,13, 127,50, 126,29, 122,53, 115,97, 52,7, 40,9, 32,49. IR

(KBr) (cm-1 ): 3315 (NH str), 2990 (CH2 str), 1721 (C=O str), 1687, 1675 (C=N str); ESI MS (m/z): 492

(M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 58,38; H, 3,67; N, 11 giờ 35; Đã tìm thấy: C, 58,32; H, 3,69; N, 11:38.

2.2.2.3. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(3-(4-chlorophenyl)-5-(4-fluorophenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5c, C24H18ClFN4O); mp 140-142oC ; Rf = 0,71 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,02 (dd, 1H, J = 18.1, 8.2, pyrazolin-

CH2), 3,44 (s, 2H, -CH2), 3,89 (dd, 1H, J = 18,1, 14,0, pyrazolin-CH2), 4,86 (dd, 1H, J = 14,5,

8.4, pyrazolin-CH), 7,11 (dd, 2H, J = 7,5, 7,8, H-5,6-benzimidazole), 7,42 (m, 4H, phe), 7,88

(m, 4H, phe), 7,97 (d, 2H, J = 7,6, H-4,7-benzimidazole), 12,20 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi được). 13C

NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,21, 158,12, 151,5, 142,67, 139,97,

137,02, 136,82, 134,17, 128,59, 128,32, 128,12, 127,50, 122,33, 115,62, 50,92, 41,62, 32,90. IR

(KBr) (cm-1 ): 3313 (NH str), 2993 (CH2 str), 1690 (C=O str), 1685, 1679 (C=N str); ESI MS (m/z): 432

(M+ ); Hậu môn..94; Tính toán: C, 66,59; H, 4,19; N, 12Tìm thấy: C, 66,62; H, 4,22; N, 12,95.

2.2.2.4. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-chlorophenyl)-3-(4-metoxyphenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5d, C25H21ClN4O2); mp 128-130oC ; Rf = 0,67 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,01 (dd, 1H, J = 17,4, 6,8, pyrazolin-CH2), 3,26

(s, 2H, -CH2), 3,73 (s, 3H, -OCH3), 3,84 (dd, 1H, J = 17,7, 12,4, pyrazolin-CH2), 4,89 (dd, 1H,

J = 12,5, 6,6, pyrazolin-CH), 7,14 (dd, 2H, J = 3,0, 7,2, H-5,6-benzimidazole), 7,35 (m, 4H,

phe), 7,84 (m, 4H, phe), 7,93 (d, 2H, J = 7,8, H-4,7-benzimidazole), 12,14 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi

được). 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,10, 158,45, 151,71, 141,54, 139,17,

139,80, 132,50, 130,76, 128,91, 128,33, 128,09, 127,50, 124,13, 115,20, 55,8, 50,54, 40,41, 32,80.

IR (KBr) (cm-1 ): 3310 (NH str), 2980 (CH2 str), 1781 (C=O str), 1670, 1660 (C=N str); ESI MS (m/

z): 444 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 67,49; H, 4,76; N, 12,59; Đã tìm thấy: C, 67,45; H, 4,75; N,

12,59
Machine Translated by Google

2.2.2.5. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-bromophenyl)-3-(4-metoxyphenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5e, C25H21BrN4O2); mp 142-144oC ; Rf = 0,72 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H NMR (300

MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,04 (dd, 1H, J = 17,6, 7,4, pyrazolin-CH2), 3,25

(s, 2H, -CH2), 3,68 (s, 3H, -OCH3), 3,82 (dd, 1H, J = 17,5, 14,0, pyrazolin-CH2), 4,91 (dd, 1H,

J = 14,2, 7,6, pyrazolin-CH), 7,18 (dd, 2H, J = 3,7, 7,2, H-5,6-benzimidazole), 7,42 (m, 4H,

phe), 7,78 (m, 4H, phe), 7,89 (d, 2H, J = 6,7, H-4,7-benzimidazole), 12,31 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi được).

13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,20, 159,11, 151,72, 141,40, 138,53,

140,72, 131,90, 130,69, 129,18, 128,22, 128,10, 127,36, 123,13, 115,36, 57,6, 51,53, 40,46, 32,68. IR (KBr)

(cm-1 ): 3318 (NH str), 2990 (CH2 str), 1728 (C=O str), 1673, 1665 (C=N str);

ESI MS (m/z): 488 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 61,36; H, 4,33; N, 11,45; Đã tìm thấy: C, 61,38; H, 4,37; N,

11 giờ 45.

2.2.2.6. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-flophenyl)-3-(4-metoxyphenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5f, C25H21FN4O2); mp 144-146oC ; Rf = 0,75 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H NMR (300

MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,10 (dd, 1H, J = 19,2, 7,4, pyrazolin-CH2), 3,21

(s, 2H, -CH2), 3,72 (s, 3H, -OCH3), 3,89 (dd, 1H, J = 17,6, 12,7, pyrazolin-CH2), 5,02 (dd, 1H,

J = 12,5, 7,6, pyrazolin-CH), 7,15 (dd, 2H, J = 2,9, 9,8, H-5,6-benzimidazole), 7,49 (m, 4H,

phe), 7,78 (m, 4H, phe), 7,91 (d, 2H, J = 7,4, H-4,7-benzimidazole), 12,32 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi được).

13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,13, 160,72, 158,97, 152,01, 142,45,

139,70, 137,45, 130,17, 129,21, 128,17, 128,89, 127,20, 124,37, 115,90, 57,8, 50,62, 40,41, 33,05.

IR (KBr) (cm-1 ): 3320 (NH str), 2992 (CH2 str), 1715 (C=O str), 1675, 1662 (C=N str); ESI MS (m/

z): 428 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 70,08; H, 4,94; N, 13.08; Đã tìm thấy: C, 70,06; H, 4,97; N,

13.05.

2.2.2.7. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-chlorophenyl)-3-p-tolyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol- 1-yl)etanon

(5g , C25H21ClN4O); mp 135-137oC ; Rf = 0,69 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 2,31 (s, 3H, CH3), 3,11 (dd, 1H, J = 18,4, 10,2, pyrazoline-

CH2), 3,29 (s, 2H, -CH2), 4,11 (dd, 1H, J = 17,5, 12,6, pyrazolin-CH2), 4,90 (dd, 1H, J = 12,9,

10,5, pyrazolin-CH), 7,12 (dd, 2H, J = 3,5, 7,2, H-5,6-benzimidazole), 7,39 (m, 4H, phe), 7,89

(m, 4H, phe), 8,01 (d, 2H, J =7,4, H-4,7-benzimidazole), 12,42 (bs, 1H, NH, D2O có thể trao đổi).

13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,23, 151,03, 141,54, 140,80, 139,37, 139,05, 133,79,

132,75, 130,41, 129,96, 129,12, 128,44, 123,13, 115,16, 50,41, 41,50, 33,89, 21,34. IR (KBr) (cm-1 ): 3318

(NH str), 2985 (CH2 str), 1695 (C=O str), 1678, 1665 (C=N str); ESI MS (m/z): 428 (M+ ); Hậu môn. Tính

toán: C, 70,01; H, 4,93; N, 13.06; Đã tìm thấy: C, 71,03; H, 4,94; N, 13.09.

Machine Translated by Google

2.2.2.8. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-bromophenyl)-3-p-tolyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-yl)etanon ( 5h ,

C25H21BrN4O); mp 136-138oC ; Rf = 0,68 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 2,35(s, 3H, CH3), 3,14 (dd, 1H, J = 17,9, 9,2, pyrazoline-CH2),

3,39 (s, 2H, -CH2), 4,05 (dd, 1H, J = 19,6, 12,3, pyrazolin-CH2), 4,97 (dd, 1H, J = 12,6, 9,4,

pyrazolin-CH), 7,19 (dd, 2H, J = 2,5, 7,2, H-5,6-benzimidazole), 7,39 (m, 4H, phe), 7,82 (m,

4H, phe), 7,94 (d, 2H, J = 3,4, H-4,7-benzimidazole), 12,13 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi được). 13C

NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,13, 151,90, 141,52, 140,97, 140,13, 139,72, 133,56,

131,67, 130,73, 129,25, 129,19, 128,62, 123,16, 116,16, 50,36, 40,53, 33,14, 22,17. IR (KBr) (cm-1 ): 3311

(NH str), 3009 (CH2 str), 1690 (C=O str), 1682, 1675 (C=N str); ESI MS (m/z): 472

(M+); Hậu môn. Tính toán: C, 63,43; H, 4,47; N, 11,84; Đã tìm thấy: C, 63,45; H, 4,43; N, 11,88.

2.2.2.9. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-flurophenyl)-3-p-tolyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-

yl)etanon (5i, C25H21FN4O) ; mp 152-154oC ; Rf = 0,68 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 2,47 (s, 3H, CH3), 3,16 (dd, 1H, J = 19,0, 9,6, pyrazolin-

CH2), 3,48 (s, 2H, -CH2), 4,10 (dd, 1H, J = 18,4, 11,0, pyrazolin-CH2), 4,88 (dd, 1H, J = 11,7,

9.4), 7,19 (dd, 2H, J = 2,7, 3,0, H-5,6-benzimidazole), 7,45 (m, 4H, phe), 7,86 (m, 4H, phe),

7,93 (d, 2H, J = 7.2, H-4,7-benzimidazole), 12.10 (bs, 1H, NH, D2O có thể trao đổi). 13C NMR (75

MHz, CDCl3) δ(ppm): 170,16, 160,13, 152,11, 142,24, 140,16, 135,12, 133,45, 129,61, 128,70, 128,17, 127,15,

123,70, 115,59, 50,31, 40,39, 32,17, 23,17. IR (KBr) (cm-1 ): 3315 (NH str), 2995 (CH2 str), 1700 (C=O str),

1680, 1673 (C=N str); ESI MS (m/z): 412 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C,

72,80; H, 5,13; N, 13,58; Đã tìm thấy: C, 72,82; H, 5,14; N, 13,56.

2.2.2.10. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-chlorophenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-4,5-

dihydro-1H-pyrazol-1-yl)etanon (5j, C24H19ClN4O2); mp 155-157oC ; Rf = 0,78 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,31 (dd, 1H, J = 10,7, 19,5, pyrazolin-

CH2), 3,38 (s, 2H, -CH2), 4,11 (dd, 1H, J = 19,8, 11,5, pyrazolin-CH2), 4,96 (dd, 1H, J = 11,7,

10,9, pyrazolin-CH), 5,65 (s, 1H, -OH), 7,07 (dd, 2H, J = 7,4, 7,8, H-5,6-benzimidazole), 7,35

(m, 4H, phe), 7,83 (m, 4H, phe), 7,98 (d, 2H, J = 7,4, H-4,7-benzimidazole), 12,28 (bs, 1H,

NH, D2O trao đổi được). 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 171,03, 158,53, 151,15, 142,40,

139,17, 138,17, 133,45, 132,57, 129,61, 128,12, 128,93, 127,12, 123,13, 114,16, 50,15, 40,50,

-1
32.17. IR (KBr) (cm ): 3305 (NH str), 2997 (CH2 str), 1701 (C=O str), 1682, 1670 (C=N str);

+
ESI MS (m/z): 430 (M ); Hậu môn. Tính toán: C, 66,90; H, 4,44; Thứ 2, 13:00 ; Đã tìm thấy: C, 66,95; H, 4,49;

N, 13.07.
Machine Translated by Google

2.2.2.11. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-bromophenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-4,5-

dihydro-1H-pyrazol-1-yl)etanon (5k, C24H19BrN4O2); mp 135-137oC ; RF = 0,74

[chloroform: metanol (9:1)]; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,16 (dd, 1H, J = 18,8, 10,9,

pyrazolin-CH2), 3,41 (s, 2H, -CH2), 4,15 (dd, 1H, J = 18,9, 11,9, pyrazolin-CH2), 4,92 (dd, 1H,

J = 11,9, 10,7, pyrazolin-CH), 5,95 (s, 1H, -OH), 7,13 (dd, 2H, J = 2,1, 5,4, H-5,6-

benzimidazole), 7,45 (m, 4H, phe), 7,78 (m, 4H, phe), 8,00 (d, 2H, J = 7,8, H-4,7-

benzimidazole), 12,23 (bs, 1H, NH, D2O có thể trao đổi). 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm):

170,16, 160,34, 151,13, 141,27, 140,63, 139,23, 131,54, 130,68, 129,37, 128,10, 128,76, 127,57, 122,19, 114,64,

50,91, 41,7 3, 32,62. IR (KBr) (cm-1 ): 3321 (NH str), 2985 (CH2 str), 1703 (C=O

str), 1689, 1680 (C=N str); ESI MS (m/z): 474 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 60,64; H, 4,03; N, 11,79 ;

Đã tìm thấy: C, 60,69; H, 4,09; N, 11,74.

2.2.2.12. 2-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1-(5-(4-flophenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-

1H-pyrazol-1-yl)etanon (5l, C24H19FN4O2); mp 139-141oC ; Rf = 0,79 [chloroform: metanol (9:1)]; 1H

NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 3,21 (dd, 1H, J = 19,2, 11,1, pyrazolin-

CH2), 3,45 (s, 2H, -CH2), 3,98 (dd, 1H, J = 19,4, 11,0, pyrazolin-CH2), 4,98 (dd, 1H, J = 11,6,

11,4, pyrazolin-CH), 5,78 (s, 1H, -OH), 7,02 (dd, 2H, J = 7,5, 10,5, H-5,6-benzimidazole), 7,35

(m, 4H, phe), 7,78 (m, 4H, phe), 7,98 (d, 2H, J = 7,5, H-4,7-benzimidazole), 12,22 (bs, 1H, NH, D2O trao đổi

được). 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ(ppm): 169,71, 160,90, 159,19, 152,43,

141,14, 139,37, 137,57, 130,15, 129,71, 128,16, 128,23, 127,65, 123,21, 120,64, 50,41, 41,61,

32,50. IR (KBr) (cm-1 ): 3318 (NH str), 3010 (CH2 str), 1685 (C=O str), 1684, 1679 (C=N str); ESI

MS (m/z): 414 (M+ ); Hậu môn. Tính toán: C, 69,55; H, 4,62; N, 13,52 ; Đã tìm thấy: C, 69,58; H, 4,67;

N, 13,54.

2.3. Xét nghiệm hoạt động chống ung thư

Tất cả các hợp chất mục tiêu được xác định dựa trên MCF-7 (dòng tế bào ung thư vú), HaCaT

(da người), MDA-MB231 (ung thư biểu mô tuyến vú), HepG2 (ung thư biểu mô tế bào gan)

và A549 (ung thư biểu mô phổi ở người). Các tế bào tăng trưởng theo cấp số nhân được gieo vào các đĩa 96 giếng

với nồng độ 3 x 103 tế bào mỗi giếng. Sau 24h ủ ở 37 0C, môi trường nuôi cấy

được loại bỏ và thay thế bằng môi trường mới chứa các hợp chất ứng cử viên ở các dạng khác nhau

nồng độ. Các tế bào được ủ thêm 72 giờ nữa. Sau 72h, môi trường mỗi giếng được

hút và thêm 100 µL dung dịch MTT (1 mg/mL) vào môi trường không có huyết thanh. Cái đĩa đã

ủ tiếp trong 4 giờ ở 37 oC. Loại bỏ huyền phù và thêm 100 µL dimethyl
Machine Translated by Google

sulfoxide (DMSO) vào từng giếng và xoay các đĩa để hòa tan các tinh thể màu xanh đậm của

formazan. Độ hấp thụ được đo bằng máy đọc ELISA (Dụng cụ BioTek) ở tốc độ

bước sóng 570 nm. Mỗi nồng độ được phân tích ba lần và thí nghiệm được tiến hành

lặp lại ba lần. Tỷ lệ phần trăm khả năng tồn tại được tính toán dựa trên công thức sau:

% khả năng tồn tại của tế bào = 100 (A-A0)/(At-A0)

Trong đó, A đại diện cho độ hấp thụ của các hợp chất ở bước sóng 570nm và A0 và At đại diện cho 0 phần trăm

khả năng sống của tế bào và khả năng sống của tế bào 100% chỉ được xác định tương ứng trên môi trường.

Nồng độ ức chế trung bình 50% (IC50) được tính toán sau khi vẽ đồ thị liều lượng-

đường cong phản ứng bằng cách sử dụng GraphPad Prism 5 [34].

2.4. Xét nghiệm phosphoryl hóa EGFR trong ống nghiệm

Tế bào KB tăng trưởng theo cấp số nhân (29) (gieo hạt 3x103 tế bào/giếng trong đĩa 96 giếng trong huyết thanh

chứa môi trường trong 72 giờ) và sau đó được bỏ đói với môi trường không có huyết thanh trong 48 giờ. hợp chất

được thêm vào và ủ trong 90 phút trước khi thêm EGF (100 ng/mL) trong 5 phút. Các tế bào

đã bị ly giải và ELISA sandwich được sử dụng để đo tổng mức độ phosphoryl hóa EGFR.

2.5. Xét nghiệm apoptosis tế bào

Các tế bào được gieo hạt ở mức 106 mỗi giếng trong đĩa 6 giếng và ủ trong 18 giờ. Tế bào được xử lý bằng

nồng độ khác nhau của 5a trong 24 giờ và thu hoạch bằng cách sử dụng trypsin. Viên tế bào được rửa sạch

hai lần với PBS và tình trạng chết tế bào/hoại tử tế bào được xác định bằng phương pháp tế bào học dòng chảy sử dụng

bộ dụng cụ Apoptosis V-FITC (SIGMA ALDRICH). Giao thức của xét nghiệm này đã được thông qua theo

hướng dẫn của nhà sản xuất bộ sản phẩm [35].

2.6. Phân tích tế bào tế bào dòng chảy

Tế bào A549 được gieo hạt với mật độ 106 tế bào mỗi giếng trong đĩa 6 giếng và được ủ trong 18 giờ.

Các tế bào được xử lý với nồng độ 5a khác nhau và được ủ thêm trong 24 giờ tiếp theo. Tế bào

được rửa bằng PBS và cố gắng thu hoạch từ đĩa. Sau khi rửa bằng cố định PBS

của các tế bào được thực hiện trong ethanol 70% lạnh băng trong 30 phút. Các tế bào đã được nối lại trong PBS

chứa RNase A trong 10 phút và sau đó thêm 50 µL PI (500ug/mL) để nhuộm DNA tế bào,

quá trình nhuộm màu kéo dài 30 phút ở 4 ° C trong bóng tối. Hàm lượng DNA của các tế bào được nhuộm màu là

được phân tích bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (BD Bioscatics) và định lượng sự phân bố chu trình. Tất cả

thí nghiệm được thực hiện trong hai thời điểm độc lập và dữ liệu đại diện được trình bày ở đây

(Hình 5) [36].
Machine Translated by Google

2.7. Lắp ghép phân tử

Các nghiên cứu gắn phối tử vào túi liên kết với thụ thể tyrosine kinase được thực hiện bằng cách sử dụng

Chương trình Maestro 10.5 (Schrodinger Inc. USA). Enzyme tyrosine kinase là mục tiêu được xác nhận

cho thuốc chống ung thư và cấu trúc tinh thể được tải xuống từ ngân hàng dữ liệu protein (PDB

1M17) [27]. Việc chuẩn bị protein được thực hiện theo ba bước tiền xử lý, xem xét và sửa đổi

và sàng lọc bằng cách sử dụng 'trình hướng dẫn chuẩn bị protein' trong Maestro 10.5. Trong các bước này, nước

các phân tử bị xóa đi và các nguyên tử hydro được thêm vào. Năng lượng của cấu trúc được giảm thiểu

sử dụng trường lực OPLS 2005. Tương tự, các phối tử được điều chế lại bằng trường lực 2005.

Chương trình tạo lưới thụ thể được chạy bằng cách nhấp vào bất kỳ nguyên tử nào của phối tử và hộp mặc định

đã được chuẩn bị. Phối tử được gắn vào lưới được tạo ra từ protein bằng cách sử dụng thêm

độ chính xác (XP). Kết quả được đánh giá bằng điểm trượt (điểm lắp ghép) cao hơn điểm lắp ghép

điểm nhiều hơn là ái lực ràng buộc [37].

2.8. Năng lượng liên kết tự do MM-GBSA

Diện tích bề mặt sinh ra tổng quát hóa cơ học phân tử chính (MM-GBSA) được tính bằng cách sử dụng

Nhạc trưởng 10.5. Nó là một công cụ để tính toán năng lượng liên kết phối tử. Một tập hợp các phối tử cùng với các đồng

tinh thể đã được sử dụng để chống lại thụ thể EGFR (PDB1M17). Chuẩn bị protein và phối tử

việc chuẩn bị được thực hiện từ các phương pháp được mô tả ở trên. Ngoài ra, kết quả MM-GBSA

có thể được mua để chạy chương trình MM-GBSA trực tiếp từ tệp được tạo bằng cách chạy

giao thức lắp ghép. Điểm lắp ghép, năng lượng tự do liên kết và liên kết hydro và pi–pi

sự tương tác được hình thành với các axit amin xung quanh được sử dụng để hình dung ái lực liên kết của chúng

và sự liên kết thích hợp của các hợp chất này tại vị trí hoạt động của NF-κB-DNA. Người mẫu

chức năng tính điểm chủ yếu được xác định bởi năng lượng coulomb-vdW của phối tử protein [39-40].

2.9. Nghiên cứu độc tính

2.9.1 Động vật và cách điều trị

Các hợp chất có hoạt tính chống ung thư tốt trên dòng tế bào ung thư 5a đã được chọn

đối với độc tính cấp tính (liều gây chết người) là một trong những yêu cầu cơ bản trong việc xác định liệu pháp điều trị

liều lượng trong phát triển thuốc [29]. Các cuộc điều tra được tiến hành trên chuột bạch tạng cái của (110-

115 gam). Những con chuột bạch tạng cái được nuôi trong điều kiện tiêu chuẩn ở nhiệt độ môi trường xung quanh là

25 ± 2 oC và được phép tự do tiếp cận thực phẩm và nước uống trừ khi chúng được mang ra khỏi

cái lồng. Chuột được phép thích nghi với điều kiện phòng thí nghiệm trong 7 ngày trước khi dùng thuốc. Tất cả

các hợp chất được hòa tan trong DMSO và được cung cấp bằng ống dẫn với thể tích cố định 0,5 mL/
Machine Translated by Google

chuột. Các con vật được chia ngẫu nhiên thành ba nhóm, mỗi nhóm năm con chuột. Hai nhóm được sử dụng

đối với các phương pháp điều trị liều duy nhất của hợp chất 5a ở mức 500 mg/kg trọng lượng cơ thể và một liều được dùng làm đối chứng

(0,5 mL DMSO/chuột). Sau đó tỷ lệ tử vong của chuột được điều trị được ghi nhận sau 24 giờ. Tất cả các thử nghiệm

các quy trình được thực hiện với sự cho phép của ủy ban Đạo đức Động vật Thể chế

(IAEC), mẫu số. 1199. Động vật được lấy từ Cơ sở Nhà Động vật Trung tâm, Hamdard

Đại học, New Delhi-62. Số đăng ký. và ngày đăng ký là 173/CPCSEA và ngày 28 tháng 1,

2000.

2.9.2 Nghiên cứu bệnh cơ tim và nghiên cứu độc tính trên gan

Độc tính trên tim là một tác dụng phụ nghiêm trọng của thuốc dùng để điều trị bệnh nhân ung thư. Độc tính trên tim có thể

được gây ra bởi các chất ức chế tyrosine kinase imatinib mesylate, dasatinib, nilotinib, sunitinib,

sorafenib và lapatinib, trong khi gefitinib và erlotinib không liên quan đến tác dụng độc hại trên

tim [30]. Mặc dù những loại thuốc này có liên quan đến các biến cố bất lợi về tim (ví dụ rối loạn chức năng LV

[LVD], HF, thiếu máu cơ tim và nhồi máu cơ tim), vẫn được cấp phép vì

các lựa chọn điều trị hạn chế và cần đạt được hiệu quả chống ung thư [31]. Vì thế, nhất

các hợp chất mạnh 5a đã được thử nghiệm thêm về độc tính của nó ở chuột (tim) và doxorubicin được sử dụng làm chất

thuốc chuẩn. Động vật được chia thành bốn nhóm; nhóm I và II được điều trị bằng đường uống

thuốc 5a (mỗi loại 500 mg/kg thể trọng). Nhóm III được điều trị bằng đường uống với liều (mg/kg cơ thể

trọng lượng) của thuốc doxorubicin tiêu chuẩn trong khi đó, nhóm IV đóng vai trò là nhóm đối chứng được dùng với

một liều dung dịch DMSO. Các con vật được quan sát trong thời gian 14 ngày. Đúng ngày

14 con vật bị hiến tế và tim được lấy ra và bảo quản trong 40% formalin.

Phần được cắt ngang và nhuộm bằng hematoxylin và eosin trước khi quan sát

dưới kính hiển vi Olympus ở độ phóng đại 100X và 400X [32].

Đối với men gan, các loại thuốc hoạt tính được dùng cho mỗi con vật với một liều duy nhất.

xử lý hợp chất 5a ở liều 500 mg/kg thể trọng. Sau khoảng thời gian quy định là 2 tuần,

Mỗi con vật được gây mê bằng ether gây mê và máu được lấy từ gan đến

đánh giá các thông số sinh hóa như SGOT, SGPT theo phương pháp đã báo cáo [38].

Thuốc ức chế tyrosine kinase gây tổn thương gan và nhiễm độc gan với tần suất và tỷ lệ khác nhau.

mức độ nghiêm trọng do thuốc.

3. Kết quả và thảo luận

3.1. Hoá học

Các con đường tổng hợp các hợp chất trong tiêu đề (5a-l) được nêu trong Sơ đồ 1. Để tổng hợp

các chalcone khác nhau (3a-l) benzaldehyde (2a-d) và acetophenones (1a-d) được thế là
Machine Translated by Google

được chọn lọc và khuấy trong etanol tuyệt đối và NaOH 30%. Các hợp chất cuối cùng (5a-l) dễ dàng được

được tổng hợp từ chất trung gian đã chuẩn bị sẵn (4) [26] với các hợp chất (3a-l) trong điều kiện hồi lưu

trong etanol tuyệt đối.

Để tổng hợp được các hợp chất nêu trên (5a-l), phản ứng của các hợp chất (3a-l) với

chất trung gian (4) được thực hiện trong các dung môi khác nhau (metanol với 10% hydrochloric đậm đặc

axit, anisol, DMF khô) để giảm thời gian phản ứng có hiệu quả. Hồi lưu bằng metanol trong

sự hiện diện của axit clohydric dẫn đến sự phân hủy các hợp chất cuối cùng, trong khi ở

anisole một trong những chất phản ứng không hòa tan ngay cả khi đun nóng. Người ta nhận thấy rằng khi hồi lưu

bằng DMF khô, phản ứng không hoàn toàn thậm chí được đun nóng ở 1500C trong hơn 48 giờ.

Các dải FT-IR tại 3300, 2989 và 1690-1685 cm-1 khẳng định sự có mặt của -NH, -CH2, -

Chức năng C=N tương ứng của hợp chất mạnh nhất 5a. Phổ 1H NMR

cho thấy singlet ở δ3,55 và multit ở δ7,22-7,87 đã xác nhận proton methylene và

Các proton thơm của benzimidazole trong khi nhóm đơn rộng ở δ12,22 xác nhận NH của benzimidazole

vòng proton. Hơn nữa, các đỉnh cặp đôi đặc tính pyrazoline được tìm thấy ở δ3,09 và

3,81 của pyrazoline-CH2, trong khi đó quan sát thấy đỉnh kép ở δ4,82 đối với pyrazoline-CH

đỉnh cao. Cấu trúc và độ tinh khiết của các hợp chất cuối cùng được xác nhận trên cơ sở phổ

và phân tích nguyên tố và dữ liệu nằm trong khoảng ± 0,4% giá trị lý thuyết.

3.2. Xét nghiệm phosphoryl hóa EGFR trong ống nghiệm

Lấy Geftinib làm hợp chất đối chiếu [29, 41], các hợp chất tổng hợp được (5a-l) là

được đánh giá cho xét nghiệm EGFR kinase. Kết quả cho thấy các hợp chất có p-chloro phenyl gắn vào cả vị

trí thứ 3 và thứ 5 của vòng pyrazolin 5a (IC50 = 0,97µM)

là chất ức chế mạnh nhất, tiếp theo là hợp chất 5d (IC50 = 1,7µM), có vị trí thứ 3 là p-OCH3 và p- Cl

phenyl và vị trí thứ 5 của vòng pyrazolin. Các hợp chất còn lại cho thấy

hoạt động ức chế trong khoảng từ 6,5 đến 41,0 µM (Bảng 1).

3.3. Độc tính tế bào trong ống nghiệm

Đánh giá dược lý của các hợp chất in vitro được xác định bằng phương pháp xét nghiệm MTT

[34, 42] chống lại 5 dòng tế bào ung thư MCF7 (vú), HaCaT (da người), MDA-MB231

(vú) HepG2 (gan) và A549 (phổi) cho thấy hoạt động chống khối u cao. Các giá trị IC50 là

báo cáo ở Bảng 1. Về hoạt tính chống lại các dòng tế bào ung thư vú (MCF-7), hợp chất 5a (p-Cl-phenyl gắn

ở cả vị trí thứ 3 và thứ 5 của vòng pyrazoline) là hoạt chất có hoạt tính mạnh nhất với giá trị IC50 là

9,6 µM, tiếp theo là hợp chất 5d (p-OCH3 và p-Cl phenyl ở vị trí thứ 3

và vị trí thứ 5 của pyrazolin) và 5c (p-Cl và pF phenyl ở vị trí thứ 3 và thứ 5 của
Machine Translated by Google

pyrazolin) có giá trị IC50 là 15,5 và 19,4 µM. Các hợp chất còn lại có tác dụng ức chế

hoạt độ trong khoảng 35,7-50,7 µM theo thứ tự 5b> 5e> 5j> 5k> 5i. Hoa văn tương tự

tiếp theo là dòng tế bào ung thư vú khác MDA-MB231 với hợp chất 5a và 5d với IC50

giá trị 11,9 và 15,2µM. trong khi các phần còn lại tuân theo thứ tự 5b, 5c, 5j và 5e. Một số

các hợp chất cũng cho thấy hoạt động mạnh mẽ chống lại ung thư phổi không nhỏ (A549). Trong số đó

hợp chất có 5a là hợp chất mạnh nhất (IC50 = 2,2 µM), trong khi hoạt tính chống ung thư của các hợp chất khác

các hợp chất theo thứ tự 5d > 5b > 5c > 5j > 5e có khoảng giá trị IC50 (2,8-34,1µM). Hoạt động

chống lại các dòng tế bào HaCaT cho thấy hợp chất 5c có hiệu quả nhất với giá trị IC50 là

25,7µM, trong khi các hợp chất khác trong dãy ít quan trọng hơn. Ung thư gan người HepG2

dòng tế bào được cho là ít nhạy cảm hơn với các hợp chất tổng hợp ngoại trừ hợp chất 5c

và 5b thể hiện sự ức chế với giá trị IC50 là 31,5 và 35,4 µM.

Các nghiên cứu chống ung thư trên các hợp chất tổng hợp từ Sơ đồ 1 đã tiết lộ cấu trúc-

mối quan hệ hoạt động mà bản chất của nhóm thế trên vòng phenyl gắn với C-5 và C-3

vị trí của vòng pyrazoline ảnh hưởng đến hoạt động. Kết quả từ Bảng 1 của

các hợp chất 5a, 5b, 5c và 5d cho thấy hoạt tính gây độc tế bào từ trung bình đến tốt đối với A549 (phổi

dòng tế bào ung thư). Điều đáng nói là sự ức chế đáng kể nhất được thể hiện bởi hợp chất

(5a) chống lại dòng tế bào ung thư A549 có IC50 = 2,2µM. Sự gia tăng hoạt động chủ yếu là

được quy cho nhóm chloro ở vị trí para của nhóm phenyl gắn ở C-3 và C-5

vị trí của vòng pyrazolin Ngoại trừ hợp chất 5d (p-methoxyphenyl gắn ở vị trí C-3 của

vòng pyrazoline), tất cả các hợp chất hoạt động khác (5a, 5b và 5c) đều có sự thay thế para chloro ở C-3

chức vụ. Hợp chất có vòng p-methoxyphenyl ở vị trí C-3 cùng với p-chloro phenyl ở

Vị trí C-5 của pyrazoline (5d) cho thấy tác dụng chống ung thư đáng kể đối với tế bào ung thư A549

vạch (IC50 = 2,8µM), trong khi đó sự mất hoạt tính được thấy khi nhóm không phải là clo

gắn với phenyl ở vị trí C-5 của pyrazolin. Các kết quả tiếp theo cho thấy rằng trên

thay thế nhóm clo ở vị trí p của vòng phenyl gắn ở vị trí C-5

vòng pyrazoline có nguyên tử bromo hoặc fluoro làm giảm tác dụng chống ung thư đối với ung thư A549

dòng tế bào nhưng không mở rộng quá nhiều như với nhóm không phải là p-chlorophenyl gắn ở C-3

vị trí của vòng pyrazolin Hơn nữa p-chlorophenyl gắn ở vị trí C-5 của

vòng pyrazoline có tác dụng chống ung thư tốt.

Nhìn chung, người ta quan sát thấy nguyên tử clo giàu electron ở vị trí para của vòng aryl ở C-5

và vị trí C-3 của pyrazoline cho thấy hoạt tính chống ung thư tốt hơn so với các vị trí khác

các nhóm.
Machine Translated by Google

3.4. Tế bào chết theo chương trình

Hợp chất 5a được chọn đã thể hiện hoạt tính phổ rộng chống lại tế bào ung thư đã chọn

và có tác dụng mạnh nhất chống lại A549, việc điều tra thêm về

cơ chế hoạt động. Để đánh giá xét nghiệm apoptosis, phương pháp tế bào học dòng chảy sử dụng propidium iodide

(PI) và phụ lục-V-FITC trong các ô A549 đã được thực hiện [35, 43]. Sau khi điều trị bằng

hợp chất 5a đồng nhất. ở mức 5 µM và 10 µM trong 24 giờ, các tế bào được dán nhãn bằng hai loại thuốc nhuộm. Các

huỳnh quang màu đỏ (PI) và màu xanh lá cây (FITC) tương ứng đã được quan sát bằng phương pháp tế bào học dòng chảy.

Tỷ lệ apoptosis tế bào muộn/thứ phát tăng từ 3,86% (kiểm soát DMSO) lên 20,4

và tăng nhẹ tỷ lệ apoptosis sớm/ban đầu tức là 1,87% (kiểm soát DMSO) đến 2,6% ở một liều

mức 5µM, tương tự khi tăng liều lên 10µM thì cả hai đều tăng tương ứng.

apoptosis muộn/thứ phát (20,4% đến 22,7%) và apoptosis sớm/nguyên phát (2,6% đến 15,5%). Các

kết quả giải thích hợp chất 5a hoạt động thông qua cơ chế apoptosis (Hình 4).

3.5. Ức chế chu kỳ tế bào

Để hiểu được tác dụng của hợp chất 5a được chọn trong chu kỳ tế bào, phân tích FACS được thực hiện

thực hiện [36, 44]. Tế bào A549 được xử lý bằng hợp chất 5a ở nồng độ 5 µM

và 10µM trong 24 giờ. Kết quả xác nhận rằng 25,3% và 39,2% tế bào tích lũy trong

Pha G2/M (bắt giữ G2/M ) của hợp chất 5a ở mức đồng nhất. là 5µM và 10µM so với đối chứng

16,43%. Rõ ràng là sự gia tăng về tỷ lệ bắt giữ chu kỳ tế bào đối với

hợp chất 5d thể hiện kiểu bắt giữ G2/M (Hình 5).

3.6. Lắp ghép phân tử

Chế độ liên kết của hợp chất 5a đã được nghiên cứu thông qua nghiên cứu lắp ghép bằng Schrodinger

chương trình Maestro 10.5. Để xác nhận, protein được gắn lại với chất đồng kết tinh

phối tử erlotinib. Các hợp chất mạnh được gắn vào vị trí hoạt động của vùng kinase của

Miền EGFR kinase (PDB 1M17) [27]. Miền kinase hoặc xúc tác bao gồm N-

thùy tận cùng, chủ yếu bao gồm các sợi β nhưng chứa một chuỗi xoắn α và chuỗi xoắn C. C-

thùy cuối chủ yếu là xoắn ốc và một sợi ngắn gọi là vùng bản lề nối hai phần

thùy [28]. Các dẫn xuất pyrazole mang benzimidazole được định vị tốt trong ATP

túi. Hai liên kết hydro được quan sát thấy giữa N9 của benzimidazole và C=O với

Met769 và các liên kết hydro khác được quan sát thấy giữa C=O với Thr830, Thr766. MỘT

liên kết hydro qua trung gian nước bổ sung đã được quan sát thấy với C=O của các hợp chất tương tự

như erlotinib. Một tương tác kỵ nước chặt chẽ đã được tìm thấy giữa các nhóm phenyl gắn ở vị trí thứ 3
Machine Translated by Google

và vị trí thứ 5 của pyrazoline với Phe699 và Lys721. Những tương tác này nhấn mạnh

tầm quan trọng của nitơ của vòng benzimidazole và nhóm C=O đối với khả năng ức chế và liên kết

hiệu quả của enzyme EGFR. Phần oxadiazole nằm trong túi kỵ nước sâu và nằm trong

cùng vị trí của vòng quinazoline của erlotinib. Hình 6 & 7 (trái) cung cấp thông tin chi tiết về phân tích

lắp ghép của hợp chất 5a và erlotinib. Dư lượng trong phạm vi 2,8 Å diện tích erlotinib và

Pyrazoline liên kết với benzimidazole (5a) được thể hiện trong Hình 6 & 7. Hình 8 thể hiện

hợp chất (5a) liên kết cùng với phối tử erlotinib bên trong protein (3D, trái) và (phải) bằng

tạo bề mặt.

Do đó, các kết quả lắp ghép này chứng minh rằng N9 của benzimidazole tương tác với Met769

axit amin biểu thị chất ức chế EGFR kinase mạnh nhất trong số các hợp chất này với

điểm trượt -7,1064 (5a).

3.7. Năng lượng liên kết tự do MM-GBSA

Phối tử và protein được điều chế từ các phương pháp mô tả và tất cả các phân tử nước

sẽ bị xóa trước khi chạy MM-GBSA prime. Tính toán năng lượng liên kết tự do bằng cách sử dụng

model Prime MMGBSA DG liên kết từ Maestro 10.5. Căn chỉnh phối tử linh hoạt có thể được chạy cho

hợp chất tổng hợp được sẽ đạt kết quả tốt hơn. Kết quả năng lượng tự do từ Bảng. 3 cho thấy

rằng tất cả các hợp chất đều phù hợp với thụ thể protein của miền kinase của EGFR (PDB 1M17),

tốt nhất trong số đó là các hợp chất có cấu trúc thuận lợi hơn và được chứng minh

liên kết DG cao nhất (kcal/mol). Năng lượng liên kết nằm trong khoảng -35,319 đến -34,349

Kcal/mol. Năng lượng liên kết của đồng tinh thể được tìm thấy là -30,959, thấp hơn năng lượng

hợp chất tổng hợp mạnh 5a (-34,581).

3.8. Độc tính cấp tính qua đường miệng

Hợp chất 5a được phát hiện là không độc ở liều thông thường và được động vật dung nạp tốt

lên tới 300 mg/kg. Hơn nữa, kết quả cho thấy chuột không bị chết khi hợp chất 5a được

được điều trị với liều cao nhất là 500 mg/kg thể trọng, điều này cho thấy mức độ an toàn rộng hơn

lề. Do đó, liều gây chết người (LD50) của các hợp chất được thử nghiệm là >500 mg/kg trọng lượng cơ thể. Nó là

do đó kết luận rằng các hợp chất 5a được thử nghiệm được phân loại là độc tính qua đường miệng LD50 (>500 <2000

mg/kg) được Tổ chức Hợp tác và Phát triển Kinh tế khuyến nghị

[29].
Machine Translated by Google

3.9 Nghiên cứu về bệnh cơ tim và nhiễm độc gan

Việc trượt các hợp chất được xử lý 5a cho thấy cấu trúc bình thường của myofibril trong phần phụ

vùng nội mô và cấu trúc sợi cơ được duy trì tốt. Không có sự khác biệt đáng kể

về cấu trúc sợi tim so với nhóm đối chứng bình thường. Trong khi nhóm điều trị

với các hợp chất tổng hợp này có cấu trúc tương tự của sợi cơ so với

nhóm được điều trị bằng doxorubicin (DOX) như trong Hình 9. Nhóm kiểm soát DOX gây ra

bệnh cơ tim, biểu hiện bằng tình trạng mất sợi cơ tim, tạo không bào, viêm mô tâm thất trái.

Độc tính trên gan do thuốc gây ra làm tăng đáng kể nồng độ SGOT và SGPT. mạnh mẽ

hợp chất 5a khi được nghiên cứu về tác dụng gây độc cho gan cho thấy có thể so sánh được (p < 0,01)

các thông số sinh hóa (SGPT và SGOT) so với đối chứng (Bảng 2). doxorubicin

động vật được điều trị cho thấy mức SGOT và SGPT tăng đáng kể (p < 0,01) so với

kiểm soát [33]

4. Kết luận

Tóm lại, một loạt dẫn xuất của benzimidazole (5a-l) đã được tổng hợp, đưa ra

pyrazole ở vị trí C-2 bằng vòng aryl được thế ở vị trí C-3 và C-5 của pyrazole cho

nhằm vào các hoạt động chống ung thư mạnh mẽ của họ. Các hợp chất cho kết quả khi kiểm tra EGFR của chúng

ái lực liên kết cho thấy hợp chất 5a ức chế EGFR ở mức 0,97 µM. Tính độc tế bào của

các hợp chất mới được tổng hợp đã bộc lộ đặc tính chống ung thư mạnh, đặc biệt là hợp chất 5a

chống lại các dòng tế bào ung thư A549 (phổi) có phạm vi IC50 bằng 2,2 µM. Hơn nữa

hợp chất 5a dẫn đến việc dừng chu kỳ tế bào ở pha G2/M bằng cách gây ra apoptosis. Hợp chất cũng vượt qua

xét nghiệm bệnh cơ tim không có dấu hiệu viêm hoặc hoại tử như thuốc

doxorubicin. Nghiên cứu lắp ghép phân tử cho thấy khả năng của hợp chất phù hợp với hoạt chất

trang web có năng lượng liên kết tốt nhất trong số các chuỗi. Điều đáng nói là benzimidazole

các dẫn xuất pyrazole thích đóng vai trò là khuôn mẫu hữu ích cho sự phát triển hơn nữa của

chất chống ung thư.

Sự nhìn nhận

Chúng tôi rất biết ơn Jamia Hamdard (Đại học Hamdard) đã cung cấp cơ sở vật chất cho phòng thí nghiệm. Một

của tác giả (Md. Jawaid Akhtar IF-130481) gửi lời cảm ơn tới Sở Khoa học và

Technology (DST) New Delhi, Ấn Độ cho học bổng INSPIRE.

Machine Translated by Google

Người giới thiệu

1. MA Abdelgawad, RB Bakr, OA Alkhoja, WR Mohamed, Thiết kế, tổng hợp và hoạt động chống ung thư

của các dẫn xuất pyrazolo[3,4-d]pyrimidine mới như chất ức chế EGFR-TK, Bioorg. Chem. 66 (2016)

88–96.

2. B. Barlaam, J. Anderton, P. Ballard và cộng sự, Khám phá AZD8931, một chất ức chế tín hiệu đẳng

thế, có thể đảo ngược của các thụ thể EGFR, HER2 và HER3, ACS Med.

Chem. Lett. 4 (2013) 742-746.

3. S. Yin, C. Tang, B. Wang, Y. Zhang, L. Zhou, L. Xue, C. Zhang, Thiết kế, tổng hợp và đánh giá

sinh học các chất ức chế kép EGFR/HER2 mới mang oxazolo[4,5 -

g]quinazolin-2(1H)-one, Eur. J. Med. Chem. 120 (2016) 26-36.

4. H. Zhang, F. Gong, C. Li, C. Zhang, Y. Wang, Y. Xu, L. Sun, Thiết kế và khám phá 4-

dẫn xuất anilinoquinazoline-acylamino như chất ức chế TK kép EGFR và VEGFR-2,

Euro. J. Med. Chem. 109 (2016) 371-379.

5. Y. Tu, Y. OuYang, S. Xu, Y. Zhu, G. Li, C. Sun, P. Zheng, W. Zhu, Nghiên cứu thiết kế, tổng

hợp và lắp ghép các chất tương tự afatinib mang nửa cinnamamide là EGFR mạnh chất ức chế,

Bioorg. Med. Chem. 24 (2016) 1495–1503.

6. X. Tao, Y. Duan, L. Chen, D. Tang, M. Yang, P. Wang, C. Xu, H. Zhu, Thiết kế, tổng hợp và đánh

giá sinh học các dẫn xuất pyrazolylnitroimidazole tiềm năng EGFR/HER-2 chất ức chế kinase,

Bioorg. Med. Chem. Lett. 26, (2016).677–683.

7. AE Wakeling, SP Guy, JR Woodburn, SE Ashton, BJ Curry, AJ Barker, KH Gibson,

ZD1839 (Iressa): Một chất ức chế hoạt động bằng đường uống của tín hiệu yếu tố tăng trưởng

biểu bì có tiềm năng điều trị ung thư, Can. Res. 62 (2002) 5749–
5754.

8. Nhóm Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì ở người (HER): cấu trúc và chức năng, Hướng dẫn về các

liệu pháp nhắm mục tiêu: Đột biến EGFR trong NSCLC, Nhà xuất bản Quốc tế Springer Thụy Sĩ

(2014) 1-17.

9. F. Ciardiello, G. Tortora, Thuốc đối kháng EGFR trong điều trị ung thư, N. Engl. J. Med. 358

(2008) 1160-74.

10. Y. Qian, H. Zhang, H. Zhang, C. Xu, J. Zhao, H. Zhu, Tổng hợp, mô hình phân tử và đánh giá

sinh học các dẫn xuất etronidazole của axit cinnamic như tác nhân chống ung thư mới, Bioorg.

Med. Chem. 18 (2010) 4991–4996.

11. X. Qin, Y. Lv, P. Liu, Z. Li, L. Hua, C. Zeng, L. Yang, Novel morpholin-3-one hợp nhất các dẫn

xuất quinazoline làm chất ức chế tyrosine kinase của EGFR, Bioorg. Med. Chem. Lett. 26

(2016) 1571-1575.

12. P. Ballard, RH Bradbury, LFA Hennequin, DM Hickinson, PD Johnson, JG Kettle, T.

Klinowska, R. Morgentin, DJ Ogilviea, A. Olivier, 4-anilinoquinazolines được thay thế 5 là

chất ức chế mạnh, chọn lọc và hoạt động bằng đường uống của thụ thể erbB2 tyrosine kinase, Bioorg.

Med. Chem. Lett. 15 (2005) 4226–

4229.

13. L. Chen, C. Chang, DB Salunke, Tổng hợp khác nhau của chú thích không đối xứng

Thư viện hợp chất lưỡng vòng: benzodiazepin/ Benzimidazol Đã liên kết Indolo-

quinoxaline, ACS. Cái lược. Khoa học. 13 (2011) 391–

398.
Machine Translated by Google

14. A. Kamal, PP Kumar, K. Sreekanth, Tổng hợp pyrrolo mới liên kết với benzimidazole[2,1-

c[1,4]benzodiazepine liên hợp với ái lực gắn kết DNA hiệu quả và có khả năng gây độc tế bào mạnh,

Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 2594–

2598.

15. K. Shao, X. Zhang, P. Chen, Tổng hợp và đánh giá sinh học các giống lai pyrimidine-benzimidazol mới như tác nhân

chống ung thư tiềm năng, Bioorg. Med. Chem. Lett. 24 (2014) 3877-3881.

16. S. Huber, JP Huettner, K. Hacker, G. Bernhardt, J. König, A. Buschauer, Este của Bendamustine là

những tác nhân gây độc tế bào mạnh hơn nhiều so với hợp chất gốc chống lại tế bào Sarcoma và ung

thư biểu mô ở người. 10 (2015) 1-21.

17. KK Ciombor, T. Bekaii-Saab, Selumetinib trong điều trị ung thư. Chuyên gia. Ý kiến.

Điều tra. Thuốc. 24 (2015) 111-123.

18. WL Chang, CS Chang, PC Chiang, YF Ho, JF Liu, KW Chang, JH Guh, 2-Phenyl-5-(pyrrolidin-1-

yl)-1-(3,4,5-trimethoxybenzyl)-1H-benzimidazole, dẫn xuất, ức chế sự một loại thuốc benzimidazole

phát triển của tế bào ung thư tuyến tiền liệt ở người bằng cách ảnh hưởng đến tubulin và c-

jun N-terminal kinase , Anh. J. Dược phẩm. 160 (2010) 1677-1689.

19. M. Singh, V. Tandon, Tổng hợp và hoạt động sinh học của các chất ức chế mới của topoisomerase I:

2-Aryl-substituted 2-bis-1H-benzimidazoles, Eur. J. Med. Chem. 46

(2011) 659-669.

20. P. Puthiyapurayil, B. Poojary, C. Chikkanna, SK Buridipad, Thiết kế, tổng hợp và đánh giá sinh

học của loạt 1,3,4-oxadiazole mới mang N-methyl-4-

(triflometyl) gốc phenyl pyrazol làm tác nhân gây độc tế bào, Eur. J. Med. Chem. 53

(2012) 203-210.

21. KM Amin, AAM Eissa, SM Abou-Seri, FM Awadallah, GS Hassan, Tổng hợp và đánh giá sinh học các

giống lai coumarin-pyrazoline mới có chứa phenylsulfonyl làm chất chống ung thư, Eur. J. Med.

Chem. 60 (2013) 187-198.

22. JL Liao, Nhận dạng phân tử của protein Túi liên kết Kinase để thiết kế các chất ức chế Kinase

mạnh và chọn lọc, J. Med. Chem. 50 (2007) 409-424.

23. RB Bakr, EKA Abdelall, MK Abdel-Hamid, MM Kandeel, Thiết kế và tổng hợp các chất ức chế EGFR-

tyrosine kinase chứa lõi pyrazolo[3,4-d]Pyrimidine làm chất chống ung thư, Bull. Dược phẩm. Khoa

học. Assiut. Trường đại học. 35 (2012) 27-42.

24. M. Breccia, G. Alimena, Sự xuất hiện và quản lý hiện tại các tác dụng phụ ở bệnh nhân mắc bệnh

bạch cầu dòng tủy mãn tính được điều trị tuyến đầu bằng thuốc ức chế tyrosine kinase, Leuk. Res. 37

(2013) 713-720.

25. PA Harvey, LA Leinwand, Phytoestrogen trong chế độ ăn uống có trong đậu nành làm tăng đáng kể

tình trạng nhiễm độc tim ở chuột đực được dùng chất ức chế tyrosine kinase hóa trị liệu, Mol.

Tế bào. Nội tiết. 399 (2015) 330-335.

26. MJ Akhtar, AA Khan, Z. Ali, RP Dewangan, AA,Siddiqui S. Pasha, MS Yar, Thiết kế, tổng hợp, lắp ghép và nghiên cứu

QSAR về oxadiazole được liên kết với benzimidazole được thay thế làm tác nhân gây độc tế bào, chất ức chế thụ thể

EGFR và erbB2, Eur. J. Med. Chem. 126 (2017) 853-869.

Machine Translated by Google

27. J. Stamos, MX Sliwkowski, Cấu trúc của miền kinase của yếu tố tăng trưởng biểu bì đơn độc và phức

tạp với chất ức chế 4-anilinoquinazoline, J. Biol. Chem. 277

(2002) 46265-46272.

28. J. Lin, W. Shen, J. Xue, J. Sun, X. Zhang, C. Zhang, Novel oxazolo[4,5-g]quinazolin -2(1H)-ones:

Chất ức chế kép EGFR và Src protein tyrosine kinase, Eur. J. Med.

Chem. 55 (2012) 39-48.

29. DM Hickinson, T. Klinowska, G. Speake và cộng sự. AZD8931, một chất ức chế tín hiệu mạnh, có thể

đảo ngược của thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì, ERBB2 (HER2) và ERBB3: Một tác nhân duy nhất để

phong tỏa đồng thời thụ thể ERBB trong bệnh ung thư. Phòng khám.

Bệnh ung thư. Res. 16 (2010) 1159-1169.

30. GS Orphanos, GN Ioannidis, AG Ardavanis, Độc tính trên tim do thuốc ức chế tyrosine kinase, Acta.

Oncol. 48 (2009) 964-970.

31. HR Mellor, AR Bell, JP Valentin, RR Roberts, Độc tính trên tim liên quan đến

Nhắm mục tiêu các con đường Kinase trong bệnh ung thư, Toxicol. Khoa học. 120 (2011) 14–32.

32. M. Rashid, A. Husain, M. Shaharyar, R. Mishra, A. Hussain, O. Afzal, Thiết kế và

tổng hợp các phân tử pyrimidine có thiazolidin-4-one làm chất chống ung thư mới, Eur. J. Med.

Chem. 83 (2014) 630-645.

33. CF Spraggs, CF Xu, CM Hunt, Đặc điểm di truyền để cải thiện việc giải thích và quản lý lâm sàng

tình trạng nhiễm độc gan do thuốc ức chế Tyrosine Kinase gây ra,

Dược động học. 14 (2013) 541-554.

34. Y. Duan, Y. Ma, E. Zhang, Thiết kế và tổng hợp các giống lai 1,2,3-triazole-dithiocarbamate mới

làm tác nhân chống ung thư tiềm năng, Eur. J. Med. Chem. 62 (2013) 19-11.

35. Y. Duan, Y. Zheng, X. Li, Nghiên cứu thiết kế, tổng hợp và hoạt động chống tăng sinh của các giống

lai 1,2,3-triazole-dithiocarbamate-urea mới, Eur. J. Med. Chem. 64 (2013) 99-110.

36. L. Racané, KS Paveli, R. Nhili và cộng sự. Hoạt chất chống ung thư mới và chọn lọc phenylene-

bisbenzothiazoles: Tổng hợp, đánh giá khả năng chống đông máu và liên kết DNA. Euro. J. Med.

Chem. 63 (2013) 882-891.

37. MN Noolvi, HM Patel, M. Kaur, Benzothiazoles: Tìm kiếm tác nhân chống ung thư, Eur. J.

Med. Chem. 54 (2012) 447-462.

38. JT Litchfield, FA Wilcoxon, Phương pháp đánh giá thí nghiệm hiệu ứng liều lượng đơn

giản, J. Pharmacol. Exp. Đó. 96 (1949) 99–

113.

39. N. Siddiqui, MS Alam, R. Ali, MS Yar, O. Alam, Tổng hợp các giống lai benzimidazole và

phenylhydrazinecarbothiomide mới và hoạt tính chống co giật của chúng, Med. Chem.

Res. 25 (2016) 1390-1402.

40. https://www.schrodinger.com/science-articles/docking-and-scoring

41. KM Amin, FF Barsoum, FM Awadallah, NE Mohamed, Xác định các dẫn xuất phthalazine mạnh mới có hoạt

tính ức chế VEGFR-2 và EGFR kinase, Eur. J. Med.

Chem. 123 (2016) 191-201.

42. S. Yin, C. Tang, B. Wang, Y. Zhang, L. Zhou, L. Xue, C. Zhang, Thiết kế, tổng hợp và đánh giá sinh

học các chất ức chế kép EGFR/HER2 mới mang oxazolo[4,5 -

g]quinazolin-2(1H)-one, Eur. J. Med. Chem. 120 (2016) 26-36.

Machine Translated by Google

43. Kun-Peng Shao, Xu-Yao Zhang, Peng-Ju Chen, Deng-Qi Xue, Peng He, Li-Ying Ma, Jia-Xin
Zheng, Qiu-Rong Zhang, Hong-Min Liu, Tổng hợp và đánh giá sinh học của các giống lai
pyrimidine–
benzimidazol mới được coi là tác nhân chống ung thư tiềm năng. Bioorg. Med.
Chem. Lett. 24 (2014) 3877–
3881.
44. A. Kamal, AB Shaik, S. Polepalli, GB Kumar, VS Reddy, R. Mahesh, S. Garimella, N.
Jain, Tổng hợp các liên hợp benzimidazole liên kết với arylpyrazole như là chất gây
rối loạn vi ống tiềm năng, Bioorg. Med. Chem. 23 (2015) 1082–
1095
Machine Translated by Google

Chú thích sơ đồ

Sơ đồ 1. Tổng hợp các dẫn xuất pyrazole mang Benzimidazole

Chú thích hình ảnh

Hình 1. Các chất ức chế protein kinase có thể đảo ngược và không thể đảo ngược

Hình 2. Báo cáo về benzimidazole và pyrazoline cùng với chất dị vòng khác cho thấy hoạt động chống ung thư

Hình 3. Thiết kế các chất tương tự benzimidazole được đề xuất. Phần được bao bọc trong hình chữ nhật màu đỏ

tạo thành tương tác van der Waals với túi kỵ nước bên ngoài vùng liên kết ATP. Phần màu nước được bao quanh

tạo thành liên kết hydro với vùng bản lề.

Vùng trong vùng nét đứt màu xanh lá cây cho thấy sự tương tác liên kết với vùng dung môi/túi kỵ nước khác.

Nhân vâ t. 4. Hiệu ứng apoptosis trên dòng tế bào ung thư A549 được phát hiện sau nhuộm kép Annexin V-FITC/

PI sau xử lý với hợp chất 5a trong khoảng thời gian 24 giờ với liều 5 µM và 10µM.

Góc phần tư phía dưới bên trái đại diện cho các tế bào sống, góc phần tư phía dưới bên phải dành cho các tế bào

apoptotic sớm/sơ cấp, góc phần tư phía trên bên phải dành cho các tế bào apoptotic muộn/thứ cấp và góc phần tư phía trên

bên trái đại diện cho các tế bào hoại tử.

Hình 5. Hàm lượng DNA bằng phương pháp tế bào học dòng chảy trong dòng tế bào ung thư A549 của hợp chất 5a ở

nồng độ liều 5µM và 10µM trong khoảng thời gian 24 giờ sau khi cố định và nhuộm bằng PI.

Nhân vâ t. 6. Sơ đồ thể hiện sự tương tác giữa hợp chất (5a) (trái) và (erlotinib) (phải) với vùng kinase

của enzyme EGFR (mã PDB 1M17), liên kết hydro được thể hiện bằng đường chấm màu hồng. Hợp chất (5a) (trái)

đang thể hiện sự tương tác liên kết hydro với Met769, Thr766 và tương tác liên kết hydro qua trung gian phân

tử nước giữa nhóm carbonyl và Thr830 tương tự như erlotinib (phải).

Nhân vâ t. 7. Các hình vẽ thể hiện dạng 3D của hợp chất (5a) (trái) và (erlotinib) (phải).

Hình 8. Kiểu liên kết của hợp chất (5a) với (erlotinib) (trái) ở dạng 3D và bằng cách tạo bề mặt trong miền

kinase của EGFR (mã PDB 1M17).

Hình 9. A: Tác dụng của hợp chất 5a thể hiện cấu trúc bình thường của sợi tim. B: Ảnh hiển vi cho thấy tác

dụng kiểm soát bình thường đối với sợi tim (cấu trúc sợi cơ được duy trì tốt) C: Tác dụng của Doxorubicin

cho thấy bệnh cơ tim được thể hiện bằng sự mất sợi tim, tạo không bào và viêm ở mô tâm thất trái.
Machine Translated by Google

Sơ đồ 1. Tổng hợp các dẫn xuất pyrazole mang Benzimidazole

Machine Translated by Google

Hình 1. Các chất ức chế protein kinase có thể đảo ngược và không thể đảo ngược
Machine Translated by Google

Hình 2. Báo cáo về benzimidazole và pyrazoline cùng với chất dị vòng khác cho thấy hoạt động chống ung thư.
Machine Translated by Google

Hình 3. Thiết kế các chất tương tự benzimidazole được đề xuất. Phần được bao bọc trong hình chữ nhật màu đỏ tạo thành van der

Tương tác Waals với túi kỵ nước bên ngoài vùng liên kết ATP. Phần màu nước được bao quanh tạo thành liên kết hydro với vùng

bản lề. Vùng trong vùng nét đứt màu xanh lá cây cho thấy sự tương tác liên kết với vùng dung môi/túi kỵ nước khác.
Machine Translated by Google

Nhân vâ t. 4. Hiệu ứng apoptosis trên dòng tế bào ung thư A549 được phát hiện sau nhuộm kép Annexin V-FITC/PI sau xử lý với hợp chất 5a

trong khoảng thời gian 24 giờ với liều 5 µM và 10µM. Góc phần tư phía dưới bên trái đại diện cho các tế bào sống, góc phần tư phía dưới

bên phải dành cho các tế bào apoptotic sớm/sơ cấp, góc phần tư phía trên bên phải dành cho các tế bào apoptotic muộn/thứ cấp và góc phần

tư phía trên bên trái đại diện cho các tế bào hoại tử.
Machine Translated by Google

Hình 5. Hàm lượng DNA bằng phương pháp tế bào học dòng chảy trong dòng tế bào ung thư A549 của hợp chất 5a ở nồng độ liều 5µM
và 10µM trong khoảng thời gian 24 giờ sau khi cố định và nhuộm bằng PI.
Machine Translated by Google

Nhân vâ t. 6. Sơ đồ thể hiện sự tương tác giữa hợp chất (5a) (trái) và (erlotinib) (phải) với vùng kinase của
enzyme EGFR (mã PDB 1M17), liên kết hydro được thể hiện bằng đường chấm màu hồng. Hợp chất (5a) (trái) đang thể
hiện sự tương tác liên kết hydro với Met769, Thr766 và tương tác liên kết hydro qua trung gian phân tử nước
giữa nhóm carbonyl và Thr830 tương tự như erlotinib (phải).
Machine Translated by Google

Nhân vâ t. 7. Các hình vẽ thể hiện dạng 3D của hợp chất (5a) (trái) và (erlotinib) (phải).
Machine Translated by Google

Hình 8. Kiểu liên kết của hợp chất (5a) với (erlotinib) (trái) ở dạng 3D và bằng cách tạo bề mặt trong miền
kinase của EGFR (mã PDB 1M17).
Machine Translated by Google

Hình 9. A: Tác dụng của hợp chất 5a thể hiện cấu trúc bình thường của sợi tim. B: Ảnh hiển vi cho thấy tác dụng
kiểm soát bình thường đối với sợi tim (cấu trúc sợi cơ được duy trì tốt) C: Tác dụng của Doxorubicin cho thấy
bệnh cơ tim được thể hiện bằng sự mất sợi tim, tạo không bào và viêm ở mô tâm thất trái.
Machine Translated by Google

Bảng 1. Kết quả ức chế của các dẫn xuất pyrazole được liên kết với benzimidazole đối với năm loại

dòng tế bào ung thư ở người và xét nghiệm EGFR kinase in vitro .

Comp. R R'
EGFR MCF7 HaCaT MDA- MB231 Viêm gan G2 A549

5a 4-Cl 4-Cl 0,97 9,6 43,1 11.9 70,9 2.2

5b 4-Cl 4-Br 25,2 35,7 25,7 20.3 35,4 5,7

5c 4-Cl 4-F 29,4 19,4 16.2 20.7 31,5 7.2

1.7 15,5 37,2 15.2 53,1 2,8

5 ngày 4-OCH3 4-Cl

6,5 35,9 36,4 39,7 57,8 34.1

5e 4-OCH3 4-Br

5f 4-OCH3 4-F >100 >100 67,3 >100 51,2 >100

5g 4-CH3 4-Cl >100 >100 39,7 >100 ND 45,0

5 giờ 4-CH3 4-Br 39,7 >100 76,5 >100 ND 88,0

5i 4-CH3 4-F ND 50,7 >100 >100 ND 45,2

5j 4-OH 4-Cl 41,0 41,4 40,4 21.8 65,9 24,7

5k 4-OH 4-Br >100 43,5 39,8 >100 78,2 35,7

5l 4-OH 4-F >100 >100 51,9 >100 78,9 39,8

5-FU ----- 7.12 ----- 5.0 5.0 1.16

Geftinib 0,011

aHoạt tính chống tăng sinh đã được thử nghiệm bằng cách tiếp xúc với các chất trong 72 giờ và được biểu thị bằng nồng độ cần thiết
để ức chế sự tăng sinh tế bào khối u tới 50% (IC50).
b
Xét nghiệm EGFR kinase in vitro bằng cách cho hợp chất thử nghiệm tiếp xúc trong 30 phút và kết quả được biểu thị bằng IC50.
ND = không xác định
Machine Translated by Google

Bảng 2. Ảnh hưởng của hợp chất có hoạt tính mạnh nhất đến nồng độ enzyme transaminase trong chức năng gan

Bài kiểm tra.

hợp chất SGOT ± SEM 68,60 SGPT ± SEM

5a ± 1,96 Kiểm 48,17 ± 1,11
soát 64,52 ± 1,83 47,53 ± 2,12

aLiên quan đến đối chứng và dữ liệu được phân tích bằng ANOVA, sau đó là kiểm định t của Sinh viên cho n = 6 tại **p < 0,01
b
Nhóm đối chứng được điều trị bằng methyl cellulose 0,5% trong 15 ngày.
Machine Translated by Google

Bảng 3. Điểm gắn kết và năng lượng tự do liên kết của tất cả các hợp chất tổng hợp được với
miền kinase của enzyme EGFR (PDB 1M17) (1a-l).

Comp. Điểm lắp ghép Năng lượng tự do liên kếta (Kcal/mol)

5a -7.106 -34.581
5b -6.844 -33.046
5c -6.942 -25.506
5d -6.185 -28.212
5e -6.032 -28.313
-6.028 -34.909
-7.328 -28.097
-7.161 -33.377
-7.379 -34.454
-7.500 -34.977
-6.904 -34.349
-7.346 -35.319

tinh thể 5f 5g 5h 5i 5j 5k -6.437

5l -30.959

aTính toán năng lượng tự do liên kết bằng cách sử dụng liên kết Prime MM-GBSA DG
Machine Translated by Google

Điểm nổi bật

Một loạt các dẫn xuất pyrazole mới liên kết với benzimidazole đã được tổng hợp và mô tả.

Tất cả các hợp chất đã được sàng lọc để thử nghiệm khả năng chống ung thư và ức chế EGFR trong ống nghiệm.

Hợp chất mạnh nhất 5a nổi lên như một ứng cử viên hứa hẹn nhất làm tác nhân chống ung thư chống lại A549.

Các hợp chất 5a cho thấy sự ức chế EGFR; gây ra apoptosis; Bắt giữ chu kỳ tế bào G2/M

Một nghiên cứu chi tiết về lắp ghép và bệnh cơ tim của hợp chất 5a đã được báo cáo.
Machine Translated by Google

Trừu tượng đồ họa