LAKTAT I PIRUVAT

Laktat u krvi potie najveim delom iz miinog tkiva i eritrocita, a metabolizuje se u jetri. Za vreme
fizikog napora, nivo laktata moze da se poveca i za vie od deset puta. Kako u ovom sluaju
paralelno raste i koncentracija piruvata, odnos laktat/piruvat ostaje normalan.
Kod raznih stanja praenih nedostatkom kiseonika u tkivima, usporena je aerobna oksidacija piruvata.
Umesto da se oksiduje do ugljen-dioksida i vode putem ciklusa limunske kiseline, piruvat se redukuje
do laktata, ija koncentracija u krvi zbog toga raste. Povean nivo laktata u krvi esto se javlja u oku,
sranoj dekompenzaciji, hematolokim oboljenjima, insuficijenciji plua. Izraena laktatna acidoza sa
ekstremno visokim vrednostima laktata (i 25 puta veim od normalnih) i poveanim odnosom
laktat/piruvat, javlja se u ireverzibilnom stadijumu oka, dijabetinoj ketoacidozi, kao i u terminalnom
stadijumu raznih oboljenja. Kako se laktat normalno metabolizuje u jetri, njegova koncentracija u krvi
moe da se povea i u sluaju smanjene perfuzije jetre.
Nivo laktata u cerebrospinalnoj tecnosti normalno prati njegov nivo u krvi, a moe da se menja i
nezavisno od koncentracije u krvi kod nekih oboljenja centralnog nervnog sistema, kao to su:
intrakranijalno krvarenje, bakterijski meningitis, cerebrovaskularni insulti, epilepsija i dr.

ODREIVANJE LAKTATA
Pod dejstvom laktat-dehidrogenaze (LDH), laktat se oksiduje u piruvat, pri emu se NAD+ redukuje
do NADH. Koliina nastalog NADH srazmerna je koncentraciji laktata u uzorku, a meri se
spektrofotometrijski na 340 nm:
L-laktat + NAD+ piruvat + NADH + H+
Ravnotea ove reakcije je takva, da je favorizovana redukcija piruvata u laktat. Meutim, uklanjanjem
piruvata reakcijom sa hidrazinom i korisenjem Tris pufera pH 9,0-9,6 postie se da reakcija tee s
leva na desno, u smeru stvaranja piruvata.
Uzorak arterijske ili venske krvi za, odreivanje laktata uzima se nate, a pacijent mora potpuno da
miruje. Vensku krv je najbolje uzeti bez staze, ili neposredno po stavljanju poveske. Krv mora odmah
da se pomea sa rastvorom za deproteinizaciju (metafosforna ili perhlorna kiselina). Ako se laktat
odredjuje u plazmi, potrebno je dodati 10 mg natrijum fluorida i 2 mg kalijum-oksalata na mg krvi,
uzorak odmah ohladiti i odvojiti plazmu najkasnije za 15 min.
Referentne vrednosti:
U potpunom mirovanju:
Venska krv
Arterijska krv
U uobiajenim bolnikim uslovima:
Venska krv
Arterijska krv

0,5 1,3 mmol/L

0,36 0,75 mmol/L
0,9 1,7 mmol/L
do 1,25 mmol/L

Cerebrospinalna tenost

do 2,8 mmol/L

Urin

5,5 - 22 mmol/d

Napomene
1. Ako se prilikom uzimanja krvi iz bilo kojeg razloga produi staza, potrebno je da se, posle
uvodjenja igle u venu, skine poveska i pusti da krv slobodno cirkulie najmanje 2 min pre
uzimanja uzorka.
2. Ako se odmah ne izvri deproteinizacija krvi, koncentracija laktata, kao proizvoda glikolize,
vrlo brzo raste i to na sobnoj temperaturi oko 20% za 3 min, i 70% za 30 min.
3. Smatra se da je metafosforna kiselina pogodnije sredstvo za deproteinizaciju od perhlorne
kiseline, zbog toga to perhlorna kiselina ne taloi mukoproteine i usporava enzimsku
reakciju. Metafosforna kiselina je smesa HPO3 i NaPO3, koja u rastvoru formira polimere
(HPO3)n i u kiseloj sredini hidrolizuje do ortofosforne kiseline. Poto ortofosforna kiselina ne
taloi proteine, ovaj reagens stajanjem gubi svoje dejstvo.
4. Fizika aktivnost dramatino utie na koncentraciju laktata u krvi. ak i pomeranje miia
nogu leeih pacijenata dovodi do poveavanja koncentracije laktata iznad normale.
5. Koncentracija laktata u plazmi je za oko 7% vea od one u punoj krvi.

ODREIVANJE PIRUVATA
Pod dejstvom laktat-dehidrogenaze (LDH), piruvat se redukuje do laktata, pri cemu se NADH
oksiduje do NAD+. Smanjenje koncentracije NADH je srazmerno sadraju piruvata u uzorku, a meri
se spektrofotometrijski na 340 nm.
Piruvat + NADH + H+ L-laktat + NAD+
Pri pH 7,5 reakcija tee s leva na desno, tj. u obrnutom smeru u odnosu na metodu za odredjivanje
laktata.

Referentne vrednosti
U mirovanju, nate:
Venska krv

0,03 - 0,10 mmol/L

Arterijska krv

0,02 - 0,08 mmol/L

Cerebrospinalna tenost:
Urin:

0,06 - 0,19 mmol/L

do 1,0 mmol/d

Napomene
1. Piruvat u krvi je veoma nestabilan, pa se njegova koncentracija u krvi znaajno smanjuje ve
posle 1 min od uzimanja krvi. U supernatantu posle deproteinizacije metafosfornom
kiselinom, stabilan je do 6 dana na sobnoj temperaturi ili do 8 dana u friideru.
2. Standard piruvata ne sme dugo da se uva, zbog polimerizacije piruvata u rastvoru.