‫תשובות לבוחן‬

‫‪ .1‬פלסמיד ‪ -‬מקטע ‪ DNA‬מעגלי בחיידקים‪ ,‬שאינו חלק מה‪ DNA-‬הכרומוזומלי‪ .‬הפלסמיד‬

‫מכיל גנים שאינם חיוניים לחיידק על מנת לשרוד בתנאים רגילים‪.‬‬

‫‪ -Alkaline lysis .2‬שיטה בה מפורקים ממברנות החיידקים ע"י שימוש בממס אלקאלי‬
‫)בסיסי(‪ ,‬אשר מכיל ‪) SDS‬דטרגנט‪ -‬סודיום דודציל סולפט( ו‪) NaOH -‬בסיס חזק(‪ .‬השכבה‬
‫הפוספוליפידית הכפולה מפורקת באמצעות הדטרגנט בעוד הבסיס עושה דנטורציה‬
‫לחלבונים המבניים שבממברנה‪.‬‬
‫חשיפת החיידק לדטרגנט יוני‪ ,‬בעל ‪ pH‬גבוה‪ ,‬פותחת את דופן התא‪ ,‬עושה דנטורציה ל‪-‬‬
‫‪ DNA‬כרומוזומאלי וחלבונים‪ ,‬ומשחררת ‪ DNA‬פלסמידי אל התרחיף‪.‬‬
‫‪ - Boiling lysis‬שיטה בה משתמשים בחום כדי לעשות דנטורציה לחלבוניי ממברנת‬
‫החיידק‪ ,‬לאחר שתרבית הושרתה ב‪ Triton X-100 & Lysosyme -‬אשר מחלישים את דופן‬
‫התא‪ .‬החימום נעשה ל‪ 100 -‬מעלות צלזיוס‪ .‬בנוסף החום פוגע בקשרי המימן בין הבסיסים‬
‫ב‪ DNA -‬הכרומוזומאלי‪ ,‬אך לא בפלסמיד‪ .‬בעת קירור המערכת הפלסמיד חוזר למצב תקין‪.‬‬

‫בשתי השיטות יש שימוש בכרומטוגרפיה על בסיס צנטריפוגה‪.‬‬

‫‪ .3‬החלפת יוני הנתרן שבתמיסה ביוני אשלגן תגרור הרחקה של החלבונים הבקטריאליים‪,‬‬
‫שאריות מקטעי ה ‪ DNA‬הכרומוזומלי‪ ,‬ודפנות תאים שבורות‪ .‬הכנסת התערובת לצנטריפוגה‬
‫תשאיר רק את הפלסמידים‪.‬‬

‫‪ .4‬אתנול ואיזופרפנולן משמשים לשיקוע ה ‪ DNA‬ולאחר צנטריפוגה ניתן לחלץ אותו‪.‬‬

‫‪ .5‬תפקיד ה‪ RNAse -‬הוא לבצע חיתוך בגדיל ה‪ RNA -‬ולגרום לפירוק הרצף‪ .‬במקרה זה‬
‫מנקה את ה ‪ DNA‬משאריות ‪RNA.‬‬

‫‪ -Agarose .6‬הג'ל דרכו מורצים החלבונים בתהליך ההפרדה‪ .‬משמש להפרדה ע"פ גודל‪.‬‬
‫‪ -Ethidium bromide‬תרכובת אורגנית שמשמשת לצביעת חומצות גרעין‪ .‬בחשיפה ל ‪UV‬‬
‫זורח באדום כתום‪ .‬כשברומיד נקשר ל ‪ DNA‬הוא הופך למוטגן חזק‪.‬‬
‫‪ -SDS+NaOH‬הדטרגנתים המשמשים בשיטת ‪ Alkaline lysis‬לפירוק התא ודנטורציה של‬
‫החלבונים שלו‪.‬‬
‫‪ – Potassium Acetate‬מוריד את דרגת ה ‪ pH‬והיונים שלו מחליפים את אלו של הסודיום‬
‫‪ – Ethanol‬משמש להשקעת ה‪ DNA-‬בשיטת ה‪.Alkaline lysis-‬‬
‫‪ – Lysosyme + Triton X-100‬משמשים להרס דופן התא בשיטת ה‪.Boiling lysis-‬‬
‫איזופרופנול – משמש לשיקוע ‪ DNA‬בשיטת ה‪.Boiling lysis-‬‬